间充质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效和免疫调节机制

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1、学校代码10459学号或申请号201212443293密级公开硕士学位论文间充质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效和免疫调节机制国家自然科学基金项目（81172835）作者姓名：张俊华导师姓名：刘红春教授指导老师：明亮教授郑配国博士学科门类：医学专业名称：临床检验诊断学培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterMesenchymalstemcellsfortreatmentofexperimentalautoimmuneencephal

2、omyelitisandtheimmunoregulationmechanismByJunhuaZhangSupervisor:Prof.HongchunLiuAdviser:Prof.LiangMINGDoc.PeiguoZHENGDepartmentofclinicallaboratorydiagnosticsTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay,2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他

3、个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：^日期：loir年乂-月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成

4、果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：It^日期：xr年仑月七r日摘要间充质干细胞治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效和免疫调节机制研究生：张俊华导师：刘红春教授指导老师：明亮教授郑配国博士郑州大学第一附属医院检验科河南郑州450052摘要背景与目的间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）是一类具有塑料贴壁性,呈纤维状,具有自我复制，自我更新和多向分化潜能的非造血基质细胞，存在于机体的骨髓和大量的结缔组织中，是干细胞家族的重要成员。在体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪，软骨，骨，肌肉，肌腱，神经，肝，心肌

5、，胰岛β细胞和内皮等多种组织细胞，甚至其多向分化潜能在连续传代培养和冷冻保存后仍旧存在。MSC细胞的表面标记具有明显特征：高表达CD90，CD105，CD44，CD73，CD4等分子，不表达造血细胞表面标记CD34，CD45，CD11b，CD11c，CD14，CD19，CD86和MHC-Ⅱ类分子。因此，我们可根据MSC细胞的这些特性来有效的判断其在体外培养之后的纯度,以此来指导我们对MSC细胞的研究。另外，不论是自体还是同种异体的MSC细胞均不会引起宿主细胞的免疫反应，即间充质干细胞的低免疫原性，这一特性使其应用于细胞治疗方面的研究成为可能。近年来，MSC细胞抑制同

6、种异体T淋巴细胞活化和增殖的免疫调节作用也被不断证实：有学者认为MSC细胞可释放可溶性细胞因子而发挥免疫抑制作用；也有研究发现MSC细胞可通过与靶细胞之间细胞细胞直接接触达到免疫调节功能；更有学者称MSC细胞的免疫调节作用伴随着细胞凋亡和细胞周期的变化。随MSC细胞应用于治疗自身免疫性疾病或者肿瘤等疾病的研究狂热，I摘要更多的人开始关注其临床效果和持续时间。因此本研究的主要目的是观察具有绿色荧光标记GFP的MSC细胞移植至多发性硬化症C57BL/6小鼠模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎后的疗效，并探讨其在细胞因子和细胞水平的免疫调节机制，并追踪有GFP荧光标记的供体MS

7、C细胞在受体C57BL/6小鼠体内的作用部位，数量变化和作用时间,来了解MSC细胞的疗效持久性。材料和方法1．选用20-25g，6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠和GFP-C57BL/6小鼠「北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号：SCXK(京)2012-0001」作为实验对象。30只C57BL/6小鼠进行EAE诱导做为受体小鼠，20只GFP-C57BL/6小鼠作为GFP-MSC细胞的供体小鼠。GFP-MSC细胞移植后小鼠作为MSC治疗组，PBS移植后作为EAE组,未做处理的小鼠作为正常组。2．诱导EAE模型：5mg/ml的CFA与1.5mg/ml的MO