mir-212132在宫颈癌细胞中的作用及其机制研究

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1、分类号：R34学校代码：10062密级：学号：2011601036博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：miR-212/132在宫颈癌细胞中的作用及其机制研究TITLEmiR-212/132modulatesthegrowth,migrationandinvasionofhumancervicalcancercells一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：赵健丽指导教师：汤华教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R34学校代码：10062密级：学号：20116010

2、36学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：miR-212/132在宫颈癌细胞中的作用及其机制研究TITLEmiR-212/132modulatesthegrowth,migrationandinvasionofhumancervicalcancercells一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：赵健丽指导教师：汤华教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作

3、取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用

4、本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要【目的】微小RNA（microRNA,miRNA）是一类非编码单链小分子RNA，长度约为22nt，在转录水平或者转录后水平调控基因的表达，在多种生理和病理过程中发挥着很重要的作用，如细胞的分化、生长、凋亡以及肿瘤的发生发展等。近期研究表明，miRNA可以通过调节其靶基因的表达参与宫颈癌的发生和发展，从而发挥类似癌基因或抑癌基因的功能。本研究的目的是探寻miR-212

5、/132基因簇是否参与了宫颈癌细胞生长、迁移、侵袭和细胞周期的调控过程，以及预测和确定miR-212/132直接作用的靶基因，从而阐明miR-212/132对宫颈癌发生和发展的分子机制。【方法】首先，我们利用实时定量PCR方法检测了miR-212和miR-132在人类宫颈癌组织和癌旁正常组织中的表达差异。接着，用集落形成实验检测了miR-212和miR-132对宫颈癌细胞系HeLa和C33A增殖能力的影响，并用流式细胞术检测了细胞周期的变化。此外，用transwell迁移和侵袭实验检测了miR-212和mi

6、R-132对宫颈癌细胞系HeLa和C33A迁移和侵袭能力的影响，并用westernblot和实时定量PCR检测了EMT相关分子标志物的表达差异。随后，我们用生物信息学方法预测并筛选了miR-212和miR-132共同的候选靶基因SAMD2。通过实时定量PCR和westernblot方法检测了在宫颈癌细胞系中miR-212和miR-132对SMAD2的mRNA和蛋白水平的影响，并用EGFP荧光报告载体实验验证了miR-212和miR-132对SMAD2的直接靶定作用。最后，我们在宫颈癌细胞系中过表达或敲降SM

7、AD2后，用上述相同的方法检测了SMAD2对细胞功能的影响，并用挽救实验验证了SMAD2对miR-212/132功能上的挽救作用。【结果】实时定量PCR结果显示，与癌旁正常宫颈组织相比，宫颈癌组织中的miR-212和miR-132表达明显降低，而SMAD2的表达明显升高。在宫颈癌细胞中过表达miR-212和miR-132后，不仅细胞增殖能力减弱、细胞周期G1/S期转换受到阻滞，而且上皮细胞分子标志物E-cadherin表达增加、间质分子标志物Vimentin表达减少、细胞的迁移和侵袭能力减弱。实时定量PCR

8、和westernblot实验结果显示在宫颈癌细胞中过表达或封闭miR-212和miR-132后，SMAD2的mRNA表达水平和蛋白表达水平有所降低或升高。荧光报告载体实验结果显示I天津医科大学博士学位论文miR-212和miR-132能够直接作用于SMAD2的3'UTR，并对其表达进行转录后调控。在宫颈癌细胞中过表达SMAD2后，细胞增殖能力增强、细胞周期G1/S期转换加强、E-cadherin表达减少、Vime