舞毒蛾ⅰ型几丁质酶基因催化区截短和定点突变的研究

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1、，＇＇遽扇．．纖／壌麵．’八矜撃拳．ｋ．樂．＇：％．－记＇、＊奔－节；Ｖ乂．；若＾；；分类号密级．＇’．、？缴讀１太原理工大学噪考：：！硕±学位论文一掉＊．ｆ，？．．题目舞毒蛾Ｉ型几Ｔ质酶基因懼化区截短和定点突变的阱究．‘ａ巧．■‘多．Ｔｒｕｎｃａｏｎａｎｄ－ｔｉＳｈｅ出ｒｅｃｔｅｄＭｕ化ｅｎｅｓｉｓｏｎＣａ化ｌｔｉｃ，一一＿曰ｇｙ央文并列题目ＤｏｍａｉｎｏｆＬｖｍａｎｔｒｉａＤｉｓｐａｒＣｈｉｔｉｎａｓｅ（ＣｌａｓｓＩ）研究生姓名废艳霞：２０１２５

2、１０８７６学号：专业工程与技术：化学研究方生物化学－向：导师姓名莖坚圣：孔，；：義职称副教授：ｉ－．ｆ．姻学位授予单位：太原理工大学论文提交曰期２０．＇１５／０５１地址：＿＾＾：＾户心ｊｃｔ？１＇太原理工大学－谋；．，．．—；豪暴纖‘讓；ｊ－；ｎｖ．巧．．．Ｖ．．．：声明，本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在指导教师的指导下／独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究。做出重要贡献的

3、个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明本声明的法律责任由本人承担。。论文作者签名：版地ｆｅ日期：葛（川关于学位论文使用权的说明、使用学位论文的规定本人完全了解太原理工大学有关保管，其中包括：①学校有权保管、并向有关部口送交学位论文的原件与复印＾件１文采用影印、缩印或其它复制手段复制并保存学位论文；；②学校可＾１又学术交流为目的⑤学校可允许学位论文被查阅或借阅；④学校可，复制赠送和交换学位论文；⑥学校可公布学位论文的全部或部分内容（保密学位论文在解密后遵守此规定）。签名；Ｍ撫礙日期：伽Ｉ中导师签名毛ｈｙ：期：娘／＿日太

4、原理工大学硕±研巧生学位论文舞毒蛾Ｉ型几Ｔ质酶基因催化区截短和定点突变的硏究摘要舞毒蛾遍及世界各地，对林业造成了极其严重的威胁。对舞毒蛾的防，目前大致包括性信息素诱导等生物方向防治治可，还！Ｍ从多个方向着手有人工收集虫卵等人工防治Ｗ及最为传统的农药喷洒等的化学治理。在近几年里，利用生物方法对舞毒蛾进行防治越来越受到人们的关注。在舞毒一－蛾的表皮及中肠围食膜中都存在大量的几Ｔ质，它是种由ｐｉ４糖昔键，－古廝葡萄糖胺连接多个Ｎ（ＧｌｃＮＡｃ）形成的线性多糖，在屋虫的生长和发育过程中，几下质周期牲的产生和降解对其生长发育起着关键性的作一用

5、。几下质酶可降解几了质机制，本课题通，生物防治就是利用这过对舞毒蛾几下质酶基因催化区的截短和定点突变做相关研究，深入分析凡Ｔ质酶催化其底物几了质降解的催化机制，为更加深入的利用其离效的杀虫提供相应的理论方面支持。本研究首先将舞毒蛾Ｉ型几了质酶基因ａｄＣ／ｆ：Ｔ５）利用ＰＣＲ技术进行－Ｎ２０催化区截短和定点突变，得到四种催化区截短基因分别为Ｌ此７ｍ，王况－－／－：釘Ｔ５Ｎ６０，王说：好Ｔ５Ｃ２０，心Ｃ试Ｔ５Ｃ６０，Ｗ及六种催化区定点突变基因，ＬｄＣＨＴ５－－ＤＵ？－－ＤＵ＾Ａ，ＬｄＣＨＴ５，＾ＬｄＣＨＴ５ｍＡｍＬｄＣＨＴＳＤＵＳＡ，，，

6、一－Ｄ／－王化：货Ｔ５１４５Ｅ心Ｃ抒巧Ｄ１４５Ｎ。并将这些基因都连接到个用于真核表，达的载体中，再利用Ｂａｃ化Ｂａｃ表达系统，获得含各目的基因的相应穿梭载－－Ｎ２０－－－体（Ｂａｃｍｉｄｉ：＾／Ｃ７ｍ，ＢａｃｍｉｃｋＬ＾／ＣＷｒＪＮＧＯ，ＢａｃｍｉｄＩｔｆＣＷｒ５Ｃ２０，－－－－－心／Ｄ１４３Ａ－Ｂａｃｍｉｄ王化：／／Ｔ５Ｃ６０，ＢａｃｍｉｄＣ／／Ｔ５，Ｂａｃｍｉｄ王化：试Ｔ５Ｄ１４３Ｅ，Ｉ太原理工大学硕：ｔ研究生学位论文－－－－－－ｍＡＳＥＢａｃｍｉｄＩ＾＾Ｃ／／ｒ５Ｄ１４３Ｎ，Ｂ２ｉＣｔｍｄＬｄＣＨＴ５Ｄ＼Ａ５Ａ，ＢａｃｍｉｄＬｄＣＨ

7、Ｔ５，－Ｂａｃｍ－ｉｄＺ此试Ｔ５Ｄ１４５Ｎ），利用转染试剂ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎｒｅａｇｅｎｔ将其转染到草地贪夜蛾细胞Ｓ巧中，进而表达目的蛋白。两类蛋白的纯化方式都是通过将粗一－ｉ蛋白过ＮＮＴＡ镶柱做相应＾纯化，经除杂纯化Ｗ后的各蛋白可Ｗ为下步更深层次的研巧相应的酶学性质提供基础。－－对蛋白酶学活性的研究利用ＣＭｃｈｉｔｉｎＲＢＶ为底物，研究表明，催化区截短的四种蛋白均没有酶活，不利于后续实验。而定点突变后的催化区相关实验结果显示：在六个突变体中，Ｄ１４３Ｎ具有较高的活性，Ｄ１４３Ｅ次么一，分别