猪pml的抗病毒作用及伪狂犬病毒对其产生的拮抗机制研究

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1、分类兮：单位代码：密级号：博士学位论文猪的抗病毒作用及伪狂犬病毒对其产生的括机制研究研究生：许傲天士匕十日寸教师：唐军教授申请学位门类级别：农学博士专业名称：兽医生物医学研究方向：兽医生物技术所在学院：动物医学院二零一五年六月Ph.D.DissertationStudyonantiviraleffectsofswinePromyelocyticlekumiapro?tein(PML)andthemechanismthatpseudorabiesvirusescapedswinePMLantiviraleffectsPh.D.Candidate:AotianXuSuper

2、visor:Prof.JunTangMajor:VeterinaryBiologicalMedicineResearchfield:VeterinarybiologicaltechnologyChinaAgriculturalUniversityJune,2015独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中己经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确

3、的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：年《月关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名：时间：艾年彡月摘要核体（是哺乳动物细胞中普遍存在一种动态的亚细胞核结构。是核体的主要组织者，参与多种生物学过程。核体具有天然的抗病毒作用，与病

4、毒感染和致病性有着密切的关系。目前抗病毒的机制还不十分清楚，对生物学功能的研究也主要集中在人和小鼠，对其他动物功能研究很少，开展猪抗病毒作用的研究有助于深入理解抗病毒的机制。为开展猪抗病毒作用研究，对猪基因进行了克隆和特异性抗体制备；对猪核体的亚细胞定位、形态结构及生物学功能进行分析；并以猪伪狂犬病毒（感染为模型，探讨了猪核体和病毒之间的相互作用。感染可以干扰猪的形成，为了进一步研究病毒哪些基因参与到这一过程，建立了一种基于系统构建基因缺失的方法，将基因组和系统共转染细胞，拯救出来的病毒几乎是被编辑过的基因缺失病毒；还建立了一种不依赖同源重组机制向基因组插入外源基因的方

5、法，该方法仅需要构建一个包含打靶序列和外源基因表达盒的供体质粒，将供体质粒、病毒基因组和系统共转细胞，拯救出来外源基因插入的重组病毒效率高达。稳定表达猪可以抑制野生型增殖，而且对缺失毒株的抑制能力更强，显示猪具有抗病毒作用。利用技术构建猪敲除的细胞系在细胞系上，猪对野生型及缺失病毒均有较强抑制作用，且对缺失病毒抑制作用强于野生型病毒；但在细胞系上，猪对野生型及缺火抑制作用减弱，同时猪丨对两种病毒抑制能力的差异减小，说明猪内源性对猪丨介导抗病毒作用至关重要，提示猪参与到猪诱导的同有免疫中。在感染早期，猪的形态结构就遭到破坏，病毒早期蛋白可以干扰猪内源性和稳定表达猪形成的，

6、而缺失毒株干扰猪的能力显著下降。野生型感染引起稳定表达的猪降解，降解过程依赖蛋白酶体途径，缺失病毒对猪降解能力显著降低，表明在感染早期对猪的破坏主要是由介导的。综上所述，本文克隆、鉴定猪证明了猪本身有抗病毒作用以及参与介导的抗病毒防御；并初步探讨干扰猪形成及逃逸猪抗病毒的机制；建立了一种基于系统构建基因缺失的方法，为深入了解猪抗病毒及逃逸宿主防御的机制奠定了基础。关键词：猪，抗病毒作用，猪伪狂犬病毐，AbstractPromyelocyticleukaemianuclearbodies(PML-NBs)aredynamicintranuclearstructuresin

7、mam?maliancells.PMListheorganizerofPML-NBs.AccumulatingevidenceshaveencouragedthatPML-NBsrepresentpreferentialtargetsforviralinfectionsandthatPMLplaysanimportantroleinthemechanismofthehostintrinsicantiviraldefenses.However,mostofthesestudiesmainlyfocusonhu?manvirusesinste