羊布鲁氏菌感染绵羊的抗体、病原及组织病变动态的研究

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1、分类号：单位代码：密级号博士学位论文羊布鲁氏菌感染绵羊的抗体、病原及组织病变动态的研究研究生局晓嘉指导教师吴清民教授合作指导教师匡宇副教授申请学位门类级别农学博士专业名称预防兽医学研究方向动物传染病诊断与防治技术所在学院动物医学院Ph.DDissertationDynamicStudyontheAntibody,PathogenandPathologyofSheepInoculatedwithB.melitensisPh.DCandidate:XiaoleiGaoSupervisor:ProfessorQingminWuMajor

2、:PreventiveVeterinaryMedicineResearchField:DiagnosisandcontroltechniquesofanimalinfectiousdiseaseChinaAgricultureUniversityJune,2015本研究由国家项目（项目编号和国家自然科学基金（项目编号资助独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其

3、它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：名会时间：年月《曰关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并孚受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名

4、：、‘时间：年月日摘要布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的人畜共患病，在世界范围内造成了巨大经济损失。布鲁氏菌主要寄生于网状淋巴组织，对生殖、神经和骨骼系统造成严重的免疫系统病理反应，并常伴有菌血症。因布鲁氏菌种型复杂，受到菌株、剂量和宿主遗传背景等因素的影响较大，防控过程中迫切需要了解不同菌株与宿主相互作用的过程及其后果。为研究羊种布鲁氏菌感染的自然发病史及对动物组织器官的致病作用，本研究用羊种布鲁氏菌参考株人工接种月龄绵羊并观察接种动物临床表现，于接种后第、、、、、、随机挑取感染组公母绵羊各只击晕后放血致死解剖，记录剖检变化，同时采集

5、血液和各组织器官样品各两份以用于病原学检测以及病理组织学、免疫组织化学（和病原体原位杂交（检测，试图通过动物感染后抗体和病原体的动态变化及分布解读临床患病动物的自然发病史，为羊种布鲁氏菌病防控和净化提供参考。研究结果显示，非妊娠绵羊人工感染后大约会出现一过性低烧和厌食，随后临床症状消失，表现为亚临床状态。感染早期被击晕后放血致死的动物，在大体解剖病变上仅见肝脏、体表淋巴结以及脾脏轻微或中度肿大，其他组织器官未见明显变化。病理组织学检测发现，富含网状内皮系统的免疫器官病变最明显，其中第病变最严重，随后逐渐减轻，感染后时基本恢复正常。

6、用免疫组化（技术对上述组织样品检测结果显示，脾脏、肩前淋巴结、腮腺淋巴结和颌下淋巴结在感染早期阶段可见布鲁氏菌抗原，阳性信号主要分布于巨噬细胞和中性粒细胞的胞浆中。以原位杂交（试验对上述组织中存在的布鲁氏菌特异性的检测发现，阳性信号广泛分布于心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、睾丸、十二指肠、空肠、回肠、真胃、膀胱等器官组织中，感染时检出率最高，阳性信号最强，感染后仍然可从颌下淋巴结组织中检出。其中，阳性细胞主要包括巨噬细胞、中性粒细胞、各种上皮细胞以及淋巴细胞。细菌分离结果显示，感染后布鲁氏菌即可形成全身性感染，随后逐渐被清除

7、，后所釆集的组织样品无布鲁氏菌被检出，膀胱和肌肉样品在整个试验期内均未检出布鲁氏菌。整个感染过程中抗体滴度定期检测发现，感染后可检测到特异性凝集抗体，抗体滴度最高，随后开始下降，时抗体阴性。上述研究结果初步揭示了非妊娠状态绵羊和性成熟公羊感染羊种布鲁氏菌的自然史，即病理学变化和病原分布主要集中于富含网状内皮系统的器官和组织，感染后即可在所有的靶器官和组织内发现明显病变和病原分布，并随时间推移感染的器官组织中病变程度和组织病原分布及其细菌数量逐渐减弱，感染后基本消失。对采集样品进行四种抗原检测方法比较分析显示，检测结果与经典的细菌分

8、离技术相比敏感性更高，经技术方法优化后可望开发为布鲁氏菌抗原检测的“金标准”。本研究通过对布鲁氏菌人工感染绵羊抗体滴度、细菌分离、免疫病理学和分子病理学检测技术的对比分析，初步阐释了羊种布鲁氏菌感染后的抗体消长规律、病原分布动态变化规律及各器官组织