肽聚糖对sirna抑制凡纳滨对虾wssv的强化及其转录组研究

《肽聚糖对sirna抑制凡纳滨对虾wssv的强化及其转录组研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：S945.1+2密级：公开UDC：639.5学号：21112011^广瘃海洋太含硕士学位论文肽聚糖对siRNA抑制凡纳滨对虾WSSV的强化及其转录组研究朱卫卫指导教师：邱德全教授串请学位类别：农学硕士.............................................................专业名称：水产养殖研究方向：水产经济动物免疫学及病害控制学院名称：水产学院中国•湛江2015年6月学位论文答辩委员会组成主席：委员：导师：时间：2015年5月31日广东海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果

2、。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其它个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：2015年6月10日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在______年解密后适用本授权书。2、不保密√□。

3、(请在以上相应方框内打“√”)作者签名：2015年6月10日导师签名：2015年6月10日肽聚糖对siRNA抑制凡纳滨对虾WSSV的强化及其转录组研究摘要近年来，WSSV感染致病率有所下降，但是WSSV感染在一定条件下仍然是对虾养殖的主要威胁，因此研究对虾抗WSSV治疗及其机理具有重要意义。肽聚糖对对虾的免疫效果较低，同样siRNA干扰也不能有效抵抗WSSV感染和发病，其免疫保护也较低。试验设计在强化免疫条件下，WSSV感染后发病状况变化，再利用siRNA干扰技术，观察对虾WSSV感染后，其保护率的变化，期望探讨对虾抗病毒免疫机理和抗WSSV的治疗技术，并为在亲本的有效实用的病毒防治上提供技

4、术与理论基础。本实验的主要内容有以下三个方面。（1）利用超声波溶解从溶藻弧菌细胞壁中提取出的肽聚糖，注射到凡纳滨对虾肌肉内，再感染WSSV。在不同时间点记录凡纳滨对虾死亡数，试剂盒法测定对虾免疫学指标。（2）确定vp28-siRNA干扰WSSV最佳浓度，在凡纳滨对虾感染WSSV第24h时，把最佳浓度的vp28-siRNA注射到凡纳滨对虾，利用半定量PCR和荧光定量检测在不同时间点确定siRNA干扰效果。（3）凡纳滨对虾在注射肽聚糖后，感染WSSV，不同时间点注射vp28-siRNA，检测对虾免疫保护率。基于上面的实验设计，采集五个不同实验组对虾的肝胰腺进行转录组测序和分析。具体研究结果与分析

5、如下：1.实验验证WSSV病毒毒性，接着凡纳对虾分别注射0.05mg/mL（PSA组）、0.1mg/mL（PSB组）和0.15mg/mL（PSC组）的肽聚糖，进行免疫刺激24h后感染WSSV，测定其免疫保护率和肝胰腺、血清中的免疫学指标。实验结果表明：超低温保存的WSSV粗提液在对虾体内复活后重新提取的粗提液，经PCR检测显示WSSV呈阳性；注射到凡纳滨对虾体内，第1天后出现大量死亡数；对死亡对虾PCR检测，结果显示WSSV呈阳性，证明WSSV具有较强的感染性。与对照组相比，PSA组的保护率为36.67%，PSB组为46.67%，PSC组为56.67%；对虾的保护率随着肽聚糖的浓度增大而增大

6、。凡纳滨对虾血清中的PO酶活的情况如下：PSA组在72h时达到最大值，PSB组在48h时达到最大值，PSC组也在24h时达到最大值。同时，实验组对虾肝胰腺中的ACP、AKP、SOD和NOS酶活与对照组相比，有极显著性的差异（P<0.01）。PSA组ACP在24h时达到最大值，AKP在第12h时达到最大值，SOD在48h时达到最大，NOS在24h时达到最大值；PSB组ACP、AKP和SOD都在48h时达到最大值，NOS在12h时达到最大值，但在96h时又有I一个高峰；PSC组ACP和AKP在24h时达到最大值，SOD在12h时达到最大值，之后逐渐减少，在72h时又达到一个高峰，NOS在第6h时

7、达到最大值，之后逐渐减少。2.确定了siRNA最佳浓度为0.1μg/μL，每尾注射100μL时，干扰效果是最好，同时得到其保护率为40%。荧光定量检测凡纳滨对虾体内病毒拷贝数，结果表明在第48h时能很好干扰WSSV病毒复制，干扰效果呈现持续到第120h。3.0.1mg/mL肽聚糖对凡纳滨对虾进行免疫24h，感染WSSV之后不同时间点注射vp28-siRNA的实验结果显示：6h注射组的保护率为80%，12h注射