鹦鹉热嗜衣原体半胱氨酸脱硫酶cpsit_0959的结构和相关功能初步研究

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2、０９５９的结构和相关功能田＇■二ｅ？。．？苗－ｒ＇Ｖ．／Ｖ？三：＇式嫁初亦研究Ｗ＾研豁．‘若錢铅―＂＇＇．、’．＾．＇，。．八，■：：ｙ，．＃：＇、＇－辩：幫癸－沪甚；於續山说單‘兰卢．Ｔ勢寶１Ｓ研究生姓名：陈彦波鑽：Ｓ增．．；’＇擁轉．倉衝巧泼指导教师姓名、职称：吴移谋教授声墙軒皆畫葬銷觀置終’ｒ－：学科专业基础医学．ｖ货麗苗、＾心：ｙ研究方向：病原生物学冀寮ｐ縣；：－＿起冷换．产＇；．歲从，．，玄讓勢篇＞■：医

3、学院；所在学院冶心＾迄气苦六鑛靖齋骄．’－．＇－、－＞一＇－，－；。巧、－＊女：式节中－Ｘ苗芦—．，一、；、、皂；三片－‘二五至－＾巧‘〇月：１狼；年５．＾—＾画－二？’－：二、思＾、－；＼吝獻；．韓告这ｎ或Ｖ互ｒ呼‘’．：顏＾哈：ｆ：！；龜跑再＾〇：６皆琴义戀？義孝掌ＩＩ搗热嗜衣原体半脱氨酸脱硫酶ＣＰＳＩＴ－０９５９的结构和相关功能初步研究论文作者签名；ｆ击餐旅指导教师签名：务１论文评阅人；甘涧良，教授，硕导，南华大学评阅人２；

4、陈丽丽，教授，硕导，南华大学答辩委员会主席；雷小勇，教授，硕导，南华大学委员１：刘卓然，主任技师，硕导，南华附属第二医院委员２；李忠玉，教授，硕导，南华大学委员３；陈超群，副教授，硕导，南华大学委员４；陆春雪，副教授，硕导，南华大学答辩日期：２０１５年５月２２日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中持别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成

5、果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名；ｆ去、斋２Ｗｊ年ｒ月＞Ｖ日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕±学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得Ｗ其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，艮Ｐ；学校有权保留学位论文，允许学位

6、论文被查阅和借阅；学校可公布学位论文的全部或部分内容，可Ｗ采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。■■＞＝作者签名：抑楚＾乐年丈月Ｗ日导师签名：兵＾月之

7、心曰鹦鹉热嗜衣原体半胱氨酸脱硫酶CPSIT_0959的结构和相关功能初步研究摘要：[目的]预测鹦鹉热嗜衣原体（Chlamydophilapsittaci，Cps）半胱氨酸脱硫酶CPSIT_0959的模拟结构，并进行其相关的功能性研究。[方法]利用SWISS-MODEL同源建模的方法分析和模拟CPSIT_0959的结构。提取Cps6BC菌株DNA作为模板，设计特异性引物，运用PCR技术从Cps6BC基因组中扩增CPSIT_0959基因，并构建pET-30a-CPSIT_0959原核表达载体，然

8、后转化到宿主菌E.coliBL21中，IPTG诱导His-CPSIT_0959重组蛋白表达，Westernblotting分析和鉴定表达产物。进一步用Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白，BCA法测定蛋白浓度。用该重组蛋白免疫BALB/c雌性小鼠，间接ELISA法检测免疫小鼠血清中重组蛋白多克隆抗体的效价，并以制备的多克隆抗体为一抗，采用间接免疫荧光法分析内源性CPSIT_0959蛋白在HeLa细胞中的定位情况。根据半胱氨酸脱硫酶的脱硫反应机制，检测硫化物的产生来证实其具有脱硫酶的活性。[结果]分