同轴静电纺丝法制备芯—壳结构pegfp-n1-bmp-2plga质粒复合材料及其相关研究

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1、分类号R783.1UDC616.31密级公开同轴静电纺丝法制备芯-壳结构pEGFP-N1-BMP-2/PLGA质粒复合材料及其相关研究徐宏宇培养类别全日制学位类型学术学位一级学科(专业类)口腔医学二级学科(专业)口腔临床医学（修复）研究方向口腔生物材料指导教师贾骏副教授（副主任医师）培养单位口腔医院修复科二O一五年五月第四军医大学硕士学位论文第四军医大学硕士学位论文第四军医大学硕士学位论文第四军医大学硕士学位论文缩略语表缩略词英文全称中文全称ALPAlkalinephosphatase碱性磷酸酶BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白CDSCodingsequence编码

2、序列DMSODimethylSulphoxide二甲基亚砜ECMextracellularmatrix细胞外基质EGFEpidermalGrowthFactor表皮生长因子FITCFluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素GAMgeneactivatedmatrix基因活化基质GFgrowthfactor生长因子GFPgreenfluorescenceprotein绿色荧光蛋白hBMPhumanBoneMorphogeneticProtein骨形成蛋白MMPmatrixmetalloproteinase基质金属蛋白酶3-(4,5-dimethyl-2-thiazo

3、lyl)-2,5-diphenyl-2-H-MTT四氮唑盐tetrazoliumbromideNGFNervegrowthfactor神经生长因子PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应PDGFPlatelet-derivedgrowthfactor血小板衍生因子PDLSCPeriodontalligamentstemceils牙周膜干细胞PEIPolyethylenimine聚乙烯亚胺-1-第四军医大学硕士学位论文聚乳酸－羟基PLGApolylactic-co-glycolicacid乙酸共聚物SFSilkFibmin丝素蛋白-2-第四军医大学硕士学位论文同

4、轴静电纺丝法制备芯-壳结构pEGFP-N1-BMP-2/PLGA质粒复合材料及其相关研究硕士研究生：徐宏宇导师：贾骏副教授第四军医大学口腔医院修复科，西安710032资助基金项目：国家自然科学基金（81271136）中文摘要基因活化基质（geneactivatedmatrix，GAM）是将可降解生物支架材料与质粒DNA载体相结合，形成一种基因局部释放系统。GAM既能够提供一个具有一定机械强度、可降解的多孔支架供细胞长入，为种子细胞提供空间支持；又可以通过支架材料直接承载基因如质粒DNA或基因质粒与转染试剂的混合物，继而局部转染种子细胞，分泌促进组织修复的生长因子，特异性诱导种子细胞的定

5、向分化，最终促进组织的再生。静电纺丝是一种制备纳米级纤维的方法。通过静电纺丝制备的纤维膜具有比表面积高、孔隙率大等优点，类似于天然细胞外基质的结构，有利于细胞的粘附、生长、繁殖。传统的静电纺丝方法制备GAM，需将可降解高分子材料与包含质粒的质粒载体混合在一起。电纺过程中质粒不可避免的会接触到有机溶剂，这对质粒的活性有一定影响。此外，混纺形成的纳米纤维支架中的基因释放较快，存在突释效应。本研究选择同轴静电纺丝方法来制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物（polylactic-co-glycolicacid，PLGA）与骨形成蛋白-2（BoneMorphogeneticProtein-2，BMP-2）

6、质粒微球的芯壳型纤维，构建壳层是PLGA，芯层是BMP-2质粒微球的铅笔样纳米纤维结构，旨在制备一种兼有良好生物相容性和缓释效果的GAM。-3-第四军医大学硕士学位论文研究目的：通过同轴静电纺丝技术，制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物poly（lactic-co-glycolicacid，PLGA）与BMP-2质粒微球的芯壳型纤维，在此基础上检测纤维的微观形貌及理化性能，并与人牙周膜干细胞共培养，检测生物相容性并测量转染效率及BMP-2表达，为今后GAM进一步应用提供研究基础。研究方法：1、双酶切载体，扩增目的片段，构建pEGFP-N1-BMP-2重组质粒，PCR/测序鉴定质粒。大量扩增、提取

7、重组质粒。2、同轴静电纺丝法制备PEI/PLGA纤维，确定适合同轴电纺的参数范围。同轴静电纺丝法制备pEGFP-N1-BMP-2/PLGA纤维，检测纤维的微观形貌、理化及降解性能。3、原代培养人牙周膜干细胞，HE染色观察细胞形态，流式细胞术鉴定干细胞表面分子标志物，成骨成脂定向诱导后染色验证其多向分化能力。将牙周膜干细胞与pEGFP-N1-BMP-2/PLGA纤维共培养，检测生物相容性，激光共聚焦显微镜观察转染情况，测量转染效率及BMP-2表达