玉米多叶突变体lfy1的遗传分析、精细定位和克隆

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1、分类号：单位代码：密级学号：博士学位论文玉米多叶突变体砂的遗传分析、精细定位和克隆研究生杜雪梅指导教师王建华教授申请学位门类级别农学博士专业名称禾中〒禾斗宇支研究方向玉米分子生物学所在学院农学与生物技术学院年月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明

2、并表示了谢意。学位论文作者签名：和时间：年月曰关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：时间：年月房日本研究由科技部“”项目玉米产量和品质性状全基因组选择育种体系的建立和应用资助摘要玉米砂

3、突变体主要表型为穗上多叶，其不仅是研宄玉米茎尖生长点发育机制的重要突变体，也是饲用玉米育种的重要种质。前人将砂基因初定位在号染色体长臂上，但至今仍未克隆。在本研宄中，我们进一步证实砂突变体在其后代分离群体中的表型受遗传背景影响明显。利用砂突变体与不同自交系构建的遗传群体，我们通过图位克隆法对其精细定位，构建物理图谱，且找到其他影响该表型的位点。此外，利用自然群体对玉米穗上叶数和荀叶数进行了全基因组关联分析。主要结果如下：突变体并不是典型的显性突变体，受遗传背景影响明显。在与得到的分离群体中，穗上叶数分布呈现典型的质量性状分

4、离比，在与郑得到的分离群体中，穗上叶数呈现典型的数量性状遗传分布。因此，选择群体作为精细定位的遗传群体，通过开发和分子标记，将砂基因的候选区间缩小至参照基因组。三个标记与砂基因共分离，利用其鉴定基因型，观察到砂突变体茎尖生长点发育受到严重抑制。根据参考基因组，对候选区间内和两个候选基因进行了序列测定、转录和蛋白水平分析。基因在突变体与之间有差异，但是与郑等自交系完全一致，且表达量未检测到明显差异。突变体中，基因第八内含子有一转座子插入，但并未影响该基因转录长度，转基因株系并未出现多叶表型。说明和可能并不是突变体的候选基因。

5、；通过构建蹄选砂突变体文库，郑文库，得到候选区域物理图谱。突变体文库中，个阳性克隆可覆盖整个候选区域。对其中一个阳性克隆测序证实在突变体中，候选区域长度至少大于。郑文库中对的一个阳性克隆进行测序，获得约序列，其序列与有的重叠区域，且序列完全一致。说明郑与突变体的基因组序列更为接近，两者之间序列的差异之处才可能是真正的突变位点。突变体与郑构建的分离群体穗上叶数呈现正态分布，符合数量性状遗传规律。利用个标记，突变体与郑的群体个单株，对穗上叶数进行定也，共定位到个影响穗上叶数的位点，其中基因所在的位点贡献率最高，’为贡献率次之，

6、为通过对、群体的基因型和表型分析进一步验证和两个位点。且证实与标记紧密连锁’与标记紧密连锁。连续两年统计个自交系组成的关联分析群体的穗上叶数和苞叶数，数据分析表明，穗上叶数和苞叶数相关系数为。对穗上叶数进行全基因组关联分析，以值为显著性标准，共检测到个显著性位点。玉米苞叶数的全基因组关联分析，显著性标准设置为值共有个显著性位点被检测到。关键词：穗上叶数图位克隆分子标记候选基因AbstractLeafy(Ifyl)isadominantmutantinmaizethathasbeenshowntoparticularlyin

7、creasedleafnumberabovetheear.Ithasbeenstudiednotonlyforfloraltransitionmechanismsofthemaizebutalsoasanimportantgermplasmforsilageproductioninmaize.TheIfyllocuswasreportedtobelocatedonthelongarmofchromosome3，，，，，，29E3BACcloneshowssignificantdiferencefromB73referenc

8、egenomeandgivesalongersequence(>90kb)byblastontoB73genomesequence.Furthermore,ApositiveFosmidclone(26D6)forGRMZM2G072080whichdetectedformzheng58Fosmidli