铁过载对骨髓造血微环境的影响及作用机制

《铁过载对骨髓造血微环境的影响及作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R551.3学校代码：10062密级：学号：2012602410硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：铁过载对骨髓造血微环境的影响及作用机制TITLEEffectandmechanismonbonemarrowmicroenvironmentaffectedbyironoverload一级学科：临床医学二级学科：内科学血液病论文作者：张宇辰指导教师：赵明峰天津医科大学研究生院二〇一五年四月分类号：R551.3学校代码：10062密级：学号：2012602410学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTE

2、R’SDISSERTATION论文题目：铁过载对骨髓造血微环境的影响及作用机制TITLEEffectandmechanismonbonemarrowmicroenvironmentaffectedbyironoverload一级学科：临床医学二级学科：内科学血液病论文作者：张宇辰指导教师：赵明峰导师组成员：李玉明邓琦天津医科大学研究生院二〇一五年四月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工

3、作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：探讨小鼠铁过载对骨髓造血微环境

4、的影响及去铁、抗氧化治疗对其损伤的保护作用。内容：通过建立小鼠铁过载动物模型，研究铁过载对骨髓造血微环境的影响及可能机制，并探讨地拉罗司去铁及NAC抗氧化治疗后，对该损伤作用的逆转情况，为临床治疗继发性铁过载提供实验依据。方法：1.通过4Gyγ射线全身照射和(或)右旋糖酐铁腹腔注射建立正常和骨髓损伤情况下的铁过载小鼠模型，通过①病理组织切片苏木精-伊红染色与普鲁士蓝染色的方法分析铁过载小鼠肝脏、脾脏、骨髓的形态及铁沉积情况；②流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)内可变铁池(LIP)水平验证铁过载模型的成功建立。2.利用倍增时间及CCK8试剂盒检

5、测BM-MSCs的增殖能力；利用成骨及成脂诱导培养基诱导BM-MSCs向成骨及成脂细胞分化；采用油红-o、碱性磷酸酶（ALP）、茜素红染色检测BM-MSCs成骨及成脂定向分化能力；利用共培养的方法检测BM-MSCs的造血支持能力；利用骨髓病理免疫组化检测骨髓微环境造血因子的表达。3.采用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测铁过载前后小鼠BM-MSCs活性氧(ROS)水平；利用Real-timeRT-PCR方法检测ROS相关基因FOXO3、PI3K水平的表达；成骨相关基因RUNX2、ALP、OCN，成脂相关基因PPARg、Adipsin

6、、aP2的表达；检测骨髓造血微环境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表达。4.经地拉罗司(DFX)去铁或经N-乙酰半胱氨酸（NAC）抗氧化治疗后，检测上述指标的变化。结果：1.小鼠肝脏、脾脏、骨髓内可见大量铁沉积，BM-MSCs内LIP水平明显升高，I天津医科大学硕士学位论文提示铁过载模型成功建立；2.铁过载抑制BM-MSCs的增殖能力，铁剂组倍增时间（1.74±0.36天）长于对照组(1.03±0.17天)（p<0.05）。铁过载影响BM-MSCs的成骨及成脂分化的平衡，铁过载组成骨细胞ALP表达及茜素红染色减弱，成脂细胞油红-O染色增强。3.铁过

7、载抑制BM-MSCs的造血支持能力，在与骨髓单个核细胞（BMMNCs）共培养1周后，其支持BMMNCs形成的造血细胞集落形成单位数(CFU-E,BFU-E,CFU-GM和CFU-mix)均明显低于对照组(P<0.05)。4.铁过载抑制骨髓造血微环境造血因子VEGF、CXCL12、SCF的表达，免疫组化及RT-PCR结果显示与对照组比较，铁剂组造血因子VEGF、CXCL12、SCF表达明显减弱，经去铁或抗氧化处理后，上述改变部分恢复(P<0.05)。5.加铁组BM-MSCs内ROS水平明显高于对照组；且通过检测ROS相关的信号通路发现，加铁组BM-MSCs的

8、FOXO3表达减少、PI3K表达明显升高(P<0.05)，当给予D