聚合抗虫基因和cry2a和cry1c早粳稻分子检测和抗虫性评价

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2、究成果。据我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得黑龙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。：学位论文作者签名：签字日期知／ｊ：年／月ｆ曰学位论文版权使用授权书本人完全了解黑龙江大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并。向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅本人授权黑龙江大学可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，レ可ッ采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。学位论文作者签名：签字日期

3、：＞５年《月日签字日期化年／月Ｐ曰Ｊ学位论文作者毕业后去向：工作单位：：电话：通讯地址：邮编分类号UDC密级聚合抗虫基因cry2A*和cry1C*早粳稻分子检测和抗虫性评价申请人:周青学号:2121261培养单位:生命科学学院学科专业:生物化学与分子生物学研究方向:植物生物技术与生物工程指导教师:李荣田教授完成日期:2015年3月28日中文摘要水稻是世界上最主要的粮食作物之一，全世界一半以上的人口以稻米作为主食。虫害对水稻生产造成严重危害，每年因此而造成巨大的经济损失。苏云金芽胞杆菌(Bt)是一种革兰氏阳性菌，它能够产生对鳞翅目等昆虫

4、具有特异毒性的晶体蛋白。为了防治鳞翅目昆虫，许多Bt基因已被成功的转入到水稻中，目前已获得许多具有抗虫特性的转基因水稻品系。本文以双价Bt抗虫水稻空育131和松粳9号作为研究对象，利用PCR、realtimePCR、ELISA和Southernblot等方法，从DNA水平、mRNA水平、蛋白水平进行研究，从中选育出目的基因遗传稳定、拷贝数低且Bt蛋白表达量高、室内抗虫性效果显著的转基因水稻品系。主要研究结果如下：1.利用根瘤农杆菌EHA105(pbar-cry2A*)和EHA105(pbar-cry1C*)混合菌液介导，对水稻品种松粳9号进行遗传转化，获得

5、含有cry2A*/cry1C*/bar基因的共转化植株；以空育131(cry2A*/bar)与空育131(cry1C*/bar)为亲本，通过有性杂交获得含有cry2A*/cry1C*/bar基因的植株。利用Basta抗感性筛选、试纸条检测、PCR、Southernblot等方法，经过T0～T7代的筛选，成功获得了60个双价Bt抗虫水稻品系(cry2A*/cry1C*/bar)，其中以空育131为亲本的10个，松粳9号为受体的50个。2.实时荧光定量PCR与ELISA检测结果表明不同品系相同组织中Bt基因的转录水平存在差异；相同品系的不同组织中Bt基因的转录

6、水平也存在明显差异；此外，在转录水平上cry2A*基因的转录水平明显高于cry1C*。酶联免疫吸附测定(ELISA)结果表明Bt蛋白的表达量与Bt基因的转录水平存在正相关性；相同品系不同组织中Bt蛋白含量由高到低依次为叶片＞幼穗＞茎鞘＞糙米。3.室内抗虫性结果显示，Bt蛋白含量较高的品系对二化螟幼虫表现出较高的致死率。Southernblot结果表明，经过连续的传代之后，外源基因的遗传趋于稳定，且外源基因的拷贝数相对较低，多数品系介于1～2个，同时单拷贝品系表现出较稳定，较高的杀虫活性，这些培育而成的新材料对于品种选育具有重要的意义。I4.本实验利用反向P

7、CR方法对转基因品系中表现出较好抗虫能力且单拷贝的2-1品系中的cry2A*基因的侧翼序列进行扩增，通过NCBI数据库比对确定其位于第2号染色体上。关键词：转基因；抗虫水稻；苏云金芽孢杆菌；cry1C*；cry2A*IIAbstractRiceisoneofthemostimportantfoodcropsintheworld,morethanhalfoftheworld'spopulationonriceasthestaplefood.Insectpestsposeaseriousthreattoriceproductionwhichcausinghug

8、eeconomiclosseseveryyear.Bacillus