鼠疫菌和志贺菌毒力大质粒对细菌蛋白表达谱的影响

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1、？：／密级：保密期限：硕士学位论文鼠疫菌和志贺菌毒力大质粒对细菌蛋白表达谱的影响ＲｏｌｅｏｆｖｉｒｕｌｅｎｃｅｐｉａｓｍｉｄｉｎｔｈｅｐｒｏｔｅｏｍｅｏｆＹｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓａｎｄＳｈｉｅＩＩａｆＩｅｘｎｅｒｉｇ学号Ｄ１２３０３００２姓名刘红胜学位类别工程硕士学科专业王生物根）Ｊ■不王（工程领域）指导教师王恒棵研究员完成时间２０１５年４月答辩委员会ｉＡ主席签名？广－？独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的，研究

2、成果．据我所知除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一．与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．学位论文作者签名：签字曰期：年月＞曰￥￥丨学位论文版杈使用授权书本学位论文作者完全了解安傲大学有关保留．使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．本人授权安徼大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用彩印、编印或扫描等复制手段保存、汇编学位论

3、文．《倮密的学位论文在解密后适用本授权书）“学位论文作者签名？：会‘导师签名：丨签字曰期：年月＞曰签字曰期：３＞？？－密级：保密期限：鼠疫菌和志贺菌毒力大质粒对细菌蛋白表达谱的影响ＲｏｌｅｏｆｖｉｒｕｌｅｎｃｅｐｉａｓｍｉｄｉｎｔｈｅｐｒｏｔｅｏｍｅｏｆＹｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓａｎｄＳｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ学号Ｄ１２３０３００２姓名刘红胜学位类别工程硕士学科专业王Ｍ丄径（工程领域）指导教师王恒樑研究员完成时间２０１５年４月答辩委员会ＩＡ主席签£安徽大

4、学硕士学位论文摘要摘要志贺氏菌一ＱＳｈｉｇｅＵａ），又称痢疾杆菌，是类无鞭毛，不形成芽孢的革兰氏一阴性杆菌，为人类细菌性痢疾的主要病原体。鼠疫耶尔森氏菌是类有荚膜，无，不形成芽孢的革兰氏阴性短杆菌，是鼠疫的病原菌鞭毛。ｍ型分泌系统是某一些革兰氏阴性病原菌所具有的种特殊细胞结构，志贺氏菌和鼠疫耶尔森氏菌都具有ＩＩＩ型分泌系统结构，这种结构跨越病原细菌的内膜、外膜及宿主细胞膜。细菌内合成旳蛋白质通过ＩＩＩ型分泌系统结构分泌到宿主细胞中，这些蛋白在病原菌侵袭宿主以及宿主致病过程中发挥重要作用。在这两种细菌中，ＩＩＩ型分泌一系统的结构组成蛋白及效应分子，均由类进

5、化过程中外源获得的毒力大质粒编码，。为了更好地研宄外源毒力大质粒对细菌蛋白表达谱的影响及其共性和特性本文拟对两种不同的病原菌进行对比分析。众所周知，细胞内的大多数蛋白通常要和其它蛋白相互结合并相互调节，最－ＰＡＧＥ终形成蛋白复合物来行使其功能。非变性凝胶电泳（ＢＮ），在分离蛋白质复合物的时候，能够保持蛋白的生物学活性。在蛋白复合物分离以及蛋白质和蛋白质相互作用等多个领域研宄发挥了重要作用－。本研宄首先采用ＢＮＰＡＧＥ方法从毒力编码ＩＩＩ型分泌系统质粒缺失突变株和野生株的全菌复合物蛋白及膜复合物蛋白的对比中，发现志贺氏菌的ｍ型分泌系统毒力质粒缺失与谷氨酸脱幾酶

6、及ＡＴＰ合成酶的复合物形成有关，而在鼠疫耶尔森氏菌中，并未发现此现象。随后，我们希望从蛋白质组水平分析鼠疫菌毒力大质粒对细菌表达谱的影响，并与福氏志贺氏菌中的类似研宄进行对比，以期阐明两种细菌在毒力质粒表达调控中的异同。本研宄通过双向电泳技术与质谱分析相结合的方法，比较了鼠疫缺°°失编码ｍ型分泌系统的质粒缺失菌株和野生株在２６Ｃ和３７Ｃ培养条件下的蛋白表达差异，成功分离并鉴定了鼠疫耶尔森氏菌野生株和毒力大质粒缺失突变株中°°，２６Ｃ２９３７５的差异蛋白其中条件下鉴定到个差异蛋白，Ｃ条件下鉴定到２个差异蛋白，７个由ＣＤｌ质粒编码的蛋白其中包含ｐ。但没有检测到与谷氨

7、酸脱幾酶及ＡＴＰ合成酶有关的蛋白表达变化。这些差异蛋白中仅有２个与志贺氏菌中的报道相符，说明两种细菌的基因调控模式存在显著差异。此外，针对前期研究发现的表达量受毒力大质粒调控的志贺氏菌谷氨酸脱接酶，我们构建了相应的基因突变株并对其编码基因的调控进行了初步研究。由于－，我们利用？Ｒ谷氨酸脱按酶存在两种同工酶ｉｅｄ重组系统分别构建了单缺失及双一缺失基因突变株，为进步研究同工酶的功能奠定了基