睡眠剥夺后海马蛋白质组学研究

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1、授予单位代码10089翁学号或申请号20123071H妗科大5HebeiMedicalUniversity硕士学位论文专业学位睡眠剥夺后海马蛋白质组学研究研究生：赵会利导师：杨国锋教授专业：神经病学二级学院：第二医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大

2、学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则’承許相应的法律责任。：/W�.,v‘rv研究生签名：赵佘釗导师签章二级学院签章w,.v,1'宇夕月>丨日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：知受糾导师签章:^/f)^‘年3月引日目录中文摘要………………………………………………………………

3、……1英文摘要……………………………………………………………………4英文缩写……………………………………………………………………7研究论文睡眠剥夺后海马蛋白质组学研究前言……………………………………………………………………9材料与方法……………………………………………………………10结果……………………………………………………………………12附图……………………………………………………………………14附表……………………………………………………………………15讨论……………………………………………

4、………………………18结论……………………………………………………………………28参考文献………………………………………………………………28综述睡眠减少对神经退行性疾病的影响………………………………36致谢…………………………………………………………………………45个人简历……………………………………………………………………46中文摘要睡眠剥夺后海马蛋白质组学研究摘要目的：睡眠在人类生活中占有很重要的位置。睡眠剥夺（sleepdeprivation，SD）是指由于现代生活及工作上的需要、周围环境

5、或其他无法避免的原因而不能保证正常的睡眠。睡眠剥夺对人类认知功能的影响是不容忽视的，包括清醒度、警觉性和注意力下降；学习记忆能力降低；执行功能下降；负面情绪增加等。睡眠缺失引起的这些一系列认知功能的障碍，与睡眠缺失导致脑部的某些重要的功能区域及有关其功能的蛋白质的改变密切相关。睡眠缺失后可以在海马区观察到很多变化如神经元的更换、凋亡，树突和突触的重构，在啮齿类动物的前额叶皮层及杏仁核也可以观察到其他一些适应性改变。在睡眠剥夺后海马神经元有明显损伤,神经元形态的改变直接影响其正常生理功能的发挥,睡眠

6、剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡发生。海马是位于脑颞叶内的一个部位，它是组成大脑边缘系统的一部分，担当着关于记忆以及空间定位的作用。海马亦是老年期痴呆患者较早发生病理改变的部位。有研究认为睡眠剥夺与很多神经退行性疾病密切相关，而多种神经退行性疾病均发现有某些致病蛋白质的聚集，由此可知，直接对睡眠剥夺后脑组织的蛋白质组变化的研究可更加直观的揭示其引起的机体各系统变化尤其是神经系统改变的病理生理机制。蛋白质是生物体基因功能活动的最终执行者，并直接体现生命现象的复杂性以及多样性。蛋白质组学技术的兴起是进入后

7、基因组时代的标志，它是从整体的角度来研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平、翻译后修饰、蛋白与蛋白之间的作用等，并揭示蛋白质功能与细胞生命现象之间的规律。差异蛋白质组学则是分析不同生物体在不同状态下蛋白质表达的差异，为探索细胞的分子机制、疾病的病理病因及寻找治疗药物靶点提供了可能性的依据。本研究通过对大鼠睡眠剥夺模型的制作，对正常对照组海马组织和睡眠剥夺72小时后海马组织进行差异蛋白质组学研究，找出表达不同的蛋白质，从而探寻睡眠剥夺后引起一系列的蛋白质改变，从而帮助我们进一1中文摘要步深入理解这些

8、蛋白质改变引起一系列疾病的本质。方法:1实验分组：成年雄性Wistar大鼠分为实验组和对照组，实验组大鼠进行72小时睡眠剥夺，对照组大鼠维持正常睡眠-觉醒周期。2制作大鼠睡眠剥夺模型，实验组大鼠于睡眠剥夺72小时后处死，断头取脑，分离大脑海马组织；对照组同样取相应部位脑组织，将组织放EP管中后置于-80℃冰箱中备用。3进行大鼠海马组织蛋白质提取并使用胰蛋白酶酶解脱盐后待用。4将制备好的样品肽段用TMT标记，上样buffer溶解，胶条水化，并经TFA酸化后进行C18Zip-Tip脱盐