靶向活化ⅱ型大麻素受体抑制ra炎症性骨侵蚀的实验研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文指导教师姓名______徐耀增—_专业名称________________骨外科学__研究方向关节外科临床和基础研究论文提交日期2015年3月靶向活化Ⅱ型大麻素受体抑制RA炎症性骨侵蚀的实验研究中文摘要靶向活化Ⅱ型大麻素受体抑制RA炎症性骨侵蚀的实验研究中文摘要目的：观察Ⅱ型大麻素受体（cannabinoidreceptor2，CB2）在类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis，RA）疾病进程中的表达变化，分析CB2选择性激动剂JWH-133对RA炎症性骨侵蚀的治疗作用

2、。方法：雄性DBA/1小鼠50只，采用随机数字表法分为5组，即正常对照组（Control）、模型组（Vehicle）、JWH-133低剂量治疗组（L-JWH-133）、JWH-133高剂量治疗组（H-JWH-133）和阳性对照组（甲氨蝶呤治疗组，MTX），每组10只。采用牛Ⅱ胶原诱导的小鼠CIA模型，药物治疗组于初次免疫后第28天（D28）经腹腔分别给予JWH133（1mg/kg/d和10mg/kg/d）和MTX（20mg/kg，每周2次），连续给药6周。模型组经腹腔注射生理盐水0.1ml/kg/d，空白组小鼠常规饲养，不予处理

3、。分别观察各组小鼠的体重、后足足掌厚度变化，并对关节炎的肿胀程度进行评分。Micro-CT检查评估骨组织破坏程度，H&E染色评估滑膜增生和炎性细胞浸润程度，番红O染色检测软骨破坏程度，抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测成熟破骨细胞，免疫组织化学染色检测CB2、肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-1β、白介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-3（matrixmetalloproteinases-3,MMP-3）、环氧化酶-2（Cyclooxygen

4、ase-2,COX-2）、诱导性一氧化氮合酶（hadueed-nitricoxidesyathase,iNOS）以及核因子-κB受体活化因子配体（receptoractivatorsofnuclearfactor-kappaBligand，RANKL）和骨保护素（osteoprotegerin,OPG）的表达变化。结果：DBA/1小鼠初次免疫21天（D21）开始，体重逐渐下降，最低为（D35，17.99±1.44）g，明显低于Control组（D35，21.81±1.23）g比较差异有统计学意义（P<0.05）给予JWH-133

5、后，小鼠体重逐渐增加，与Vehicle组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。CIA模型小鼠后足于D21开始出现肿胀，靶向激活CB2后小鼠足掌厚度开始减少，H-JWH-133组D42足掌厚度为（2.52±0.12）mm与Vehicle组（2.63±0.07）mm比较，差I中文摘要靶向活化Ⅱ型大麻素受体抑制RA炎症性骨侵蚀的实验研究异有统计学意义（P<0.05）；D42时H-JWH-133组关节炎评分（13.6±1.14）与Vehicle组（15.6±0.55）比较，差异有统计学意义（P<0.05）。Micro-CT扫描结果显示

6、Vehicle组骨质破坏严重，关节结构消失，经选择性CB2受体激动剂治疗后骨质破坏逐渐减轻，关节结构得到恢复；Control组骨体积（BV）、骨体积分数（BV/TV）、骨面积分数3（BS/BV）、骨小梁厚度（Tb.Th）分别为（5.90±0.12）mm、（32.52±0.89）%、（9.26±0.62）3mm、（0.36±0.02）mm；Vehicle组为（3.77±0.22）mm、（17.81±0.95）%、（17.78±1.03）3mm、（0.21±0.01）mm，H-JWH-133组为（3.91±0.23）mm、（19.4

7、5±0.98）%、（16.82±0.56）3mm、（0.24±0.01）mm；H-JWH-133组为（5.22±0.19）mm、（24.94±1.12）%、（11.81±0.60）mm、（0.30±0.02）mm，与Vehicle组相比差异有统计学意义（P<0.01）。H&E染色显示Vehicle组滑膜组织滑膜组织显著增生，大量炎症细胞浸润，靶向活化CB2后滑膜组织炎症明显减轻。番红O染色显示Vehicle组软骨细胞大量坏死，局部软骨层完全消失，H-JWH-133组软骨细胞显著增多，软骨层结构明显恢复。TRAP染色结果显示，CI

8、A模型组关节有大片紫红色区域，H-JWH-133治疗后破骨细胞数量明显减少。免疫组织化学染色结果显示CB2在CIA小鼠的滑膜组织和骨组织均有表达；Vehicle组TNF-、IL-1、IL-6、MMP-3、COX-2和iNOS的表达明显增高，选择性CB2受体激