淡色库蚊抗氯氰菊酯机理及防治研究

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1、学校代码：10270分类号:Q5学号：122200921上善呼皮夫營硕士学位论文淡色库蚊抗氯氰菊酯机理及防治研究学院：生命与环境科学：学P完专业：生物化学与分子生物学研究方向：生化药物学研究生姓名：李庆凤指导教师：高菊芳副教授完成日期2015年4月本论文经答辩委员会全体委员审查，确认符合上海师范大学硕（博）士学位论文质量要求。答辩委员会签名：主席（工作单位、职称）：,容1’yl,1卞令厶巧^委员：导师：学位论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宄成果。论文屮除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研宄成果。

2、其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中做了明确的声明并表示了谢意。作者签名：日期：>丨幻论文使用授权声明本人完全了解上海师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：导师签名:日期：上海师范大学硕士学位论文摘要摘要淡色库蚊（Culexpipienspallens）是我国骚扰性家栖优势蚊种，主要分布在中国的中东部和北部地区，是乙型脑炎、班氏丝虫病和西尼罗病毒的传病媒介。目前控制蚊子危害主要依赖于化

3、学合成杀虫剂，其中以拟除虫菊酯类杀虫剂广泛使用的杀虫剂，但是它们的大量使用，使许多害虫陆续产生了抗药性，并逐渐出现交互抗性、多重抗性，甚至出现联合抗性，深入研究抗性的分子和生理生化机理对于建立高敏感的抗性检测方法和制定综合防治措施具有重要意义。本研究的主要内容包括以下五个方面：对本实验室饲养的淡色库蚊幼虫和成＋蚊的抗性测定；对淡色库蚊Na通道不同结构域片段ⅠS6、ⅡS4-S6、ⅡS全长片段和ⅢS6的基因克隆；比较不同龄期与性别的蚊虫体内羧酸酯酶（CarE）、谷胱甘肽转移酶（GSTs）、O-脱甲基酶和乙酰胆碱酯酶（AChE）的酶活力测定；最后通过氯氰菊酯和溴虫腈

4、的单剂，以及与PBO复配来测定对淡色库蚊的生物防治效果。对淡色库蚊的幼虫和成蚊的生物测试中，处理24h后，CR品系幼虫和成蚊点滴及接触筒的抗性系数分别为376.79、22.98和62.73，呈显著性差异，已达到较高的抗药性水平。通过查找相关序列设计击倒抗性（kdr）引物，成功克隆除了Na通道不同结构域的基因片段，分别为333bp的ⅠS6基因片段、371bp的ⅡS4-6基因片段、701bp的ⅡS基因片段和666bp的ⅢS6基因片段。按照推定的氨基酸差异只在ⅡS4-S6和ⅢS6，ⅠS6并无氨基酸的差异，其中ⅡS4-S6是已发现的突变位点，并与蚊虫抗药性有关，但在

5、ⅢS6并没有报道存在本实验克隆的突变位点，该位点是否与抗药性有关以及相关性情况如何还需进一步进行功能方面的深入细致的研究。无论是CR品系还是SS品系，随着龄期的增长，蛋白质含量升高，在蛹期蛋白质含量为最高，为13.22µg/µl和14.17µg/µl。两种品系的蛋白质含量在幼虫和蛹期无差异，成蚊有差异，CR品系均高于SS品系，且雌成蚊均高于雄成蚊。对蚊虫的酶活力测定，在幼虫期，CarE和O-脱甲基酶的比活力，CR品系高于SS品系；在蛹期，CarE、O-脱甲基酶和GSTs的比活力，CR品系显著高于SS品系；在雌成蚊中，这3种酶CR品系均高于SS品系，另外还发现A

6、ChE也有差异；在雄成蚊中，也发现O-脱甲基酶和GSTs比活力差异显著。龄期不同，每种品系的酶活力有差异，分化的性别不同，也呈现了某些酶活力的差异。I摘要上海师范大学硕士学位论文对淡色库蚊幼虫和成蚊具有亚致死剂量的增效醚（PBO）浓度，其结果选择的幼虫幼虫浸渍法的增效醚浓度为100ppm、成蚊点滴法为0.2%和WHO接触筒法为10%。氯氰菊酯与PBO复配的对淡色库蚊SS品系和CR品系的幼虫的增效呈显著性差异，24h的增效系数为6.97和115.32，成蚊点滴法的为3.62和18.26，WHO接触筒法的为3.94和443.64。溴虫腈是一种慢效低毒的杀虫剂，观察

7、时间大约在72h。作为单剂使用时，对两种品系的药效相当，处理72h后，幼虫的抗性系数为1.2，成蚊点滴法为1.23，成蚊接触筒法为1.33，无统计差异。氯氰菊酯与具有亚致死剂量的PBO复配时，SS品系和CR品系幼虫24h后的的增效系数为6.97和115.32，成蚊点滴法的为3.62和18.26，成蚊WHO接触筒法的为3.94和443.64，增效作用均呈显著性差异，表明PBO对氯氰菊酯具有明显的增效作用。溴虫腈与PBO复配后，幼虫和成蚊均出现拮抗作用，表明溴虫腈与氯氰菊酯对淡色库蚊无交互抗性，显示了对抗氯氰菊酯淡色库蚊较好的防治效果。将氯氰菊酯与溴虫腈复配，测定

8、复配试剂对淡色库蚊的共毒力，0.5pp