枸杞叶醇提物中对小胶质细胞保护作用成分的研究

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1、分类号：R9单位代码：10752密级：公开学号：201200172宁夏医科大学硕士研究生学位论文枸杞叶醇提物中对小胶质细胞保护作用成分的研究Studyoftheprotectivecompositionsinalcoholextraofmedlarleafonmicroglial学位申请人：水栋指导教师：王妍教授合作指导教师：田建英教授姚遥副教授申请学位门类级别：医学专业名称：药物分析学研究方向：天然药物化学所在学院：药学院论文完成日期：二零一五年三月宁夏医科大学研究生院NingxiaMedicalUniversityThes

2、isforApplicationofMaster’sDegreeStudyoftheprotectivecompositionsinalcoholextraofmedlarleafonmicroglialStudent’sName:ShuiDongSupervisor：Prof.WangYanAssistantsupervisor:Prof.TianJianyingProf.YaoYaoSubjectCategory:MedicalScienceMajor:PharmaceticalAnalysisSpecialty:Medi

3、cinalChemistryofNaturalProductSchool:PharmaceuticalcollegeCompletionDate:Mar.2015摘要枸杞叶醇提物中对小胶质细胞保护作用成分的研究摘要以枸杞叶为研究对象，把枸杞叶醇提物的得率和小胶质细胞的存活率作为考察指标，研究了枸杞叶醇提物中有效成分的提取工艺条件；对枸杞叶醇提物进行系统分离，将得到的四个部位进行化学成分系统预试，并采用MTT法确定对氯化甲基汞(MMC)诱导损伤的小胶质细胞具有保护作用的有效部位；接着利用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制113备液相等多

4、种色谱分离技术对有效部位进行分离纯化，利用H-NMR、C-NMR现代技术对单体化合物进行了结构鉴定，并对单体化合物进行活性测试，确定活性成分。主要结果如下：1.有效成分的最佳提取工艺条件的确定以枸杞叶醇提物的得率和小胶质细胞的存活率作为考察指标，通过单因素试验考察乙醇浓度、回流时间、料液比、温度对提取效果的影响，根据考察结果运用正交试验优化提取工艺，最终确定有效成分的最佳提取条件为：70%乙醇，料液比为1：10，温度80℃，回流时间2.5h，提取2次，而且验证试验结果证明最佳提取工艺稳定，重复性好，合理可行。2.有效成分的提取

5、及不同部位化学成分预试称取8500g粉碎好的枸杞叶，用最佳提取条件进行提取，得到枸杞叶醇提物浸膏2192g。取2141g浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，最终得到石油醚部位浸膏84.27g（3.94%）、乙酸乙酯部位浸膏74.60g（3.48%）、正丁醇部位浸膏120.77g（5.64%）和水部位浸膏1861.36g（86.94%），说明枸杞叶醇提物中亲水性的成分含量较高。采用试管预试法及滤纸片法对不同部位化学成分进行预试，结果表明，石油醚部位明显含有油脂类化合物；乙酸乙酯部位明显含有黄酮及苷类、甾体、萜类成分、酚性成分

6、和有机酸；正丁醇部位明显含有黄酮及苷类、生物碱和酚性成分；水部位明显含还原I宁夏医科大学硕士研究生学位论文糖、多糖和苷类、氨基酸。3．有效部位的确定采用MTT法对枸杞叶醇提物的四个不同部位进行活性测试，结果表明枸杞叶醇提物的有效部位主要是乙酸乙酯部位和正丁醇部位。4.有效部位化学成分的分离及结构鉴定采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备液相等多种色谱分离技术对枸杞叶醇提物乙酸113乙酯部位和正丁醇部位进行分离纯化，分离得到14个化合物，通过H-NMR、C-NMR现代技术对单体化合物进行结构鉴定，确定出其中10个化合物的结构，分别为对

7、甲氧基苯甲酸（化合物3）、对甲氧基肉桂酸（化合物5）、东莨菪素（化合物6）、对羟基苯甲醛（化合物7）、对羟基苯乙酮（化合物8）、(Z)-2-亚乙基-3-甲基丁二酸（化合物9）、槲皮素（化合物10）、腺苷（化合物11）、东莨菪苷（化合物13）、芦丁（化合物14）。其中化合物3、5、7、9、11首次从枸杞属植物中分离得到，化合物6、8、13首次从枸杞叶中分离得到。5.活性成分的确定采用MTT和Griess法对单体化合物进行活性研究，确定活性成分为槲皮素和芦丁。枸杞叶醇提物中的槲皮素和芦丁可以提高MMC诱导损伤的小胶质细胞的存活率，

8、抑制炎症因子NO的释放，为寻找预防或治疗阿尔茨海默病的药物提供了实验依据。关键词：枸杞叶，氯化甲基汞，小胶质细胞II目录StudyoftheprotectivecompositionsinalcoholextraofmedlarleafonmicroglialABSTRACT