转cry2a和cry1c基因水稻对意大利蜜蜂的生态安全性

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1、密级:论文编号:中囯农业科学院学位论文转和c/j/C：基因水稻对意大利蜜蜂的生态安全性EcologicalSafetyofTransgeniccry2AandcrylCRiceLinesfortheHoneyBee^Apismelliferaligustica博士研宄生：王园园指导教师：彭于发研宄员申请学位类别：农学博士专业：生研宄方向：培养单位：櫊研宄生院2015年5月独仓Ij性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经

2、发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：Ijg丨g时间：年月曰关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间年月日导师签名：时间

3、年月日中国农业科学院博士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目转和oj/C基因水稻对意大利蜜蜂的生态安全性论文作者王园园专业生物安全研究方向转基因生物安全指导教师彭于发研究员培养单位(研究所、中心）植物保护研宄所姓名职称单位专业签名评阅人答辩中国农业科学院作李新海研宄员作物遗传育种主物科学研宄所席中国科学院动物研戈峰研宄员农业昆虫与害虫防治宄所环境保护部南京环刘标研究员环境科学境科学研究所4)5%答山东省农业科学院路兴波研究员植物病理学植物保护研宄所辩石旺鹏教授中国农业大学农业昆虫与害虫防治委中国农业科学院植梁革梅研究员

4、农业昆虫与害虫防治物保护研宄所员中国农业科学院植何康来研究员农业昆虫与害虫防治物保护研宄所{会议记录(秘书）陈秀萍论文答辩时间地点中国农科院植保所新楼三楼第一会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文转cry2A和cry1C基因水稻对意大利蜜蜂的生态安全性EcologicalSafetyofTransgeniccry2Aandcry1CRiceLinesfortheHoneyBee,Apismelliferaligustica博士研究生：王园园指导教师：彭于发研究员申请学位类别：农学博士专业：生物安全研究方向：转基因生物

5、安全培养单位：植物保护研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEcologicalSafetyofTransgeniccry2Aandcry1CRiceLinesfortheHoneyBee,ApismelliferaligusticaPh.D.Candidate：WangYuanyuanSupervisor：ProfessorPengYufaMajor：BiosafetySpecialty:GMOBiosafetyM

6、ay2015摘要蜜蜂是重要的经济和社会性昆虫，其作为重要的指示性物种被用于转基因抗虫植物环境安全评估中。本研究系统地评价了分别表达Cry2A和Cry1C蛋白的两种抗虫转基因水稻新品系T2A-1和T1C-19对意大利蜜蜂(Apismelliferaligustica)幼虫和成虫的潜在影响。获得研究结果如下：1.基于已报道的幼虫人工饲料及饲喂方法，本研究发展了一种简单、灵敏的评价转基因杀虫蛋白对幼虫直接毒性影响的试验技术，并采用已知对蜜蜂幼虫具有毒性的大豆胰蛋白酶抑制剂SBTI作为阳性化合物，验证了所发展试验体系的有效性和灵敏

7、性。2.采用所构建的试验体系，评价了取食高剂量的Cry2A及Cry1C蛋白对意蜂幼虫的潜在毒性，并以SBTI为阳性对照，牛血清蛋白BSA为阴性对照。结果显示：分别取食混入纯Cry1C(50μg/g)、Cry2A(400μg/g)或BSA(400μg/g)的人工饲料后，2日龄幼虫的存活率和生长发育没有受到影响；且中肠内总蛋白酶、类胰蛋白酶、氨肽酶和α-乙酸萘酯酯酶活性也没有显著变化；组织切片显示幼虫中肠表皮膜没有受到破坏。而取食了含有SBTI(1mg/g)的人工饲料后，2日龄幼虫的存活率显著下降，发育历期显著延长；中肠主要蛋

8、白酶和解毒酶的活性也受到显著影响。通过PCR-DGGE分析也没有发现Cry2A(400μg/g)及Cry1C(50μg/g)蛋白对肠道细菌群落的结构产生显著影响。本试验结果说明了意大利蜜蜂幼虫对这两种Cry蛋白不敏感。3.评价了两种转基因抗虫水稻品系T2A-1和T1C-19花粉对意大利蜜蜂幼虫的潜在影响