苹果茎尖超低温保存与脱毒研究

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1、分类号••S661.1学校代码：10712UDC：633/635研究生学号：2012050346密级：公开灶衣林奇牧大学2015届攻读项士学位研究生学位（毕业）论文苹果茎尖超低温保存与脱毒研究学科专业果树学___________研究方向超低温种质资源保存研究生胡凌云___________指导教师王乔春教授完成时间2015年5月中国陕西杨凌Classificationcode:S661.1Universitycode:10712UDC:633Postgraduatenumber:2012050346Confidentia

2、litylevel:Public_ThesisforMaster’sDegreeNorthwestA＆FUniversityin2015CRYOPRESERVATIONANDVIRUSEERADICATIONINSHOOTTIPSOFAPPLEMajor:MalonogyResearchfield:CryopreservationNameofPostgraduate:HuLingyunAdviser:ProfessorWangQiaochunDateofsubmission:May2015YanglingShaanxi

3、China研究生学位（毕业）论文的独创性声明本人声明：所呈交的硕士学位（毕业）论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料^与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明

4、确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：ZWS年穸月■^日导师指导研究生学位（毕业）论文的承诺本人承诺：我的硕士研究生._所呈交的硕士学位（毕业）论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现岗职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我愿接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任-关于研究生学位（毕业）论文使用授权的说明本学位（毕北）论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意

5、西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送又论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位（毕此）论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国优秀硕士学位论文全文數据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位（毕业H仑文及其相关的工作成果时，将以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，愿意按《中华人民共和国著作权法》等有关规定接受处理并承担法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人(包括研究生本人)未经本论文作者的导师同意，不

6、得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）研究.苹果茎尖超低温保存与脱毒研究摘要苹果是世界重要的果树，苹果种质资源的保存为苹果的新品种育种提供了基本材料。超低温保存被认为是目前植物种质资源最有效的保存方法。本实验以苹果‘嘎啦’为实验材料，建立稳定的小滴玻璃化超低温保存体系，再生率达到63.3%，该技术在其他五个苹果基因型上的应用表明，再

7、生率最高的是‘嘎啦’，最低的是‘望山红’（Malus×domestica‘Wangshanhong’，36%），平均再生率是46%。主要的技术步骤是：取0.5-1.0mm的苹果茎尖预培养1d，用植物玻璃化溶液（PVS2）处理40min后，转入铝箔条上的PVS2（6μL）小滴中，直接投入液氮中保存。用甲苯胺蓝染色，定位小滴玻璃化超低温处理后苹果茎尖的成活细胞表明，只有当第一、二叶原基以及顶端分生组织的大部分细胞成活，才能再生成植株。ISSR、RAPD和流式细胞检测表明，超低温后再生植株是遗传稳定的。苹果病毒病害一直是影响

8、苹果生产的重要因素，与其他病害不同，一旦植物感染病毒病害，难以用任何化学方法治疗。栽培无毒苗是生产中防治病毒病害的有效方法，生产无毒苗是实现无毒化栽培的关键。本实验用超低温疗法成功地脱除了M9和M26两种砧木的苹果茎痘病毒（ASPV），当取茎尖（1.0-2.0mm，带5-6片叶原基）时脱毒率分别是57.6%和62.8%。茎尖组织培