甘露糖化壳聚糖纳米粒与肿瘤组织结合能力的研究

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1、中图分类号：Ｒ７３０．５９響：戸梦或４絶硕±学位论文甘露糖化売聚糖纳米粒与肿瘤组织结合能力的研究ｙ．？—义院（系）、所临巧民举院研究生姓名刘辛学科、专化邮漓挙导师姓名蒋酸教按二〇—五年四月沾州戾挙院硕±挙位论义目录１．１中文摘要１１．２英文摘要５１．３前言１０口１．４材特与方法１．５结果１８ｋ１．６讨论３２１．７结论％１．８参考文献３７１９英．汉缩略词对照表４１２致谢４２３

2、肝癌微环境中巨座细胞的表达及意义及其鞭向治疗研究进展（综述）４３甘露糖化甘露糖化壳聚糖纳米粒与肿瘤组织结合能力的研究肿瘤学专业研究生：刘宇指导教师：蒋轉教授中文摘要目的：采用免疫组化染色的方法观察肝癌、乳腺癌、胃癌、结直麻癌病理标本中脚瘤及正常组织中的师瘤相关巨嘘细胞、Ｍ２巨Ｂ莖细胞、Ｍｌ巨隧一细胞相关受体表达情况，种相对简便进而了解Ｗ上细施的数量；寻找、经济、稳定的甘露糖化壳聚糖粒制备流程和方法；利用ＴＡＭＳ、Ｍｌ巨峰细胞、Ｍ２巨處细胞细胞表达丰富的甘露糖受体，（＾及甘露糖化壳聚糖

3、纳米粒能与甘露糖受体特异性结合的原理，在肝、乳腺、胃、大肠的组织切片中观察和评价甘露糖化壳聚糖粒与肿瘤组织的结合能力一，从而探求种肿瘤的鞭向治疗新鞭点与新方法。方法：收集结肠癌、孰腺癌、胃癌及肝癌各５０例患者的组织切片，每例患者组织切片均包含有肿瘤及正常组织，肿瘤组织组为观察组，正常组织组为对照组，通过运用免疫组化的方法对肿瘤相关巨隧细胞的特异性标记物ＣＤ６８、ＣＤ１６３进行染色－深褐色的阳，在光镜镜视致下对表达为黄褐性染色细胞进行计数，评价ＴＡＭｓ、Ｍｌ巨懂细胞、Ｍ２巨帷细胞在各类肿瘤组织、正常

4、组织中所占的比例；采用离子交联法构建出不同粒径大小甘露糖化壳聚糖纳米粒，取１９ｍｇ壳聚糖并配置成为浓度４ｍｇ／ｍｌ的溶液，在其中加入１％的冰醋酸，在室温下揽拌４ｈ，至溶液清澈。配置化５ｍｏｌ／Ｌ氨氧化钢溶液，将壳聚糖溶液的閒值调至６．２３５ｍ，加入ｇ甘露糖于壳聚糖１妒州医学院硕±学化论义溶液中；反应结束后继续使用０．５ｍｏｌ／Ｌ氨氧化钢溶液滴加入合成溶液中，有大量沉淀析出，转移至试管中，３０００巧ｍ／ｍｉｎ离也，去掉上清后，依次。使用蒸饱水，甲醇，乙醇洗緣２次，最后得到固体沉淀使用蒸溜水将得

5、８００２４到的固体沉淀完全溶解后，放入透析袋（截留分子量），清水透析。小时，再将所剩的溶液倒出培养皿中，进行冷冻干燥２天所获得产物即。ＯＯｍ为成功枝节甘露糖的壳聚糖取ｌｇ制作好的甘露糖化壳聚糖干粉，将０．５ｍｏｌ／Ｌ其溶解在蒸馈水中，配置成为浓度Ｉｍｇ／ｍｌ的溶液，并使用的氨氧化钢溶液将该溶液的ＰＨ调至７．４８；在３（ＴＣ水浴条件下配置浓度为４ｍｌＬ化：ｇ／ｍ的说溶液，Ｚ按质量比１３加入甘露糖化壳聚糖溶液中，室温下揽拌３０分钟，将得到的合成产物分别放入透析袋（截留分子量８００）中，清水透析２４ｈ，透析

6、后所得的溶液进行冷冻干燥２天。所得产物即为甘露糖化壳聚糖纳米颗粒。利用英光染料ＦＩＴＣ结构中的异硫氯基与甘露糖化壳聚糖纳米粒中的伯胺基反应，生成对应的取代硫腮，并用萊光扫描检测其焚光继发波长及最大吸收波长。在激光粒度分析仪下测量粒径大小；利用纳米粒携带的甘露糖与肿瘤组织里面ＴＡＭｓ细胞表达的甘露糖受体可特异性结合的原理，将肿瘤石蜡组织切片经过脱蜡、抗原修复Ｗ后，加入－适当比例的不同粒径甘露糖化壳聚糖纳米粒ＰＢＳ悬浊液，３７Ｃ僻育过夜，弃溶液，ＰＢＳ溶液沖洗，冷冻干燥。在癸光显微镜下观察肿瘤组织及正常组

7、织与纳米粒的结合情况，观察焚光染色细胞的分布确定其结合位置，通过阳性染色细胞计数可反映出两者结合能力的大小。最后对免疫组化结果做ｔ检验统计分析数据，其中将ＣＤ６８＋巨隆细胞数量视为ＴＡＭｓ数量，ＣＤ１６３＋巨喔细胞数量视作Ｍ２巨處细胞数量，Ｍｌ巨喔细胞数量由ＴＡＭｓ２沪州医学院硕±学位论义与Ｍ２巨隨细胞数量的差值计算得出；对免疫巧光染色结果做Ｆｉｓｈｅｒ精确检验统计分析数据。结果：每高倍镜下阳性染色细胞数量判断免疫组化表达阳性强度，观察到ＣＤ６８为阳性标记的ＴＡＭｓ大量表达于人乳腺癌、胃癌、结

8、直肠癌ｔＵ癌巢、、癌周组织中的细胞膜上，在乳腺、胃大肠的正常对照组织中仅有少量表达，其差异具有统计学意义而肝癌组织切片ＴＡＭｓ表达数量显著少；于正常肝组织，差异具有统计学意义。ＷＣＤ１６３为阳性标记的Ｍ２巨唆细胞在受