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时间:2019-03-14
《深海链霉菌streptomyces somaliensis scsio zh66中隐性次级代谢产物合成基因簇的激活及其产物发酵优化》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、斯义*義)相fOCEANUNIVERSITYOFCHINA硕±学位论文IMAST巨民DISSERTATION深海链霉菌讯巧7化wクceパ6wa//en5/パCSIOZH66中隐性J论文题目;次级代谢产物合成基因簇的激活及其产物发酵优化Activationandenhancem州tofcrypticsecondarymet:aboHte‘-英文题目:行omdeepseaderived邱化sow幻SCSIOZH66—作者;张
2、永贺指导教师;李文利学位类别:全日制学术学位专业名称:生药学海洋药物生物合成研究方向:—?-f厂■月31曰擺画醒m谨!^此论文献给所有帮助过我的人们张永贺1*深海链霉茵加啤^0鮮cesswMfl/Ze/iskSCSIGZH66中隐性次级代谢基因簇的激活及其产物发酵优化>。。学位论文完成日期:叫指导教师签宇:私^答辩委员会成员签字:*2独创黄明本人声明所呈交的学位论文是本
3、人在导师指导下进行的研究工作及取得的研巧成果,,。据我所知除了文中特别加标注和致谢的地方外论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含未获得(注=如没有其化需要特别声明的,本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使一用过的材料。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名:签字日期:欢JT年月^日長氏夺^/学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留,、使用学位论文的规定有权保留并向国家有关部口
4、或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可W将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可W采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:导师签字:-签字日期:州妊月2日签字日期:月日^^3深海链巧菌况re/7始wjcesSCSIOZH66中稳性次级代谢
5、产物合成基因簇的激活及其产物发酵优化摘要海洋链霉菌是发现新型药物先导物的重要源泉,然而研究表明其中许多隐性(cryptic)次级代谢生物合成基因簇在实验室条件下不表达或者表达量极低,从而极大阻碍了活性化合物的发现。本论文W深海链霉菌及巧WomyceySCSIOZH66为研巧对象,采用核糖体工程手段激活了其中编码抗癌n一先导化合物FredericamyciA(FDMA)的隐性基因簇,进步通过发酵工程策略显著提高了FDMA的产量,主要研究结果如下:通过核糖体工
6、程手段获得具有利福平抗性菌株7株,4链霉素抗性菌株株,一MS平从突变株中筛选得到了300i/mL,株能够抗利福平达到|g在板上培养积累栋色色素的突变株RIF1,其他抗性突变株和野生菌株并不积累:该色素化合物粗提取物具有良好的抗癌活性,最终分离纯化得。通过筛选合适的发酵培养基'i3H-NMR、C-NM民等数据到该化合物纯品,确定其为FDMA,;通过分析比对表明在突变株RIF1中隐性FDMA合成基因簇被激活。一-进步,本论文对突变株RIF1的公基因序列进行分析,结果表
7、明基因编码的RNA聚合酶P亚基蛋白的第444位的精氨酸突变为组氨酸。同时,对FDMA生抓7欠7-物合成相关基因與W公和/的表达情况进行了分析;半定量RTPC民结果表明在MS平板上培养3d时,在野生株和突变株中均为检测到二者的表达,培养5d和7d后,二者在野生株中未见表达,而在突变株RIF1中均被激活;进一-办步用巧光实时定量PCR(realtimeRTPC民)检测了/77D和/而7W基因的转录水平,结果证明了与野生株相比,突变株RIF1中辟mZ)基因和基因均被
8、激活,培养7d时突变株体内/dmO基因和/献W基因转录水平比野生型菌株均提高了约15倍。DMAPBD设BBD为了有效提高F产量,通过单因素、计和响应面分析法设计等手段对突变株RIF1产FDMA的发酵条件及发酵培养基成分进行了优化,优化后的FDMA产量比原始条件下的产量提高了3倍,达到679.5mg/L。与已4R一IFl,是报导的菌株相比,突变株的发酵周期较短和培养成本低廉株良好的潜在FDM。A生产菌株&wma/knskSCSIO综上所述,本研究利用核
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