肽核酸在杜兴肌肉萎缩症治疗中的应用研究

《肽核酸在杜兴肌肉萎缩症治疗中的应用研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R966学校代码：10062密级：学号：2011601079博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：肽核酸在杜兴肌肉萎缩症治疗中的应用研究TITLEInvestigationofPeptideNucleicAcidinDuchennemusculardystrophydiseasemodel一级学科：药学二级学科：药理学论文作者：申潇咏指导教师：尹海芳天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R966学校代码：10062密级：学号：2011601079学位类别：科学学位√专业学位学科门类：医学博士学位论

2、文DOCTORALDISSERTATION论文题目：肽核酸在杜兴肌肉萎缩症治疗中的应用研究TITLEInvestigationofPeptideNucleicAcidinDuchennemusculardystrophydiseasemodel一级学科：药学二级学科：药理学论文作者：申潇咏指导教师：尹海芳导师组成员：天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外,论文中不一包含任何其他个人或集体已经发表或撰写

3、过的研究成果,与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名:刂豇立.日期:γ侈钔冫月冫日Ξ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文,并编入有关数据库。保密匚彐,在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密函。”(请在相对应的方框内打叫)学位论文作者签名:日期彡F年/冫月怕导师签名:日期'汐年

4、∫△月0El天津医科大学博士学位论文中文摘要杜兴肌肉萎缩症（DuchenneMuscularDystrophy-DMD）是一种X染色体连锁遗传的肌肉退行性遗传病，由抗肌萎缩蛋白dystrophin基因发生突变引起dystrophin蛋白缺失所致，目前临床尚无有效的治疗方法。反义寡核苷酸（AntisensOligonucleotides,AOs）介导的外显子跳读在DMD的治疗研究方面显示出了巨大的潜力，已有两种反义寡核苷酸药物（2'OmeRNA和PMO）在III期临床试验。然而，最近2'OmeRNA临床试验未能达到预期的治疗效果；同样P

5、MO也低于预期结果。因此，新型反义寡核苷酸药物的探索和研发对DMD疾病治疗具有非常重要的意义。肽核酸（PeptideNucleicAcid，PNA）是一种新型、人工合成的化学结构，具有结构稳定、与核酸的结合力强、特异性高等特点。在前期工作中，我们已在DMD小鼠（mdx）模型上，通过局部肌肉注射，初步展示了PNA介导外显子跳读的潜力。在本研究中，我们通过优化不同长度PNA的生物活性，获得最佳候选长度PNA20作为系统测试的药物，并进一步对PNA20给药方案进行优化。结果显示：在高剂量重复给药条件下，PNA20能够高效地介导外显子跳读和d

6、ystrophin蛋白恢复表达，并能够部分恢复mdx小鼠的的肌肉功能；同时在系统测试中，未检测到任何药物相关的毒副作用，充分展示了PNA作为一种新型反义寡核苷酸候选药物，在DMD疾病外显子跳读疗法中的应用潜力。方法：1.不同长度PNA在mdx小鼠上的局部测试。设计不同长度的PNA并在杜兴肌肉萎缩症动物模型mdx小鼠上进行局部测试。在前胫骨肌（Tibialisanteriormuscle，TA）上分别注射PNA20(+2-18)、PNA25(+7-18)、PNA26(+10-16)、PNA28(+7-21)和PNA30(+14-16)，

7、两周后收样，通过免疫组化分析、RT-PCR和Westernblot方法检测不同长度PNA介导外显子23跳读效率及dystrophin蛋白恢复表达的水平。2.候选PNA在mdx小鼠上的系统测试。利用上步优化所得的候选PNA，系统测试PNA25和PNA30介导dystrophin基因外显子23跳读效率及蛋白恢复的能力。按照25mg/kg的剂量，以尾静脉注射的方法注射到mdx小鼠体内，每周注射1次，连续注射3次，注射结束四周后收集各部位肌肉组织样品，并通过免疫组化、RT-PCR等方法检测其诱导外显子23跳读效率和dystrophin蛋白的表

8、达I天津医科大学博士学位论文水平。3.酸性对PNA溶解性及活性影响的测试。用0.1M的NaOH调节PNA25的pH值分别为pH=2，3，4，5，6，7，用超微量核酸蛋白测定仪检测其浓度。将pH=5-6以及pH=2-3的P