tlr9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的影响

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1、分类号：R593.24学校代码：10392学科专业代码：100201学号：2121003180硕士学位论文TLR9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的影响RenaldamageisamelioratedbyrestrainingTollreceptor9inSystemiclupuserythematosuscombinedatherosclerosismousemodel学位类型：学术型硕士所在学院：第二临床医学院申请人姓名：林烨学科、专业：内科学（风湿）导师：林玲教授研究起止日期：201

2、3年7月至2015年3月答辩委员会主席：洪华山教授答辩日期：2015年06月02日二○一五年六月12目录中文摘要……………………………………………………………………..….………………………4英文摘要……………………………………………………………….…..……………………………7前言……………………………………………………………………………………………………….12材料和方法…………………………………...………………………………....………………….12结果…………………………..………………………

3、…………………………..………………………24讨论……………………………………………..………………………………………..………………32结论……………………………………………………………………..……………..…………………34参考文献………………………………………………………………..……………..………………35综述……………………………………………………………………….….…….…....………………36致谢……………………………………………………………………….….…….…....…………….

4、.433TLR9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的影响中文摘要【目的】探讨TLR9在系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠中对肾脏损伤的作用。【方法】本实验室将降植烷腹腔注射进ApoE-/-小鼠，诱导建立系统性红斑狼疮伴动脉粥样硬化小鼠模型；并在此基础上腹腔注射TLR9抑制剂IRS869进行干预后，检测血清中的抗ds-DNA抗体水平和肾脏组织中的IgG、补体C3、TLR9及TLR9通路分子和VEGF表达水平。ApoE-/-C57BL/6小鼠和C57BL/6小鼠随机分为6组：C57BL/6+生理盐

5、水对照组（A组），ApoE-/-+生理盐水对照组（B组），C57BL/6+降植烷组（C组），ApoE-/-+降植烷组（D组），C57BL/6+降植烷+IRS869组（E组），ApoE-/-+降植烷+IRS869组（F组）。高脂饮食喂养12周，处死动物。取血清进行ELISA检测抗ds-DNA；取肾脏组织提取蛋白和RNA分别进行WesternBlot和Real-timePCR检测TLR9及下游信号通路分子和VEGF表达情况；取肾脏组织进行石蜡包埋，免疫荧光检测IgG和补体C3，Massion染色检测肾脏组织

6、纤维化程度。【结果】1.免疫效应指标1.1血清抗ds-DNA抗体水平（1）降植烷组血清抗ds-DNA抗体水平较C57BL/6对照组明显升高（P<0.05），ApoE-/-降植烷组相较ApoE-/-对照组明显升高（P<0.05），ApoE-/-降植烷组与C57BL/6降植烷组差异没有统计学意义（P>0.05）。（2）降植烷+IRS869组相较降植烷组明显下降（P<0.05），ApoE-/-降植烷+IRS869组较ApoE-/-降植烷组明显下降（P<0.05）。1.2肾脏免疫荧光情况（1）直接免疫荧光显示降

7、植烷组、ApoE-/-降植烷组IgG在肾小球系膜毛细血管袢成明显连续性分布，对照组偶尔可见散在颗粒状分布，定量分析降植烷组相对于C57BL/6对照组、ApoE-/-降植烷组相对于ApoE-/-对照组有统计学意义（P<0.05）；间接免疫荧光显示降植烷组、ApoE-/-降植烷组补体C3在肾小球系膜毛细血管袢成明显颗粒状分布，对照组偶尔可见散在颗粒状分布，定量分析降植4烷组相对于C57BL/6对照组、ApoE-/-降植烷组相对于ApoE-/-对照组有统计学意义（P<0.05）。（2）注射TLR9抑制剂后降植

8、烷+IRS869组、ApoE-/-降植烷+IRS869组分别相对于降植烷组、ApoE-/-降植烷组，在肾小球系膜毛细血管袢上，IgG和补体C3均明显减少，定量分析差异具有统计学意义（P<0.05）。2.TLR9信号通路各分子表达2.1肾脏TLR9及下游信号通路分子蛋白水平表达情况（1）Western-blot分析，降植烷组、ApoE-/-降植烷组TLR9、MyD88、NF-κB相对对照组明显升高，差异具有统计学意义（P<0.05）；ApoE