禽脑脊髓炎病毒vp1蛋白纳米抗体的筛选及活性检测

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1、分类号：S852.65+9.6学校代码：10712UDCi636,09研宄生学号：2012051333密级：公开灶衣林贵牧大学2015届攻读硕士学位研究生学位（毕业）论文禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的筛选及活性检测学科专业预防兽医学研究方向动物疫病防治研究生范文涛指导教师张淑霞副教授完成时间2015年5月中国陕西杨凌研究生学位（毕业）论文的独创性声明本人声明：所呈交的颂士学位（毕业）论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究结果；论文中的研究数据及结果的获得完全符合学校《关于规范西北农林科技大学研究生

2、学术道德的暂行规定》，如果违反此规定，一切后果与法律责任均由本人承担尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究结果，也不包含其他人和自己本人已获得西北农林科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文的致谢中作了明确的说明并表示了谢意■>研究生签名：泰t為时间：>75年/月；日导师指导研究生学位（毕业）论文的承诺本人承诺：我的颂士研究生碡所呈交的硕士学位(毕业）论文是在我指导下独立开展研究工作及取得的研究结果，属于我现岗

3、职务工作的结果，并严格按照学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》而获得的研究结果。如果违反学校《关于规范西北农林科技大学研究生学术道德的暂行规定》，我必须接受按学校有关规定的处罚处理并承担相应导师连带责任。导师签名：#时间年/月I日关于研究生学位（毕业）论文使用授权的说明本学位（毕业）论文的知识产权归属西北农林科技大学。本人同意西北农林科技大学保存或向国家有关部门或机构送交论文的纸质版和电子版>允许论文被查阅和借阅；同意西北农林科技大学将本学位（毕业）论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国优秀硕士学

4、位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。本人保证，在毕业离开（或者工作调离）西北农林科技大学后，发表或者使用本学位（毕业）论文及其相关的工作成果时，必须以西北农林科技大学为第一署名单位，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。任何收存和保管本论文各种版本的其他单位和个人（包括研究生本人）未经本论文作者的导师同意，不得有对本论文进行复制、修改、发行、出租、改编等侵犯著作权的行为，否则，按违背《中华人民共和国著作权法》等有关规定处理并追究法律责任。(保密的学位论文在保密期限内，不得以任何方

5、式发表、借阅、复印、缩印或扫描复制手段保存、汇编论文）研究生签名：时间：y/i年E)+Classificationcode:S852.659.6Universitycode:10712UDC:636.09Postgraduatenumbers:2012051333Confidentialitylevel:PublicThesisforMastersDegreeNorthwestA＆FUniversityin2015SCREEINGANDACTIVEDETECTIONOFNANOBODYFORTHEVP1PROTEIN

6、OFAVIANENCEPHALOMYELITISVIRUSMajor:PreventiveVeterinaryMedicineResearchfield:AnimalEpidemicDiseaseControlNameofPostgraduate:FanWen-taoAdviser:associateProf.ZhangShu-xiaDateofsubmission:May2015YanglingShaanxiChina禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白纳米抗体的筛选及活性检测摘要禽脑脊髓炎病毒(avianencephalom

7、yelitisvirus，AEV)主要侵害幼禽的中枢神经系统，引起雏鸡、火鸡、鹌鹑等出现共济失调、麻痹和头颈震颤。产蛋鸡感染AEV后无明显神经症状，但能引起产蛋量的下降。AEVVP1蛋白高度保守且是主要的宿主保护性免疫蛋白，含有大多数特异性中和位点和主要的中和表位。目前AE缺乏有效的诊断和治疗方法，只能通过免疫接种进行预防。针对AEV高效、特异、廉价抗体的开发，更有利于AEV的早期检测和研究。纳米抗体对抗原亲和力和特异性高、稳定性强、成本低，便于大规模生产，在病原的检测与研究方面有广阔的应用前景。本研究的目的是以AE

8、V-VP1蛋白作为诱饵蛋白，采用酵母双杂交技术对非免疫双峰驼纳米抗体酵母文库进行筛选，期望得到能与AEV反应活性高的纳米抗体，为该病的诊断和病原学研究奠定基础。主要获得以下结果：1.设计合成1对含有EcoRI、SalI双酶切位点的特异性引物，采用PCR方法扩增AEVSX株VP1基因，将其克隆到pGBKT7载体上，命名为pBD-VP1，对其进行序