通用型h1n1甲型流感病毒疫苗的研发及基于vero细胞的高产流感疫苗株的制备

《通用型h1n1甲型流感病毒疫苗的研发及基于vero细胞的高产流感疫苗株的制备》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码：10270分类号：Q93学号：122200889上善_说I夫營硕士学位论文通用型H1N1甲型流感病毒疫苗的研发及基于Vero细胞的高产流感疫苗株的制备学院：牛侖与环境科学学院专业：微生物学研究方向：微生物分子生物学研宄生姓名：%孙兵研究员指导教师：完成日期2015年4月本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合上海师范大学硕（博）士学位论文质量要求。答辩委员会签名:主席（工作单位、职称）:Z.露钱鋒“ft⑷导师:论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研宂工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或

2、机构已经发表或撰写过的研宄成果。其他同志对本研宂的启发和所做的贡献均已在论文中做了明确的声明并表示了谢意。作者签名：平兔级_:2^.S.2S论文使用授权声明本人完全了解上海师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名:〒导师签名:曰期：20JS�OS"汸学校代码：10270分类号：Q93学号：122200889硕士学位论文通用型H1N1甲型流感病毒疫苗的研发及基于Vero细胞的高产流感

3、疫苗株的制备学院：生命与环境科学学院专业：微生物学研究方向：微生物分子生物学研究生姓名：平宪强指导教师：孙兵研究员完成日期：2015年4月上海师范大学硕士学位论文摘要摘要流感病毒是造成历史上多次流感大流行的病原体，也是引起季节性流行性感冒发生的病原体。流感病毒属于正黏病毒科，分为甲、乙、丙三型，其中甲型流感病毒（InfluenzaAvirus,IAV）是造成人和多种动物感染的主要病原体。在全世界范围内，每年都会有大量易感人群因感染流感病毒发病甚至死亡。由于流感病毒变异速度很快，流感疫苗需要逐年更新，因此具有广谱保护效果的通用流感疫苗成为目前流

4、感疫苗研究的方向和热点。H1N1亚型流感病毒是人群中造成季节性流行性感冒的主要病原体之一。H1N1亚型人流感病毒的分离株众多、不同分离株序列差异较大，普通的季节性流感疫苗不能对所有毒株都产生保护作用。我们实验室前期通过“共有序列+保守表位”的方式设计出一条针对H1N1亚型流感病毒的HA蛋白通用序列——CH1-1。在本实验中，我们用DNA疫苗的方式在小鼠体内检测了CH1-1所诱导的体液免疫应答以及细胞免疫应答，并对其广谱反应性做以评价。结果表明接种了pCH1-1的小鼠血清对NC99和FM47病毒有中和活性。免疫小鼠的T细胞可产生对SC09、NC

5、99和FM47几个代表株病毒抗原的细胞免疫反应。为了同时获得对SC09有中和活性的抗体，我们在DNA免疫组合中加入了表达SC09的HA的基因，pCH-1和pSC09-HA两种质粒混合免疫小鼠。得到的免疫血清对包括SC09在内的三株病毒都产生很强的交叉中和活性；SC09、NC99、FM47三种抗原体外刺激T细胞也发现，细胞上清中IFNγ含量都有很大提高。混合质粒免疫过的小鼠能抵抗致死剂量SC09、NC99和FM47等病毒的攻击，病毒攻毒免疫小鼠的肺脏病变明显减弱，攻毒14天后小鼠肺内未检测到病毒残留，这说明两种抗原的组合能诱导对许多种H1N1病

6、毒的广谱免疫应答。用CH1-1基因替换PR8病毒的HA基因构建的重组病毒株PR8-CH1-1是一株天然的弱毒株。PR8-CH1-1滴鼻免疫小鼠后用SC09和NC99两株病毒检测保护效果。结果发现，所有免疫过的小鼠在用致死剂量的两株病毒攻毒后均得到很好的保护，死亡率为0，肺脏只有轻微病变，攻毒14天后小鼠肺内未检测到病毒残留。这说明以PR8-CH1-1作为减毒活疫苗能诱导对许多种H1N1病毒的广谱保护性免疫应答。甲型流感病毒一直威胁人类健康,接种疫苗是预防甲型流感病毒感染的有效途径。哺乳动物二倍体细胞培养系统是生产甲型流感疫苗的新一代培养介质。

7、在前期工作中通过病毒基因组改造，我们已经获得Vero细胞高产的流感病毒疫苗骨架株，本研究将基于该Vero细胞高产骨架株构建H7N9甲型流感病毒疫苗株，研究和检验该高产疫苗骨架株是否支持新近流行的H7N9亚型流感病毒疫苗株I摘要上海师范大学硕士学位论文在Vero细胞中的生长，为应对人感染H7N9病毒提供细胞介质疫苗候选株。首先通过甲型流感病毒反向遗传学技术，将H7N9亚型流行株的HA和NA基因（2条编码病毒表面蛋白的基因）与Vero细胞高产疫苗骨架株PR8-4mut的PB1、PB2、PA、NP、M、NS基因（6条编码病毒内部蛋白的基因），通过6

8、+2重组法拯救出4mut-H7N9病毒。同时拯救对照病毒PR8-H7N9（HA、NA来自于H7N9,6条编码病毒内部蛋白的基因来自于野生型PR8病毒）。通过生长曲线