铜绿假单胞菌裂解性噬菌体的筛选、鉴定及应用

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1、犬ｉｌ裡－大學ＤＡＬＩＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ擴士芽位记文ＤＯＣＴＯＲＡＬＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ铜绿假单胞菌裂解性唆菌体的蹄选、鉴定及应用学科专业主輕化３；ＷＷ作者姓名＿＿指导教师＿＿＿＿４１７答辩日期＿＿＿？＿＆＾£＿＿１＿＿＿旦＿＿一博士学位论文铜绿假单胞菌裂解性睡菌体的简选、鉴定及应用ＩｓｏｌａｔｉｏｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＡｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ，ｐｐａｅｒｕｇｉｎｏｓａＬｙｔｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅｓ作者姓名：曹振辉学号

2、：１１０１８０３７指导教师：徐永平学科、专业：生物化工答辩日期：２０１５年４月１７日大遠理工大摩ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果作者郑重声明：所呈交的学位论文。尽我，除文中已经注明弓，所知丨用内容和致谢的地方外本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成一果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果。与我同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。，若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。卩学位论文题目

3、铜鋒树能献鄉＾驗柯！棒作者签名日期：上年月如日ｔ大连理工大学学位论文版权使用授权书本人完全了解学校有关学位论文知识产权的规定，在校攻读学位期间论文工作的知识产权属于大连理工大学，允许论文被查阅和借阅。学校有权保留论文并向国家有关部门或机构送交论文的差印件和电子版，可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印、或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。学位论文题目：铜＿＿爾＿激＿作者签名＂２＾：日期：年月日一￣ｐ－ｊ■导师，日期ｉｉ年ｙ月＞日■答辩委员会主席：日期：＾１＾；日２月＞１：大连理了大学傅士学位论文摘

4、要水紹是世界上最重要的毛皮动物品种。水紹养殖广泛分布于北美、北欧、俄罗斯、阿根廷、乌克兰以及中国等国家。随着集约化、规模化程度的提高，在降低养殖成本的同时，高密度养殖也带来了细菌性疾病的蔓延传播，给水紹养殖业带來了巨大的经济损一失。其中，由铜绿假单胞菌引起的出血性肺炎，死亡率较高，是水紹养殖过程中种重要的细菌传染性疾病。一暖菌体是感染细菌的病毒，是自然界分布最广的种生物类群，具有存在广泛、研发时间短、成本低增殖快安全有效无残留等优点，作为抗生素的替代品，；；；具有广阔的研发前景。近年来，抗生素的过量使用以及超级细菌的出现，嚼菌体作为抗菌制剂一的研发又开始受

5、到国内外专家的普遍关注，并相继有些在食品加工过程中控制食源性口致病菌的唾菌体制剂产品面市。本论文以水紹源铜绿假单胞菌为宿主，分离其裂解性筮菌体，研究应用噬菌体对水紹出血性肺炎的控制作用。具体实验内容与结果如下：５１．采集出血性肺炎水紹的肺部样品，使用铜绿假单胞菌选择性培养基，分离得到－，６Ｓ，ＰＡ１１株铜绿假单胞菌疑似菌株经生理生化指标及１ｒＤＮＡ分子生物学鉴定、－－－－－－－ＰＡ５－１１、５１２、ＰＡ２１、ＰＡ５２２５１ＡＰＡ５株菌株分别均为铜绿假单胞菌，其６ＳｒＤＮ序列已提交至ＧｅｎＢａｎｋ数据库，登录号分别为ＫＦ９７７８５６、ＫＦ９７７８５７、ＫＦ９７７８

6、５８、ＫＦ９７７８５９７７８６０Ｋ－Ｂ法操纵规程和判断标准和ＫＦ９，分析铜绿假单胞菌分离株的耐药性；根据，使用酶联免疫法检测外毒素Ａ水平，结果显示，与２００２年铜绿假单胞菌菌株相比，２０１２年分离得到的铜绿假单胞菌菌株对国内水紹养殖场普遍使用的庆大霉素和多粘菌素耐药性增强，外毒素Ａ表达水平显著提高。２ＰＡ０２０ＰＡ－１－１．采用丝裂霉素Ｃ诱导实验，证实铜绿假单胞菌菌株５、５为非溶源ＰＡ０２０５ＰＡ５－－性细菌１１铜绿假单胞菌为宿主，采用双层平板法从医院废水中分；以和ＰＰＡ０２０ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ２５和，０２０５离得到株暖菌体；透射电镜观察噬菌体的形态表明ＰＰＡ

7、ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ属短，属长尾噬菌体科，尾暖菌体科唾菌体；宿主谱实验结果显示ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ可以裂解１５株铜绿假单胞菌中的１４株０２０５，而唆菌体ＰＰＡ可以裂解５１一２－ＡＢＴＮＬ宿主谱较宽步生长曲线测定结果显示株铜绿假单胞菌中的株，噬，ＰＰＡ；－３０ｍ菌体ＰＰＡ０２０５和ＰＰＡＡＢＴＮＬ的潜伏期分别为ｉｎ和２５ｍｉｎ，裂解期分别为４０ｍｉｎ７０ＦＵ－和３５ｍｉｎ，裂解量