二维电泳和质谱技术筛选寻常型银屑病皮损差异表达蛋白

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1、密级硕ｄｒ学位论文．戀二维电泳和质谱技术筛选寻常型银屑病皮损差异表达蛋白：戴逸楠作者妓名指导教师：张庆瑞学科专业：皮肤病与性病学大连医科大学■？’＇－‘；八，＇７．＇＊■．－．．．．．．．．－－．．．‘．－一ｆ沒妾＼中图分类号密级二维电泳和质谱技术筛选寻常型银屑病皮损差异表达蛋白巧逸捕：计学位论文：％表格：１个插图：７指导教师：张庆瑞教授申请学位级别；硕±学位学科；皮肤病与性病学—培养单位：中国人民解放军第２０２医院完成时间：二０五年王月

2、答辩委员会主席：许雪珠独创性齊明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：月日年＿＿＿＿＿关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文

3、被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进斤检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＂＂本学位论文属于（请在Ｗ下相应方框内打Ｖ）；１．保密□，在＿＿年解密后适用本授权书。２．不保密口。作者签名：日期；年月日导师签名：日期：年月日目录一＞猜要７一（）中文摘要７（二）英文摘要９二＞政１３一（）前言１３（二）材料和方法１４１．材料１４１．１标本１４１．２试剂１４１．２仪器与设备１４２？方法１４２．１标本采集１４２．

4、２标本处理１４２．３双向凝胶电泳１５２．４图像分析１５２．５酶解及质谱鉴定化２．６蛋白鉴定及数据库查询１６（Ｓ）结果１６Ｌ二维凝胶电泳结果１６２．质谱鉴定结果化（四）讨论１７（五）结论２０（六）参考文献２１Ｈ、综述２５一（）综述２５（二）参考文献２８五＞附表３１六、附图３３毛、攻读学＾间发表文章情况３５Ａ＞ｍ巧３６中文摘要二维电泳和质谱技术筛选寻常型银屑病皮损差异表达蛋白刖頁银屑病又名牛皮痕，是临床上常见的容易病情反复的慢性炎症性皮肤病。组织病理学研究提示多

5、表现为角质层的变厚、不完全角化，颗粒层变薄或消失，棘层的变厚，角质层中毛细血管异常增生等。近年来，蛋白质组学技术的发展为寻找一敏感二－、特异的疾病标志物提供了条有效的途径。我们采用维凝胶电泳（ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｅｌｅｃｔｒｏｈｏｒｅｓｉｓ），然后利用基质辅助激光ｐ，２ＤＥ对所提取蛋白进行分离－／飞行时间质谱ＭＡＬＷ－－－解析电离ＴＯＦＴＯＦＭ》和生物信息学等技术进行鉴定，通过比较ＰＳ患者皮损与正常人相关的蛋白质表达的差异进行实验分析，为ＰＳ的发病机制研究及治疗提供有价值的线索。材料和方法一、标本标本取自我院皮肤科入院首次就诊的寻常型ＰＳ

6、患者１６例，其中男８例，女８例，同时选择性别２００、年龄与之匹配的名健康人（ｎ诊体检者）为对照。其中男１例，女１０例。二、方法取ＰＳ患者皮损和正常对照部位皮肤全层组织，面积为化５Ｘ０．５ｃｍ，生理盐水‘－７０Ｃ６－Ｉ清洗后冰箱保存。１１８Ｕｍ厚度冰冻组织切片后置于ＬＥＣＡ薄膜载玻片，ＬＥＩＣＡ激光切割仪进行组织切割，分别切取角质层组织及真皮层组织，提取蛋白。按蛋白浓度不同提取等量蛋白，，进行双向凝胶电泳均采用ｃｙ３和ｃｙ５英光染色。ＤｅＣＤ６５ｙｄｅｒ２．软件对扫描图像的图像分析软件分析，强度校正，点检测，背景差分，同质化和匹配处理。选取图像分

7、析得到的差异蛋白质点，切取这些点，脱‘１Ｌ３７色后进行胶内酶解，２０１ｇ／膜酶Ｃ消化过夜。将提取得到的化段溶解于５０％Ｚ－化就兰氣乙酸Ｊ晴，并与等体积饱和（ＣＣＡ）混合均匀基质，在不诱钢点样仪上点样，风千后进行质谱鉴定分析。Ｈ、结果判定将狀质量指纹数据在蛋白质序列数据库中进行捜索，搜索引擎为Ｍａｓｃｏｔ（ｈｔｐ：ｗｗｗｔｒｉｃｉｅｎｃｅｏｍｗｉＰ。：／／．ｍａｘｓ．ｃ），数据库选用Ｓｓｓｒｏｔ