滇补、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因转录的影响

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2、（姓名、职称、单位名称）申请学位级别硕±学科专业生物化学与分子生物学提巧论女日期２０１５＝．０４．２７）．ｎＳ．２９论文答辩日期２ｎｉｆ、曰学位授予单位和日期西南林业大学２ＱＵ！８答辩委员会主席黄兴奇独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工，作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加レッ标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得西南林业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做

3、的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。作者签名；）曰：ｆｃ３Ｍ期年月ｆ日户／ｊ＾论女使用授权论全、本学位文作者完解并同意西南林业大学有关保留使了用学论，送校有权保向国家有关部口或交论位文的规定学留并化构文的复，许被借。西业可印件和磁盘允论文查阅和阅本人授权南林大学Ｗ将位论文的全部或部内入行，可采、学分容编有关数据库进检索用影印缩扫描等手存、汇。印或复制段保编学位论文（）保密的学位论文在解密后应遵守此规定。；：作者签名导师签名私跋句广：＾＾曰期年月曰EFFECTSOFT

4、HEEXTRACTSFROMCELTISKUNMINGENSISANDALNUSNEPALENSISONTRANSCRIPTIONALLEVELOFVITELLOGENINANDITSRECEPTORINTOMICUSYUNNANENSISAMasterThesisSubmittedtoSouthwestForestryUniversityMajor:BiochemistryandMolecularBiologyAuthor:ZhaoYanmingAdvisor:Prof.YangBin,A.P.ZhuJiayingSchool

5、:CollegeofLifeScience摘要摘要云南切梢小蠹Tomicusyunnanensis是为害多种松树的次期性蛀干害虫，其寄主中又以云南松受害最为严重。经过前期的研究发现滇朴、旱冬瓜叶片提取物能够干扰云南切梢小蠹产卵。因此，本研究选择了与昆虫产卵密切相关的卵黄原蛋白及其受体基因进行研究，并且探索滇朴、旱冬瓜叶片提取物对云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因在转录水平上的影响，这有利于进一步阐明非寄主气味影响云南切梢小蠹产卵的分子机制。为了能更方便快速获得云南切梢小蠹的卵黄原蛋白及其受体基因序列，对云南切梢小蠹进行了转录组测

6、序。测序共获得了28837383条cleanreads，经拼接得到了47408条unigenes。这些unigenes有17023-5条在Nr数据库里得到注释（E-value<10）。基于构建的转录组数据库，共鉴定获得卵黄原蛋白及其受体基因序列各4条。依据转录组鉴定获得的片段序列以及卵黄原蛋白及其受体基因的保守结构序列设计引物，克隆获得了云南切梢小蠹卵黄原蛋白及其受体基因片段，长度分别为570bp和162bp。多序列比对分析发现，云南切梢小蠹卵黄原蛋白基因与黑山大小蠹Dendroctonusponderosae、白松脂象甲Pis

7、sodesstrobi及棉铃象甲虫Anthonomusgrandis卵黄原蛋白基因在氨基酸水平上相似性分别高达76%、61%、60%。云南切梢小蠹卵黄原蛋白受体基因与黑山大小蠹、赤拟谷盗Triboliumcastaneum卵黄原蛋白受体基因在氨基酸水平上相似性分别为88%和47%。卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受体系统发育树结果均显示云南切梢小蠹与鞘翅目昆虫聚在一起。实时荧光定量PCR结果显示，云南切梢小蠹卵黄原蛋白基因在雌虫的头、胸、翅、卵巢和其余残体中均有表达，而卵黄原蛋白受体基因则在雌虫卵巢组织特异性表达。卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受

8、体在不同发育时期的表达具有一致性，均在蛹期及成熟的雌虫中转录水平较高，在其他时期的转录水平相对较低或极其微弱。滇朴、旱冬瓜叶片提取物干扰实验发现，滇朴叶片提取物干扰云南切梢小蠹后其卵黄原蛋白基因的转录水平与对照组相比均下降；而卵黄原蛋白受体基因的转录水平与对照相