不同栽培品种灵芝抗氧化作用及灵芝多糖分离纯化、免疫活性研究

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1、学位论文不同栽培品种灵芝抗氧化作用及灵芝多糖分离鈍化、免疫活性研究ＳＵｉｄｖｏｎＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔＥｆｆｅｃｔｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＣｕｌｔｉｖａｒｓＧａｎｏｄｅｒｍａＬｕｃｉｄｕｍａｎｄＳｅｐａｒａｔｉｏｎ．ＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｅＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ泻胖平指导教师姓名：刘友平研究员罗霞割研宛员申请学位级别：硕±专业名称：药物化学０５５论文提交时间：２１年４月论文答辩时间：２０１年５月二〇－五年五月中文摘要一灵

2、芝（Ｇａｎｏｄｅｎｎａ）是种多孔菌科真菌类药材，《中国药典》（２０１０版—部）规定灵芝为赤芝仿Ｗ。沁７７ｎａ／ｗｃ／丸Ｗ１ＳＳ．巧打．Ｋａｒｓｔ．或紫芝（？饼７＂無眉。（巧）ＸｕｅｔＺｈａｎｇ干燥的子实体。灵芝作为我国传统医药中最负盛名的一＂，药用历史己有２０００多年珍贵药材之。传统中医认为灵芝具扶正固本、补＂，现代研究表明灵芝具有免疫调节中益气、延年益寿的功效、抗肿瘤、抗衰老、降血糖及降血脂等多种作用，在食品、化妆品、保健食品及药物开发等领域具有广阀的前景，灵芝含有多糖、兰萌、生物碱等有效成分，其中灵芝多糖（Ｇａｎ

3、ｏｃ／ｅｒｍａ一／ｍｃＷ麵Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＧＬＰ）是主要的活性物质之。本研究通过比较不同栽培品种灵芝提取物清除留自由基、清除超氧阴离子、清除ＤＰＰＨ作用＾＾１及酪氨酸酶抑制活性的大小来评价其抗氧化能力的差别；采用水提醇沉、超滤膜过滤分级、离子交换和凝胶过滤等分离纯化技术对灵芝子实体多糖进行分离纯化，并运用物理、化学手段初步研巧多糖的性质、构型、单糖组成，：、分子量；在体外进行对灵芝多糖免疫活性的评价内容包含对大鼠脾淋己细胞增殖的影响，对ＲＡＷ２６４．７巨唾细胞生成ＮＯ能力、吞幢能力、增殖的影响，灵

4、芝多糖的免疫活性：。实验包含Ｗ下内容１．不同栽培品种灵芝提取物的抗氧化作用研究通过对ＺＬａ（灵芝ａ），ＺＬｂ（灵芝ｂ），ＺＬｃ（灵芝Ｃ），ＺＬｄ（灵芝ｄ），ＺＬｅ（灵芝ｅ），ＺＬｆ（灵芝ｆ）６个不同栽培品种品种的灵芝样品的清除轻自由基、清除超氧阴离子、清除ＤＰＰＨ作用及酪氨酸酶抑制活惶为评价指标，所巧灵芝水提取物和醇提物的抗氧化作用，结果表明６种灵芝的醇提物和水提物对；ＤＰＰＨ都具有很强的清除作用．，其中Ｚｌｄ水提物作用最强，ＩＣｓｏ芳００３ｇ心。仅Ｚｌｄ水提物和醇提物同时具有清除超氧阴离子的作用。ＺＬ

5、ｂ、ＺＬｃ及ＺＬｄ的提取．物同时具有清除哲自由基的作用，其中ＺＬｄ的水提物对径自由基清除作用最好－１ＩＣ５０值为７．１４七。６种灵芝的醇提物具有很强的酪氨酸酶抑制活惶．其中ＺＬｄｇ－６ｉｉ１作用最强，０浓度。而种灵芝水提物的酪氨酸酶抑制活怯较醇提物弱在ｇ时ＺＬｄ具有较高的活怯，抑制率为６６．７７％。Ｉ２．灵芝多糖的提取、分离与纯化２．１ｍ芝多糖的提取本实验采用传统水提醇沉的方法从灵芝子实体中提取灵芝多糖，综合考虑多ａ’方面因素确定灵芝多糖的提取条件为：料液比：２０），提取温度（９０Ｃ），提取时间

6、（３ｈ），提取次数２次。利用多糖不溶于高浓度的乙醇的性质，在多（）°、糖提取液中加入己醇至己醇终浓度为８０％，于４Ｃ下静置２化，然后离屯得到灵芝多糖粗提物。２．２灵芝多糖的除蛋白因为灵芝多糖粗提物中往往不可避免含有与蛋白共价键结合的蛋白多糖，在纯化多糖必须除去蛋白质及游离的蛋白质和多化，本实验采用Ｓｅｖａｇ法除蛋白具体的实验方法为为：按多糖提取液体积的１／４加入Ｓｅｖａｇ试剂，振荡后静置，、，重复数次直至无蛋白质层最后离屯除去蛋白质层。２．３灵芝多糖的透析提取的灵芝多糖含有无机盐等小分子化合物，实验方法为：将

7、灵芝多糖提取液装入己预处理的透析袋中，放在蒸溜水下透析７２ｈ，然后冷冻干燥得到灵芝多糖粗提取物。２．４寅芝多糖的超滤膜过滤分级超滤是一种利用压力推动的膜分离过程，从而分离不同粒径大小的化合物。超滤膜过滤分级可将多糖样品按分子量的大小初步粗分成几段，具体的实验方法为：将灵芝粗多糖粉末用适量的蒸饱水溶解，多糖溶液经０４５ｍ的滤．ｎ膜过滤后，依次用执ｏｍａｘ５、１０（ＫＤ）依次过滤，别得到ＧＬＰＩ、ＧＬＰＩＩ、ＧＬＰ阻Ｈ一个部分，，。送种用超滤法而得到的多糖溶液只是个具有分子量宽分布的组分一，则需要进行进步纯化要

8、想获得更纯的多糖样品。２．５灵芝多糖的柱层析分离纯化离子交换色谱法与分子筛凝胶过滤联合使用是多糖组分最常用的纯化方法。＞离子交换色谱法其原