adam17介导的cd163表达调控对prrsv感染的影响

《adam17介导的cd163表达调控对prrsv感染的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、密级;论文编号:中国农业科学院学位论文ADAM17介导的CD163表达调控对PRRSV感染的影响ModulationofCD163ExpressionbyMetalloproteaseADAM17RegulatesPorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirusEntry硕士研究生：牛军伟指导教师：王玉娥申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医微生物及其分子生物学培养单位：哈尔滨兽医研宄所研宄生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成_•■尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外

2、，论文中不包含其他人己经发表或搡写过的研究成果，也不包含为获得中崮农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料•与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并秦示了谢意•关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅和借阅，可以采用穸印、缩印或P雄等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名:导师签名：时间：彳厂年石月r曰密级:论文编号:中国农业科学院学位论文ADAM17介导的CD1

3、63表达调控对PRRSV感染的影响ModulationofCD163ExpressionbyMetalloproteaseADAM17RegulatesPorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirusEntry硕士研究生：牛军伟指导教师：王玉娥申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医微生物及其分子生物学培养单位：哈尔滨兽医研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationModulationofCD163ExpressionbyMetallo

4、proteaseADAM17RegulatesPorcineReproductiveandRespiratorySyndromeVirusEntryM.S.Candidate：NiuJun-weiSupervisor：Prof.WangYu-eDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinaryMicrobiologyandMolecularBiologyMay2015中国农业科学院摘要猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)

5、引起的严重危害养猪业的传染病之一。根据核酸序列的差异，PRRSV被划分为欧洲型和美洲型毒株。2006年5月以来，我国暴发的被称为“高热综合症”的猪病，即为变异的美洲型高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）所致。猪肺泡巨噬细胞(PAM)是PRRSV入侵猪体的靶细胞，已发现在PAM上存在三种主要的PRRSV细胞受体：硫酸乙酰肝素(HS)、唾液酸粘附素(Sn)和清道夫受体CD163。HS的作用是吸附PRRSV到细胞表面，Sn可以加强吸附作用并介导PRRSV内吞进入胞内，CD163则是随PRRSV一同进入胞内介导病毒的脱衣壳和病毒基因组的释放。近年研究发现，将猪源CD163分

6、子转染至PRRSV非允许细胞，使得细胞稳定表达CD163蛋白后就成为PRRSV允许细胞，能够成功感染增殖PRRSV，而其他两种受体则不能，说明CD163在病毒感染细胞过程中至关重要。作为清道夫受体超家族的成员，CD163参与机体对异物的免疫应答并参与炎症反应，其在细胞表面的表达受多种因素的影响，其中去整合素金属蛋白酶ADAM17已被证实能够介导人源CD163的剪切调控，从而调节炎症反应。但是ADAM17能否介导猪源CD163的剪切调控从而影响病毒的入侵还不得而知，因此本研究阐释了ADAM17介导CD163的表达调控机制及其对PRRSV感染的影响。首先，从PAM细胞中扩增了猪源CD

7、163基因，克隆至真核表达质粒pcDNA3.1-CD163，在测序正确后将其转染HEK293细胞，通过流式细胞术和G418加压筛选，获得稳定表达CD163的HEK293/CD163细胞系；病毒感染实验表明PRRSV能够感染HEK293/CD163细胞系，为研究病毒的体外感染奠定了基础。其次，通过抑制剂、激活剂、siRNA基因干扰和基因过表达等方法来抑制或者增强PAM和HEK293/CD163细胞的ADAM17表达水平或活性，检测ADAM17对猪源CD163的剪切能力。研究结果发现