鸭产蛋下降相关新病毒的分子鉴定与生物学特性研究

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1、类号单位代码：密级学号：博士学位论文鸭产蛋下降相关新病毒的分子鉴定与生物学特性研究研究生：王笑言指导教师：张大丙教授申请学位门类级别：农学博士专业领域名称：预防兽医学研究方向：动物分子病毒学所在学院：动物医学院年月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学

2、位论文作者签名：》条时间：年广月关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名时间：年月孚曰时间年月曰摘要近年来，鸭新发病毒性疾病不断出现，严重制约了我国养鸭业的健康稳定发展。因此，幵展鸭未知新病毒的探索研究日趋

3、重要。从广东的个发病蛋鸭群和个康复蛋鸭群以及广西的个发病肉种鸭群和个发病商品鸭场采集样品，共计份，针对坦布苏病毒、布尼亚病毒、甲病毒、杯状病毐、禽博尔纳病毒（、禽星状病毒和微病毒进行了检测。从份肉种鸭粪样和份商品肉鸭肠道样品中检出微病毒；因引物错配，从份蛋鸭粪样中检出小双节病毒。对扩增产物进行测序和序列分析的结果表明，鸭源微病毒和鸭源小双节病毒（可能属于种新的病毒。选株，用和技术测定了鸭源微病毒的基因组序列。序列分析表明，株拥有微病毒的基因组结构，但亦有其自身的特点。该病毐的区编码种蛋白基序，包括个含基序的、个样的以及个双埃柯病毒样的其含有丙

4、肝病毒適病毒（，样内部核糖体进入位点（。但是，该的亚域由的落和的环组成，与以往报道的样均有所不同。在、和区，株与鸭甲肝病毒（的氨基酸序列同源性最高，分别为、和。进化分析结果表明，株与和具有相近的遗传演化关系，但变异性亦十分明显。因此，将株鉴定为微病毒科一个新属的成员，暂将其属名称为，以作为代表种。以广东个蛋鸭群的份样品为材料，用特异性进行了检测，从份（样品中检出，表明在蛋鸭中的感染较为普遍。对所测定的条聚合酶序列进行进化分析的结果显示，这些序列均属基因群，其氨基酸同源性为表现出高度变异性。选株，技术测定了基因组序列。序列分析表明，株基因组由两

5、个片段构成，分别编码衣売蛋白和符合基因组结构特点。同源性分析和进化分析的结果表明，株与以往报道的存在较大的序列变异性。在测定另外一株株）的基因组序列时，意外检出样病毒的基因序列，以此为基础，测定了样病毒株约的基因组序列。分析结果显示，株有微病毒目的基因组结构特点。与和类似，其非结构蛋内禾衣壳蛋白编码区分别位丁基因组的和部分。用微病毒目和衣売蛋内序列进行进化分析的结果显示，株与和具有相近的遗传演化关系，但乂表现出明显的差异。建议在微病毒目中为和成立一个新的病毒科，且株属丁该科中的一个新病毒属的成员。暂将病毒属名称为，以作为其代表种。年月，在我国

6、东北某金定麻鸭养殖区，出现一种疑似鸭病毒性肝炎的传染病，该病可导致周龄雏麻鸭和周齡以上成年麻鸭发病和死亡，并可导致成年鸭产蛋下降。病鸭表现出的特征临床症状和病理变化，在成年鸭的卵巢，见有出血病变。组织病理学观察显示，病鸭各内脏组织均有不同程度的出血、坏死和淋巴细胞浸润。针对不同病原进行分子检测的结果显示，鸭星状病毒型（可能是致病病原。免疫组化试验和组织分布检测结果显示，可侵害多种不同的器官。用进行实验感染试验，可在雏北京鸭、雏麻鸭和成年麻鸭中复制出。基因组测序和序列分析结果显示，来自不同日龄的株与以往报道的参考毒株株具有相近的遗传演化关系（氨

7、基酸同源性为。综上所述，可导致成年鸭发生。基因组序列比较分析表明，相对于株，所测株的基因组存在个氨基酸位点的共同突变，提示这些位点可能与对成年鸭的致病性有关，因此，本研究以株为亲本毒，构建了覆盖基因组全长的克隆。用体外转录的转染随后将细胞培养物接种细胞并进行传代培养。用荧光抗体对第代细胞培养物进行检测的结果显示，蛋白在细胞中获得了表达。据此可认为，病毐获得了拯救。此结果为今后进一步研究基因功能以及致病机理提供了良好的技术手段。关键词：微病毒小双节病毒；鸭星状病毒AbstractInthepasttwodecades,manynovelvira

8、ldiseaseshavebeenemerginginduckpopulations,whichhaveraisedseriousthreatandsignific