香榧体胚发生体系优化及发育过程的显微观察

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1、々糾￣＾諭密级公开ＵＤＣ６３０硕±学位论文喬框体巧发生体系化化及发育过程的显微观察作者姓名：项巧波指肆教师：黄坚钦教授张启香副教授专业学位名称：森林培育研究方向：林木生物技术与种席创新所在学院：林业与生物技术学院论文提交日期：２０１５年４月浙江农林大学２０１５年６月＇片独创巧声明得的成果，，通过我的努力取本人声明，所呈交的学位论文是在指导教师指导下谢中已经作了答谢的地方外，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致论文中不包含其他人发表或撰写过的研巧成果，也不包含在浙江农林大学或其他教育

2、一，都在论文机构获得学位或证书而使用过的材料。与我同对本研究做出贡献的同志，由本人承中作了明确的说明并表示了谢意。如被查有严重侵犯他人知识产权的行为担应有的责任。＇．：—：條日期｜＾个学位论文作者亲笔签名麻吁於／、论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交＾可Ｗ公布论文的全部或部分内容，可Ｗ采；学校文的复印件，允许论文被查阅和借阅用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□＿＿／不保密，本学位论文属于不保密。因＂＂（请在方框内打Ｖ）学位论文作者亲笔签名：

3、读＾日期：娘甲‘指导教师亲笔签名：＿＿日期：如术ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterOptimizationofSomaticEmbryogenesisinTorreyagrandis‘Merrillii’andMicroscopicObservationonSomaticEmbryosatDevelopmentalStagesCandidate:XIANGWeiBoSupervisor:HUANGJian-qin,ProfessorAssociateSupervisor:ZHANGQi-xia

4、ng,AssociateprofessorSpecialty:SilvicultureDateofSubmission:April,2015ZhejiangA&FUniversityLin’an,Zhejiangprovince,P.R.ChinaJune,2015摘要摘要香榧（Torreyagrandis‘Merrillii’）为我国特有的多用途干果树种，集果用、油用、药用、材用、绿化观赏为一体，经济寿命长，栽培效益高，目前市场上对香榧苗木的需求量很大。研究构建香榧体胚发生体系，建立香榧的无性快繁技术，旨在满足市场对香榧幼苗的需求；以期为香榧种质资源保存、遗传转化体系建立

5、及产业化高效育苗提供稳定的技术支持。同时揭示香榧体胚发生和发育过程，为针叶树体胚发生提供模式鉴借。本研究以香榧未成熟合子胚为外植体，采用单因素和多因素正交试验设计研究了不同细胞系、外植体预处理方式（低温高渗，干化处理）、基本培养基类型（SH，LM，DCR，BM，B5，WPM）、蔗糖浓度、复合添加物（包括Gln，CH）、植物生长调节剂（NAA，2,4-D，6-BA，ABA，GA）、渗透调节物质（PEG6000）、金属离子（AgNO3）、活性炭浓度与培养方式（固液培养）及环境（光暗培养）对离体胚培养及体胚发生过程中胚性愈伤组织的诱导、增殖以及体胚成熟和萌发的影响。优化胚性愈伤组

6、织诱导及增殖的培养条件，筛选出体胚成熟和萌发的较适合培养基和培养方式。探索不同处理下体胚内部的生理生化变化规律（POD，CAT，可溶性蛋白，可溶性糖）。同时利用常规石蜡切片技术对香榧体胚发生发育过程进行组织细胞学观察，碘-碘化钾染色技术对早期胚性愈伤组织进行观察鉴定，从而提出并完整的阐述了香榧体细胞胚起源模式及发育过程。试验结果具体如下：1．香榧未成熟离体合子胚接种于SH+NAA0.1mg/L+AC500mg/L+蔗糖2%的培养基中先暗培养72h再光照培养15d，离体胚的萌发率可达65%。2．在24℃下，离体胚先经过1M蔗糖溶液高渗处理16h后接种于SH+NAA0.1mg/

7、L+AC500mg/L+蔗糖3%+Gln0.5g/L的培养基中暗培养30天,离体胚的愈伤诱导率可达71%，为乳白色的胚性愈伤组织，同时丛生棒状体胚会在合子胚胚柄处分化产生；胚性愈伤组织在1/2SH+2,4-D2mg/L（或NAA1mg/L）+6-BA0.5mg/L的固体培养基中增殖系数最高可达2.09；在SH+ABA10mg/L+PEG600040-80g/L+AgNO35-10mg/L+AC500mg/L+蔗糖3%固体培养基中可较好的诱导产生原胚；原胚连续培养2-3I摘要个月，可发育成熟；萌发前对成熟体胚进行干化