不同加载频率拉应力对兔髁突软骨细胞增殖分化的影响

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1、不同加载频率拉应力对兔髁突软骨细胞增殖分化的影响Effectoftensilestressindifferentfrequencyontheproliferationanddifferentiationofrabbitmandibularcondylarchondrocytes作者姓名：王亚斐领域（方向）：口腔正畸学指导教师：刘畅副教授类别：口腔医学硕士答辩日期：2015年5月26日中文摘要不同加载频率拉应力对兔髁突软骨细胞增殖分化的影响实验目的：探讨不同加载频率的拉应力对兔髁突软骨细胞增殖、分化的影响，进而明确其对软骨内成骨过程的作用，以期为临床上寻找快速、高效

2、的促进颞下颌关节改建及下颌骨生长的方法提供理论依据。实验方法：体外分离2周龄新西兰兔髁突软骨细胞，取第2代细胞接种于特制加力板上，采用四点弯曲细胞力学加载仪对细胞进行加载，根据加载频率分为静止性（即加载频率为0HZ)加力组，周期性（加载频率分别为0.1HZ，0.5HZ，1HZ）加力组，每天加力2h，共3天，力值均为2000μ，相当于细胞发生0.2%的形变量。同时设置未加力组细胞作为空白对照，其余条件相同。细胞行力学加载，倒置相差显微镜观察细胞形态、排列。采用CCK8检测细胞增殖水平，流式细胞仪测定细胞DNA含量(S期细胞百分数），计算增殖指数(PI)。实时荧光定量

3、RT-PCR检测成软骨相关基因(Sox9,col2a1)及老化相关基因(Runx2，col10a1)的表达水平。实验结果:静止性(0HZ)加力组细胞增殖速率显著提高，周期性(0.1，0.5，1HZ)加力组细胞的增殖速率显著性降低(P<0.01);静止性(0HZ)加力组与其他加力组及对照组相比，DNA合成量增多(P＜0.05），增殖指数显著性升高(P＜0.01）。Sox9,Runx2的表达具有一致性，表现为在较高频率组即0.5HZ组和1HZ组表达最高，0.1HZ组次之，静止性(0HZ)加力组最低（与对照组相比P＜0.01）。周期性(0.1，0.5，1HZ)加力组的c

4、ol2a1的表达高于静止性加力(0HZ)组和对照组，而col10a1的表达在高频率组即1HZ组最高，静止性(0HZ)加力组最低。结论:不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化有差异性影响。提示可以通过改变加载模式调控髁突软骨细胞软骨内成骨过程。关键词：软骨内成骨，周期性拉应力，静止性拉应力，增殖，分化IAbstractEffectoftensilestressindifferentfrequencyontheproliferationanddifferentiationofrabbitmandibularcondylarchondrocytesObjective:

5、Toinvestigatethebiomechanicalmechanismofthegrowthandreconstructionofmandibularcondylar,theeffectoftensileloadingswithvariousfrequenciesontheproliferationanddifferentiationofmandibularcondylarchondrocytesintheprocessofendochondralossificationwasevaluated.Method:Mandibularcondylarchondr

6、ocytes(MCC)fromtwo-week-oldNewZealandrabbitswereculturedinvitro.ThesecondgenerationofMCCwereexposedtodifferentfrequencyoftensilestress(0,0.1,0.5,1HZ)at2000uforaperiodof2hperdayfor3daysusingfour-pointbendingsystemInthecontrolgroup,cellswereculturedonthesimilarplateandkeptinthesameincub

7、atorwithoutmechanicalstressloading.MorphologyofMCCwasobservedbyinvertedphasecontrastmicroscopeafterexposuretomechanicalloading.TheproliferationofarticularchondrocytewasdeterminedbyCCK-8assay.Flowcytometry（FCM)wasusedtoexaminethecontentofDNAandtheindexofproliferation(PI).Thegeneexpress

8、ionle