越冬白头鹤（grus monacha）肠道寄生线虫分子检测方法的建立

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1、？－ｉｆ密级：保密期限：告备乂爹硕±学位论文越冬白头鹤（Ｇｒｉ／ｓｍｏｍ／ｃｈｃＯ肋道寄生线虫分子检测方法的建立ＭｏｌｅｃｕｌａｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｍａｔｏｄｅａｒａｓｉｔｅｓｆｒｏｍｐｗｉｎｔｅｒｉｎｇＨｏｏｄｅｄｃｒａｎｅ（Ｇｒｕｓｍｏｎａｃｈａ）学号Ｘ１２２０１００６姓名李博学位类别理学硕±学科专业太尝王化；、子工程领域（）指导教师周立志完成时间２０１５年４月＿会吉認獅Ｃ＇Ｉ

2、－．—？？？？■？－．？．．？独创牲声巧本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加从标注和致谢的地方外，沦文中不包含其他人邑经发表或撰写过的研究成果，化不包含为获得安缴大学或其他教育机构的学位或化书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做巧任何贡献均巴在论文中作了明确的说明并表示谢意。Ｌ学位论文作者签名；签字日期；年户月日城］学位论文版权使巧授权书本学位论文作者完全了解安歡大学有

3、关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和墙盘，允许论文被查阅和借巧。本人授权安散大学可Ｗ将学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进行捡索，可ｉ乂采用影印、缩印或扫描等义制手段保存、汇编学位论文。———（保密的学位论文在解密后适巧本授权书）学位论文作者签名；导师签名；４诗１卿：签字日期月日签字日期；＞矿年）月Ｍ日；州Ｔ年５。＾＾摘要，寄生虫在野生鸟类中感染相当普遍，在寄生虫的影响下鸟类可能发生疾病造成生校发育停滞，甚至发生

4、致死性的严重疾病等，因此成为保护生物学研巧的一Ｇｆｔｆｌ一热点问题之。白头鹤（ｒｕｓｗｏｎｆｌｃ）是种脆弱的大型迁徙水鸟，种群保护的形势十分严峻，考虑其颜危性在进行寄生虫感染状况调查时大多采取最简单伤害最小的非损伤性取样法取其粪便样品。据Ｗ往研究表明，在白头鹤粪便中能检出大量的肠道寄生虫，主要包括球虫，线虫和吸虫等。但是由于传统的形态学鉴别方巧的局限性，寄生虫的种类鉴别研究并不透彻，建立白头鹤肠道寄生虫的分子检测方法对寄生虫进巧快速、准确的鉴别尤为重要。本研巧主要探讨野生白头鹤肠

5、道寄生线虫感染的分子检测方法。于２０１３年１１月至２０１５年２月期间，收集了在长江中下游地区郵阳湖、菜子湖和升金湖越冬的白头鹤粪便样本共９０８份。采用饱和盐水漂浮法进行白头鹤肠道寄生虫形态学鉴定，白头鹤粪便样品中共检测出５类寄生线虫，即毛细线虫？’？诚ａ（Ｃａ７；仏ｊｒ／ｆｌｓ．）、类圆线虫脚ｓ．）、ｃａｒｓ．）、毛／ｐｐ／化ｙｐｐ禽砸虫（瓜ｐｐ’Ａ圆线虫（趴ｃＡｏｓ／ｒｏｎｇ脚ｓｓｐｐ．）、钩虫（ｎｃｙｌｏｓｔｏｍａｔｉｄａｅｓｐｐ．）等。线虫感染率最高的种类为禽蜗虫（６．９％）（

6、４．％）、类圆线虫（４．１％）。，其次为毛细线虫６在有限稀释法对越冬白头鹤粪便样品中寄生虫卵分离的基础上，进行了白头鹤种群肠道寄生虫分子检测方法的探索。通过对毛细线虫单虫卵分别进行液氮°／８５Ｃ水浴、超声破碎、裂解液消化等Ｈ种前处理后进行焚光ＰＣＲ检测，结果表明单虫卵经裂解液消化后用于羡光ＰＣＲ检测的效果明显而稳定。所建立的寄生虫卵巧光ＰＣＲ检测方法敏感性强，可！＾＾满足微量模板高检出率的要求。粪便经漂浮和短暂的离屯、沉淀后即可进行巧光ＰＣ民检测。检测过程中镜检步骤的省略使得非专

7、业人员即可操作，减少了工作量，并能够满足快速、批量的寄生虫检测一－需要。本研究建立的方法中，ＲＴＰＣ民能够快速，寄生虫虫卵经步预处理即可准确地检测出阳性样品，显著提高检测效率，且经实验验证检测效率离于镜检处，ＩＴＳ区引物理。本研究借助巧光ＰＣＲ检测的高度特异性设计毛细线虫，经特异性实验验证表明与钩虫、毛圆线虫等鹤类常见寄生虫无交叉反应。此方法的探１越冬白头鹤（Ｇｎｔｆｗｏ？ｆｌｃ／ｗ）肠道寄生线虫分予检測方法的建立索可为今后毛细线虫的分子检测提供可靠的方法，并为粪便中其他寄生虫的

8、检测提供了一条有效途径。关键词：白头鹤；粪便ｉ线虫；虫卵；分子检测ＩＩＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔｒａｃｔＰａｒａｓｉ化ｓａｒｅｕｉ１：ｅｃｏｍｍｏｎｉｎｗｉｌｄｂｉｒｄｓ．Ｔｈｅｃａｎｒｅｓｕｌｔｉｎａｒａｓｉｔｉｃｄｉｓｅａｓｅｓｑｙｐｏｆｂｉｒｄｓｃａｕｓｉｎｒｏｗｔｈｓｔａｎａｔｉｏｎａｎｄｅｖｅｎｄｅａｄｌｓｅｒｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓａｎｄ