牦牛角性状候选基因的克隆、表达分析及microrna研究

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1、密级：论文编号:中囯农此科学院学位论文牦牛角性状候选基因的克隆、表达分析及MicroRNA研究Cloning,ExpressionAnalysisandMicroRNAStudyofHornTraitCandidateGenesinYak硕士研究生：赵娟花指导教师：阎萍研究员申请学位类别：农学硕士专业：动物遗传育种与繁殖研宂方向：动物遗传育种培养单位：兰州畜牧与兽药研宄所中国农业科学院研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationCloning,ExpressionAnalysisandMi

2、croRNAStudyofHornTraitCandidateGenesinYakM.S.Candidate：ZhaoJuanhuaSupervisor：YanPingMajor：AnimalGenetics,BreedingandReproductionSpecialty:AnimalGeneticsBreedingMay2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果.尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作

3、的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名时间：年日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，gp:中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：龙/s年穸月^中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目牦牛角性状候选基因的克隆、表达分析及MicroRNA研究论文作者赵娟花专业动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传育种指导教师阎萍培

4、养单位（研究所）:州畜牧与兽药研究所姓名职称硕（博)单位专业签名评硕导口博导口阅硕导口人博导口答动物遗传育吴建平教授博导甘肃农业大学主种与繁殖席李发弟教授博导兰州大学动物营养学武一教授博导兰州大学生物物理学答动物遗传育辩卢建雄教授硕导西北民族大学种与繁殖中国农业科学院兰州畜委杨志强研究员博导基础兽医学牧与兽药研究所口贝中国农业科学院兰州畜动物遗传育杨博辉研究员博导牧与兽药研究所种与繁殖中国农业科学院兰州畜农产品加工高雅琴研究员硕导牧与兽药研究所及贮藏工程会议记录（秘书）论文答辩时间地点20〗5年5月22FI中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所摘要无角牦牛便于管理，减少牛群之间的争斗伤害

5、，避免不必要的经济损失。目前有关牦牛无角性状调控主效基因及机理的研究尚属空白。本研究以无角牦牛和有角牦牛为研究对象，利用分子生物技术克隆牦牛角性状候选基因，并分析候选基因及其MicroRNA的表达量差异，以期筛选影响牦牛无角性状的主效基因，为无角牦牛的培育提供一些理论依据。试验研究结果如下：1.克隆获得牦牛C1H21orf62、RXFP2和OLIG2基因的完整编码区（CDS）。C1H21orf62CDS区全长为510bp，编码161个氨基酸。C1H21orf62蛋白是一种亲水性蛋白，含有13个潜在的磷酸化位点，无跨膜域和信号肽；RXFP2基因CDS区全长为2213bp，编码737个氨

6、基酸。RXFP2是疏水性蛋白，含有28个潜在的磷酸化位点，RXFP2蛋白1~21位氨基酸存在信号肽，无跨膜域；OLIG2基因CDS区全长为651bp，编码216个氨基酸。OLIG2是一种亲水性蛋白，含有29个潜在的磷酸化位点，但无跨膜域和信号肽。2.通过实时荧光定量PCR方法分析了6个角性状候选基因的表达量，结果表明SYNJ1、FOXL2和GCFC1基因mRNA相对表达量在牦牛无角和有角角基组织中差异不显著；C1H21orf62基因在角基组织中mRNA相对表达量无角极显著高于有角；RXFP2基因在角基组织中mRNA相对表达量无角显著高于有角，说明牦牛无角性状可能与C1H21orf62

7、、RXFP2基因mRNA的转录丰度相关。OLIG2基因仅在无角角基组织中表达，而在有角角基组织不表达，说明牦牛无角性状可能与OLIG2基因的表达相关。3.通过软件预测牦牛OLIG2基因的靶标MicroRNA：bta-miR-302b、bta-miR-302c和bta-miR-302d，并通过实时荧光定量PCR方法分析其表达量，结果表明bta-miR-302b、bta-miR-302c和bta-miR-302d在牦牛无角、有角角基组织中均表达，但是其表达量差