猪肉中一株鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及其生物学特性分析

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1、分类号Ｍ１２０８３－学号ＵＤＣ密级＾壤叫义華ＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＩｊ硕壬学位冷文（学术型）猪肉中一株鼠伤寒沙口菌的分离鉴定及其生物学特性分析李文华■？■２２５００９指导教师姓名；崔桂友教授扬州大学．江苏扬州．２巧００９胡茂志副研究员扬州大学．，江苏扬州申请学位级别：硕去学科专业名称：营养与食品卫生学论文提交日期；２０１５年６月论文答辩日期；２０１５年５月２６曰２０１５年６月３０曰学位授予单位：扬州大学学位授予日期：答辩委员会主席：埋成凯教授２０１５年６月

2、一李文华＝猪肉中株鼠伤寒沙口菌的分离鉴定及其生物学特性分析１＿摘要沙口菌一（说／％０？６舱）是肠道致病菌，是人和动物最主要的食源性病原菌之。世界卫生组织将其列入具有严重危害和中等危害的食源性病原菌。据统计，在世界各国的细菌￣性食物中毒中，沙口茜常列榜首。我国内陆地区的细茜性食物中毒中有７０％８０％的是由沙ｎ菌引起的，其中９０％来源于被污染的肉类食品。猪肉是我国的主要动物源性食品，屠一宰过程中的沙口茜污染是引起猪肉食品安全问题的关键环节之。因此，研究屠宰过程中沙口菌的污染状况及其致病机理具有重要意义。一基于上分析，本研究从扬州

3、市某屠宰场猪肉胸体分离出了株鼠伤寒沙鬥菌（义骑麻如ｍＷｍｗ）菌株，并对其生物学特性和宿主细胞对其感染早期的应答情况进行了分析，为控制和预防沙口菌病提供了重要参考。一１株鼠伤寒沙口菌的分寓与鉴定一猪肉屠宰环节的沙口菌污染是引起食物中毒的主要原因之。本实验从扬州市某屠宰场猪肉禍体进行采样一，分离出了株沙口茜菌株，通过生化鉴定及血清型分析，判断该菌株为鼠伤寒沙口菌。药物敏感性分析表明，该菌株对氨节青霉素高度耐药，而对头抱类等５４药物敏感。动物实验结果表明，腹腔注射５Ｘｌ〇ｃｆＷ只的剂量即可致死小鼠。ｌＸ１０ｃ仿／只的剂量感染后，虽然不能致

4、死小鼠，但能明显地引起肝脏和脾脏的病理损伤和炎症反应，脏器系数明湿升高一；另外，细菌在小鼠体内的定殖能为较强，感染后第周即达到最高值，之后逐渐降低，四周肝脏和脾脏中仍能分离到；此外，相对于对照组，肝匀浆中丙二醒水平忌著升高＜一＞＜（戶０．０１），而超氧化物歧化酶的水平在感染后第周明显升商（／０．０〇，之后逐渐降低；小鼠血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶明显高于对照组（戶＜０．０１），而碱性磯酸酶、总蛋白和白蛋白水平明显低于对照组（戶＜０．０１）；除此之外，血清中细胞因子（干扰－－素Ｙ、肿瘤坏死因子和单核细胞償化蛋白１）的分泌增加；并且，该菌株能诱

5、导脾脏中Ｔ淋己细胞的活化。通过上分析，对该菌株的生物学特性有了初歩的了解。２利用流式细胞术分析小鼠中性粒细胞和Ｂ细胞对沙口菌感染早期的应答沙口菌是兼性胞内菌，可通过调节细胞功能，从而在宿主细胞内存活，使机体长期带菌，这给动物和人类健康带来了严重威胁。目前，关于沙口菌与宿主细胞相互作用的研。充大部分Ｗ巨嗤细胞为对象，而对其他宿主细胞的研巧则相对较少本研究选取了中性粒细胞（Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｃｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ，ＮＧ）和Ｂ细胞作为研巧对象，通过体外感染鼠伤寒沙口茜＋（Ｇｒ－分离株，动态分析了两种细胞在沙口菌感染初期的应答情况。结

6、果表明，分离的ＮＧｓｌ）＋和Ｂ细胞（Ｂ２２０）均为圆形，非贴壁生长。感染ＮＧｓ后，调亡ＮＧｓ所占比例略有升高，但差异不显著，，而坏死细胞明显增多随着时间的延长，坏死细胞所占比例呈上升趋势，２扬州大学硕壬学位论文细胞内活性氧水平（ＣＤ８０、、线粒体膜电位、巧离子浓度等均有所升高，细施表面分子ＣＤ％）的表达上调，说明ＮＧｓ启动了吞幢杀伤和抗原提呈作用。而感染Ｂ细胞后，相对于对照组，，未见明显的细胞稠亡和死亡现象发生，除了巧离子浓度升高外活性氧、线粒Ｄ一一体膜电位和Ｃ８６的表达均下降。这进步证明了沙口菌与宿主细胞的相互作用是个复杂的过

7、程。本研巧通过分析鼠伤寒沙ｎ菌分离株的生物学特性，及ＮＧｓ和Ｂ细胞在感染早期对沙口茜的应答情况，，为沙口菌致病机理和疾病防御的研究提供了重要数据。另外本研一ｓ究发现，ＮＧ和Ｂ细胞对沙口菌感染早期的应答情况存在差别，其中的原因尚需进步研究。关键词：鼠伤寒沙口菌；生物学特性；小鼠；中性粒细胞；Ｂ细胞李义华一３：猪肉中株鼠伤寒纱口菌的分离鉴走及其生物学特性分析Ａｂｓｂａｄａ－舶／／ｎｏｎｅ／／幻ｉｓ过ｋｉｎｄｏｆｅｎｔｅｒｉｃｔｈｏｅ打ａｎｄｏｎｅｏｆ化ｅｍａｊｏｒｓｏｕｒｃｅｓｏｆｆｏｏｄｂｏｍｅｐｇ

8、ｓａｌｍｏ