一种黄病毒引起鸭产蛋下降的诊断报告.doc

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1、一种黄病毒引起鸭产蛋下降的诊断报告　　摘要：２０１０年以来湖北省部分地区蛋鸭群出现了严重的产蛋下降以及持续性死亡，对发病鸭进行了病理剖检以及病毒的ＰＣＲ鉴定。其中用ＲＴ－ＰＣＲ检测鸭黄病毒为阳性，禽流感病毒、新城疫病毒和减蛋综合征病毒均为阴性。对ＰＣＲ扩增的鸭黄病毒目的片段进行回收测序，将测序结果与黄病毒属的7个不同的病毒群进行序列比对，表明该病毒与黄病毒科黄病毒属恩塔亚病毒群的坦布苏病毒ＴＨＣＡｒ株和ｓｉｔｉａｗａｎ株同源性较高，分别为８９．３％和８７．１％，具有较近的遗传进化关系。　　关键词：蛋鸭；产蛋下降；鸭黄病毒；ＲＴ－ＰＣＲ；序列分析　　中图分类号：Ｓ８５８．３２文献标识码：Ａ文章编

2、号：0439－８11419－4010-04　　　　ＴｈｅＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆaＦｌａｖｉｖｉｒｕｓＣａｕｓｉｎｇＤｕｃｋＥｇｇＤｒｏｐｓ　　　　ＺＨＡＮＧＲｏｎｇ－ｒｏｎｇ，ＷＥＮＧｕｏ－ｙｕａｎ，ＬＵＯＱｉｎｇ－ｐｉｎｇ，YANGJun，ＷＡＮＧＨｏｎｇ－lｉｎ，ＬＵＯＬｉｎｇ，　　ＡＩＤｉ－ｙｕｎ，ＳＨＡＯＨｕａ－ｂｉｎ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｄｉｓｅａｓｅcausingsevereeggdropａｎｄｄｕｃｋｄｅａｔｈｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄａｔｍａｎｙｂｒｅｅｄｅｒｄｕｃｋｆａｒｍｓｉｎＨｕｂｅｉｐｒｏｖｉｎｃｅｓｉｎｃｅ２０１０．Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｓｈｏｗｅｄｐｏｓｉｔｉｖ

3、ｅｔｏｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ，ｂｕｔｎｅｇａｔｉｖｅｔｏａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ，Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓａｎｄｅｇｇ－ｄｒｏｐｓｙｎｄｒｏｍｅｖｉｒｕｓｂｙＲＴ－ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．ＴｈｅＳｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｂａｓｅｄｏｎｔｈｅａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｌａｖｉｖｉｒｕｓｇｅｎｅｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔｒａｉｎｗａｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｓｔｒａｉｎＴＨＣＡｒａｎｄｓｉｔｉａｗａｎｗｈｉｃｈｓｕｂｍｉｔｅｄｔｏＮｔａｙａｖｉｒｕｓｇｒｏｕｐｏｆＦｌａｖｉｖｉｒｕｓｇｅｎｕｓｉｎＦｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅｆａｍｉｌｙ，ａｎｄｔｈｅｉｄ

4、ｅｎｔｉｔｙｗａｓ８９．３％ａｎｄ８７．１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄs：ｌａｙｉｎｇｄｕｃｋｓ；decreaseofegglaying；ｄｕｃｋｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ；ＲＴ－ＰＣＲ；ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ　　　　２０１０年以来湖北省部分地区大型养鸭场饲养的种鸭和蛋鸭出现了严重的产蛋下降，其中有　　６０００多只蛋鸭出现不同程度的发病，产蛋率从９０％～９５％下降到４０％～４５％，并且死亡三四百只，死亡率达到６％左右，造成了巨大的经济损失。临床剖检可见其卵巢严重充血、出血；肺脏有肉变，并有很多白色圆形小结节；脾脏充血肿大，而腺胃、肌胃及其交界处没有出血点，较正常。对发病

5、鸭进行了相关病毒的病原学检测，检测出鸭黄病毒阳性。根据临床剖检情况，发病鸭卵巢充血、出血严重，并且从鸭病变的卵巢样品中扩增出阳性病毒，因此暂将该病毒命名为鸭出血性卵巢炎病毒，现将相关研究结果报道如下，为兽医工作者临床诊断此病提供一定的依据。　　１材料与主要试剂　　１．１材料　　发病种蛋鸭的肺脏、脑、输卵管、卵泡等组织。　　１．２主要试剂　　ＴｒｙｐｔｉｃＳｏｙＡｇａｒ固体培养基，购自ＤｉｆｃｏＴＭ公司，按说明书配制后使用前加入新生牛血清至终浓度为１０％；ＡＭＶ反转录酶、ＲＮＡ酶抑制剂、ＤＥＰＣ、ｄＮＴＰｓ购自宝生物工程有限公司；Ｔｒａｎｓ2kplusDNAＭａｒｋｅｒ购于北京全式金生物科技有限

6、公司；ＶｉｒａｌＲＮＡＭｉｎｉＫｉｔ购自上海华舜生物技术有限公司；AgaroseGelDNAExtractionKit购自北京庄盟国际生物基因科技有限公司氯仿等试剂为分析纯试剂。　　２试验方法　　２．１细菌分离　　无菌采取病蛋鸭的肝脏、心血和脑组织，接种ＴＳＡ固体平板、普通营养琼脂和麦康凯琼脂等培养基，置３７℃温箱培养过夜。　　２．２引物设计和合成　　参照ＴｅｍｂｕｓｕｖｉｒｕｓＮＳ５基因序列设计了两对引物。第一对引物为上游引物ＤＦＶ－Ｕ１：５′－ＡＧＡＧＣＧＡＴＣＴＧＧＴＡＣＡＴＧＴＧＧＣＴＡＧ－３′，下游引物ＤＦＶ－Ｄ１：５′－ＧＡＴＡＡＧＣＴＧＧＡＣＧＣＡＣＡＧＡＴＴＣＧ－３′，目的片段

7、为４５０ｂｐ。第二对引物为上游引物ＤＦＶ－Ｕ２：５′－ＴＧＣＴＣＴＣＡＡＣＡＣＴＴＴＣＡＣＧＡＡＴＣＴＧ－３′，下游引物ＤＦＶ－Ｄ２：５′－ＧＣＡＧＣＴＣＡＴＧＧＡＡＡＴＧＧＴＧＴＧＡＡＣ－３′，目的片段为３３５ｂｐ。由上海生工生物工程有限公司合成。　　禽流感病毒引物的合成参考国家农业行业标准［１］、新城疫病毒、减蛋综合征病毒的特异性引物由本实验室设计并合成保存。　　２．３病毒ＲＮＡ的提取　　将卵