mmp-3与ccn2在牙髓损伤与修复作用中的研究——对人牙髓细胞迁移的影响

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1、MMP-3与CCN2在牙髓损伤与修复作用中的研究------对人牙髓细胞迁移的影响StudiesofMMP-3andCCN2intheprocessofdentalpulpinjuryandrepair------theeffectofcellmigrationinthehumandentalpulpcells作者姓名：王贺专业名称：口腔临床医学指导教师：张颖丽教授学位类别：口腔医学硕士答辩日期：2015年5月26日MMP-3与CCN2在牙髓损伤与修复作用中的研究------对人牙髓细胞迁移的影响目的：在牙髓损伤修复过程中通过观察MM

2、P-3与CCN2诱导体外培养人牙髓细胞细胞迁移率的变化以及观察MMP-3对CCN2mRNA表达的影响，阐述MMP-3促进牙髓损伤修复的功能并揭示其机制。方法：选取年轻患者因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙，取出牙髓，以酶消化联合组织块法获得人牙髓成纤维细胞，首先采用transwell小室培养法进行两部分实验：①MMP-3（100ng/ml）和CCN2(100ng/ml)分别诱导人牙髓成纤维细胞，观察不同时间（12h、24h和48h）作用下，细胞迁移活性的变化；②实验分6组即空白对照组、MMP-3组（100ng/ml）、antiCCN2（1

3、ug/ml）组、MMP3+antiCCN2（0.01ug/ml）组、MMP3+antiCCN2（0.1ug/ml）组和MMP3+antiCCN2（1ug/ml）组，观察24h后牙髓成纤维细胞迁移活性的变化；采用RT-PCR方法检测经不同时间（30min、1h、3h、6h、9h、12h）MMP-3诱导后人牙髓成纤维细胞中CCN2mRNA的表达。结果：Transwell小室细胞迁移实验分两部分，第一部分中实验组与对照组相比，MMP-3和CCN2在12h组、24h组和48h组均有显著性统计学差异（P<0.001）；MMP-3和CCN2实验组

4、各时间点相比，12h、24h和48h各组间两两比较均有显著差异(P<0.001)，但24h与48h组间比较无显著性差异(P>0.05)；第二部分中，空白组与anti-CCN2组间比较无显著性差异(P>0.05)，与其它各组两两比较均有显著性统计学差异（P<0.001）；MMP-3组分别与MMP3+antiCCN2（0.01ug/ml）组、MMP3+antiCCN2（0.1ug/ml）组和MMP3+antiCCN2（1ug/ml）组两两比较，均有显著性统计学差异（P<0.001）；RT-PCR方法中，MMP-3诱导后CCN2mRNA的表

5、达呈时间依赖性显著变化，在30min时达到峰值。I结论：MMP-3在促进细胞迁移的过程中可被antiCCN2抑制，表明当CCN2存在时MMP-3可促进细胞迁移。CCN2也能够促进细胞迁移。加之，MMP-3可诱导CCN2mRNA的表达，表明MMP-3通过上调CCN2促进牙髓损伤修复。CCN2在MMP3促进牙髓损伤修复过程中的作用不容小觑，这为临床工作中研制新的盖髓剂提供良好的理论基础，而且也提供了新的牙髓损伤生物学治疗方法。关键词：牙髓损伤修复、人牙髓成纤维细胞、基质金属蛋白酶-3、结缔组织生长因子IIStudiesofMMP-3and

6、CCN2intheprocessofdentalpulpinjuryandrepair------theeffectofcellmigrationinthehumandentalpulpcellsObjective：DuringdentalpulpinjuryandrepairprocessobservethechangesoftherateofcellmigrationinthecultivatehumandentalpulpcellsinvitrowhichareinducedMMP-3andCCN2andtheeffectofM

7、MP-3onthemRNAofCCN2expression,whicharetoinvestigateMMP-3promotingdentalpulprepairfunctionsandrevealitsmechanism.Method:Thehumanpulpfibroblastswereobtainedfromthehealthythirdmolarswhichwereextractedfororthodonticandimpactedreasonbythetissueblackenzymolyticmethod.Firstly,

8、weconducedtheexperimentsintwopartsbyTranswellmethod.Respectively,MMP-3（100ng/ml）andCCN2（100ng/ml）wereinducedin