《氮磷营养盐对腹孔环胺藻（azadinium poporum）生长及产毒水平的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
鷄相义乐料＇（ＸＦＡＮＩ＼ｌ＼１ＫＳＩＴＹ０￥ＣＨＩＮＡ硕壬学位论文ＩＭＡＳＴＥＲＤＩＳ化民ＴＡＴＩＯＮ気巧昔养盐对腹孔环胺藻ｐｏｐｏｒｗＯ生长及产巧水平的彩响论文题目；Ｅｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｈｏｓｐｈｏｒｕｓｎｕｔｒｉｅｎｔｓ０打ｒｏｗｔｈｐｇ’ｓｉｒａｃｉｄｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ／ｉｚａ决。，ｗｗ？ｏｒｗｍ英文题目：ａｎｄａｚａ；ｐｐ邸—蒋保周作者：指导教师：＿＿＿李爱峰副教授＿学位类别：全日制专业学位环境工程专业名称：研究方向：水资源利用与水污染巧制—＊’产产＇２０１５年６月２日 谨、亲人和レ乂此论文献给所有关心和帮助我的老师同学蒋保周 氮踞营养盐对腹孔环胺藻＾〇ｐ〇ｒＷ７）生长及产毒水平的影响、￣．日期：．Ｊ学位论文答辩＞／＾！苗指导教师签字：ｊ為竭八Ｉ答辩委员会成员签字：斗＾、＆ｍＭＴ 化创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果，论文中不包含。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，也不包含未获得其他人己经发表或撰写过的研巧成果（注：如没有其他需要特别说明的，本栏可空）其他教育机构的学位或证书使用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：胃签字日期：父Ｌｆｅ《月＞日学位论文版权使用巧权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项：１，允许、学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘论文被査阅和借阅。２、学校可＾＾将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可心处＂、？中采用影印、缩印或扫描等复制手段保存汇编学位论文同时授权清华大学＂国学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ＜中国知识资巧总库》？授权中国科学技术信息研巧所将本学位论文收录到＜中国学位论文全文数据库＞？）（保密的学泣论文在解密后适用本授权书：学位论文作者签名：导师签字签字曰期：如知店月川签字曰期：７＾耗《月＾曰｜ ’氮權营养盐对腹孔环胺藻（ｙ４ｚａｆｌＶ／７／ｗ７ｐ０ｐ０ｒ￡ｙ／７７）生长及产毒水平的影响摘要近年来，有害赤潮在全球近岸海域频巧爆发，其中部分有毒赤潮不仅加剧海，还会释放多种海洋藻奉素水富营养化程度，严重污染近海养殖环境，威胁水产品食用安全一。其中氮杂螺环酸（ＡｚａｓｉｒａｃｉｄｓＡＺＡ）是最新发ｐ，现的类海洋藻毒素。自１９９５年来因食用沾染氮杂螺环酸的海产品而发生中毒的事件（Ａｚａｓｒａｃｓｅｓｏｓｏｎｎ）ｐｉｉｄｈｌｌｆｉｈｐｉｉｇＡＺＰ频巧爆发，在世界范围内引起了人们的广，。目前己经确定的氮杂螺环酸及其衍生物成分多达３０余种泛关注，产氛杂爆环酸的海洋藻种主要包括具刺环胺巧’ｉｐ／ｎａｙｗｗ）、巧孔环胺藻（乂ｐｏｐｏｒｕｍ）和肥胖环胺藻（乂ｏｂｅｓｗｗ）。尽管目前我国还未见氮杂摄环酸中毒事件的报道，但相关研巧表明产毒的巧孔环胺藻在我国近海海域广泛分布。由于我国对氮杂巧环酸的研究工作起步较晚，有关环境因素对该产奉藻生长及产毒水平影响的报道甚少。因此，本论文分离自我国南海海域的两株腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２为研巧对象，考察了自然海水中巧巧营养盐变化对两株藻生长和产毒水平的影响：，实验结果表明（１）两株腹孔环胺巧（ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２）对巧巧营养盐浓度的变化都一表现出积极的巧应，，在定浓度范围内随巧巧酸盐巧巧酸盐浓度的巧加，藻株的比巧长率和最大巧细胞密度均巧大。在批次培养过程中藻株ＡＺＦＣ２２的生长周期比巧株ＡＺＤＹ０６的生长周期短。两株腹孔环胺藻对巧巧巧养盐的巧求也表一ＤＹ０６现出定的差异：相对于巧株ＡＺＦＣ２２而言，巧株ＡＺ对巧浓度巧酸盐的适应能力更强，而对巧浓度稱酸盐的适应性较差。（２）两株腹孔环胺藻在添加无机巧（硝酸钥）和有机巧（尿素）的培养基中均能正常生长，且在添加有机巧的培养基中具有相对髙的比増长率，但其生长周期明显比添加无机巧的实验组短。表明这两株巧孔环巧藻既可ｔｉｌ利用无机巧也可＾＾１利用有机巧作为巧巧进行分裂増殖，且有机巧尿素更利于甲巧的快速生长。（３）在不同巧巧营养盐浓度下，两株度孔环胺巧在巧定生长期的单位细胞产毒水平商于指数生长期。且藻株ＡＺＦＣ２２产生ＡＺＡ－２毒素的水平均高于巧株 ＡＺＤＹ０６进行快速的分裂増殖，。在指数生长期两株腹孔环胺藻主要利用营养盐其单位细胞内的毒素含量较低。在稳定生长期藻细胞基毒素合成代谢较慢，导致响，本停止了分裂增殖，硝酸盐浓度的变化未见对单位细胞毒素含量产生显著的影而巧酸盐浓度的变化明显影响单位细胞毒素含量，在碟限制条件下能刺激两株藻产毒能力升高。通过比较不同浓度的氮機营养盐条件下两株腹孔环胺藻培养基的目的的藻类培养过程中，应单位体积毒素含量发现，在Ｗ获取最大量的藻毒素为综合考虑甲藻的生长状况与产毒水平。本论文的研巧结果初步揭示了不同氮巧营养盐对两株腹孔环腹藻生长和产一，获取大童氮杂奉水平的影响规律，对于进步优化腹孔环按藻的室内培养条件。螺环酸奉素，具有重要的意义相色谱－串联质诺联用：度孔环胺藻；巧关键词：巧；巧：巧杂巧环巧 ＥｆｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｎｕｔｒｉｅｎｔｓｏｎｇｒｏｗｔｈｏｎｏｆａｎｄａｚａｓｐｉｒａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉＡｂｓｔｒａｃｔＨＡ化）ｆｒｅｕ抑ｔｃｕｒｉｎｃｏａｓｔａｌａｌｏｃｅａｒ化６ｈａｒｍ仙ａｌｌｂｌｏｏｍｓ（ｑｙＩｎｒｅｃｅｎｔｙｓ，ｇｗｅｌｏｔｓｏｆｈａｒｍｆｕｌｍａｒｉｎｅａｌａｅｓａｔｈｅｒｅｄｉｎｓｏｍｅｓｅａａｒｅａｓｗｉｌｌｎｏｔａｔｅｒｓｗｏｒｌｄｗｉｄ，ｇｇａａ化ｘｉｎｓ山ａｌａｖａｒｉｅｔｏｆｍａｒｉｎｅｌｌ，ｔｔｅｒｔｏｎｌｓｏｒｅｅ化ｅｇｅｘａｃｅｒｂａｅｓｅａｗａｅｕｔｒｏｈｉｃａｉｂｙｏｎｌｙｐ，ｗｈｌｈ．Ａｓｅｍａｎｄｈｒｅａｔｉｎｃｏｎｓｕｍｅｒｓｅａｔｌｔｕ巧州ｖｉｒｏｎｍｅｔｏｌｌｕｔｎｏｆｓｈｏｒｅａｑｕａｃｕｇ化ｐｉｇｓｃｏｖｅｒｅｄｍａｒｉｎｅａａｅｔｏｘｉｎ．ＲｅｃｅｎｔｌＡｚａｉｒａｃＡｓａｎｅｗｌｄｉｌｙｋｎｏｗｉｄｓｉｙｇ，巧（ＡＺ）ｌｗｏｒｉｅＡＺｏｕｔｂｒｅａｋｓｆｒｅｑｕ抑ｔｌｄｗｄｅａｆｏｏｄｏ，ｃｓｃｏｎｔａｍｉｓｏｎｉｎｙａｚａｓｉｎａｔｅｄｓ（ｐｉｒａｉｄｐｇ。ｋＡＺＡＵ＞ｘｉｎｎｄ化ｅｉｒｗｗｅｓｒｅａｄｃｏｎｃｅｒｎｓ．Ｎｏｗｍｏｒｅ化ａｎ３０ｉｎｄｓｏｆｓａｈｉｃｈｃａｕｓｅｓｉｄｐｅｎｔｍｍａａｅｅｃｉｅｓｒｏｄｕｃｉｎＡＺＡａｔｆｏｕｎｄｉｄｉｆｉｅｄｓｏｅａｒｉｎｅｌｓｐｇｄｅｒｉｖｉｖｅｓｈａｖｅｂｅｅｎａｎｄ，ｇｐ／１山／７１、／Ｉ．ｏｗｒｕｍｆｏｗｈｉｎｃｌｕｄｅ之化扔》ｐ／５ａｉｃｈｍａｉｎｌ的乂ｌｓｏｈａｖｅｂｅｅｎｕｎｄ，ｙ；１１ｔｅｅｎｉｎａｎｏｗｒｅｌａｔｅｄｓｔｕｄｉｅｓｆｉｎｄｈｈ化ｎｏｂｒｅｏｒｔｅｄｉｎＣｈ，ａｎｄ乂ｏｂｅｓ＂７Ｍ．ＡｌｔｈｏｕｇＡＺＰｐｔｔｅｒｓ．ＩｎｅｎｅｒａｌｅｏｌｅｔｒｔｉｄｄｉａｌｗａｏｒｗｍｄｉｎＣｈｎａｃｏａｓ，ｐｐｔｈａｔ乂ｏｉｓｉｂｕｅｓｗｅｓｐｒｅａｇｐｐａｎｄｔｈｅｒｅａｒｅｓｒｅｒｔｓａｂｏｕｔｔｈｅｅｆｅｃｔｓｄＡＺＡｓａｔｅｒｉｎＣｈｉｎａｌｅｓｏｋｎｏｗａｎｄｓｔｕｙ的ｘｉｎｌ，ｐｒｏｗｔＡ化ｘｉｎｓｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ化柄Ｉ山ｍｅｉｕｉｓ．ｔａａｃｔｏｒｓｏｎｈ地ｄＡＺｇｏｆｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｌｆｇｐａＡＺＤＹ０６ａｎｄＡＺＦＣ２２ｉｓｏｌａｔｅｄｒｅｆｒｅｔｈ优技ｔｗｏｓｔｉｎｓ乂ｏＴｏｒｕｍＴｈｅｏｉｓ化货ｉｓｓｅｌｐ／，出泌ｕｓｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｄｅＳｏｕｔｈＳｅａｆｏｒ化ｅ加ｄｓｉｎｅｇ谢泌ｆｒｏｍ出Ｃｈｉｎａｙ，ｇｏｘｉｎｒｄｕｃｔｉｏｎ．ＴｈｅｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｈｏｓｈｏｒａｓｎｕｔｒｉｅｎｔｓｏｎｔｈｅｉｒｇｒｏｗｔｈａｎｄＡＺＡｔｓｐｏｐｐｐｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔ：ａｎｄＡＺＦＣ２２ｓｈｏｗｏｓ也ｖｅｒｅｓｏｎｓｅｓｔｏｃｈａｎｇｅｓｏｆ１乂ｃｐｏ／ｗｎＡＺＤＹ０６ｐｐ（）ｐ地ｎｈｏｓｈａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｎｈｏｈａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ．Ｗｉｔｒａｔｅａｎｄｐｐｉｔｒａｔｅ抑ｄｐ巧ｕｍｅＵｄｅｎｓａｅｓｔａｉｎｂｏｔｈａｌｓｏａｓｗｔｈｒｔｅａｎｄｔｈｅｍａｘｉｍｃｉｔｏｆａｌｇｒｓｉｎｔｈｅｒｏａｙｉｎｃｒｅｇ，ｇｔｒａｔｎｅｒｏｗｔｈｃｃｌｅｏｆＡＺＦＣ公ｉｓｓｈｏｒｔｅｒｅｆ．Ｔｈａｃｅｒｔａｃｏｎｃｅｎｉｏｓｙｉｎｒａｎｏｇｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｇ．Ｔｗｏ乂ｏｗｒｕｍｓｔｒａｉｎｓａｌｓｏｓｈｏｗｓｏｍｅ＜ＪｉｆｅｒｅｎｃｅｓｆｏｒｔｈａｎＺＤＹ０６ｉｎｂａｔｃｈｃｕｌｔｕｒｅＡｐ／ｒｏｅｎａｎｄｈｏｓｐｈｏｒｏｕｓｎｕｔｒｉｅｎｔｓ：ｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈＡＺＦＣ２２，ＡＺＤＹ０６ｉｓｔｈｅｎｅｅｄｓｏｆｎｉｔｇｐｐｓａｄａｔｅｄｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｔｆｔｈｉａｔｅｄｃｏｎｃｏｉｔｒａｉ畑ｏｎｉｔｒａｔｅａｎｄ１货ｐｏｇｍｏｒｅｔｏｈｉａｄｐ班ｈｏｓｈａｔｅ．ｐｐ ２Ａ０〇／所ｃａｎｏｗｎｏｒｍａｌｌｉｎｉｎｏｒａｎｉｃｎｉｔｒｏｅｎ（ｎｉ打３化）ｍｅｄｉｕｍａｎｄ（）只雌ｇｒｙｇｇｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎ（ｕｒｅａ）ｍｅｄｉｕｍ，ｂｕｔ化ｅｙｈａｖｅｒｅｌａｔｉｖｅｈｉｇｈｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｇｒｏｗｔｈｒａｋｓｓｈｏｒｔｅｒｒｏｗｔｈｃｃ．ａｎｄｌｅｉｎｏｒａｎｉｃｎｉｔｒｏｅｎｍｅｄｉｕｍ化ａｎｉｎｏｒａｎｉｃｎｉｔｒｏｅｎｍｅｄｉｕｍｇｙｇｇｇ呂Ｉｔｓｈｏｗｓ化ａｔ比ｅｔｗｏａｌｇａｅｓｃａｎｕｔｉｌｉｚｅｂｏｔｈｉｎｏｒｇａｎｉｃａｎｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｆｂｒｗＷｉ化ｃｅｌｌｄｉｖｉｓｉｏｎａｎｄｐｒｏｌｉ传ｒａｔｉｏｎｌｅＵｉｅｏｒａｎｉｃｎｉｔｒｏｅｎｕｒｅａｓｍｏｒｅｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｅ，ｇｇｒａｐｉｄｒｏｗｔｈｏｆｄｉｎｏｆｌａｇｅｌｌａ化５．ｇ乂ＡＺＤＹ０６ａｎｄＡＺＦＣ２２ｌｈｈａ３ＡＺＡｃｅｌｌｕｏＵｉｏｆｉｎｓｔａｂｅｒｏｗｌ：ｓｅ（）ｑｇｐａｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｐｈａｓｅｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ－ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｌ．Ｉ．ＡＺＦＣ２２ｐｒｏｄｕｃｉｎｇＡ之Ａ２ｌ：ｏｘｎｌｅｖｅｉｓｈｉｇｈｅｒ化ａｎＡＺＤＹ０６ｎｅｘｏｎｅｎｔｉａｌｈａｓｅ．ｏｐｏｒｉｉｌｉｌｉｉｉｌｌｉｖｉｉｉｍｍａｎｕｔｚｅｎｕｔｒｅｎｔｓｆｏｒｒａｄｃｅｄｓｏｎａｎｄｐｐ，ＡｐｙｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｔｆｉｅｉｒｔｏｘｉｎａｎａｂｏｌｉｃｓｌｏｗｌｒｅｓｕｌｔｉｎｉｎｌｏｗｅｒＡＺＡｃｅｌｌｕｏｔａ．Ｉｎｓｔａｂｌｅｐ，ｙ，ｇｑｒｏｗｔｈｈａｓｅａｌｌ化ｉｉｔｔｒｔｏｎｓｃｈａｎｓｎｏｌａｌｃｅｓｓｒｏｌｆｅｒａｔｏｎａｎｄｎｉｒａｔｅｃｏｎｃｅｎａｉｅｈａｇｐ，ｇｐｐｇｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｅｆｆｅｃｔｏｎＡＺＡｃｅｌｌｕｏｔａｗｈｉｌｅｈｏｓｈａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｃｈａｎｅｇｑ，ｐｐｇｓｎｉｆｉｃａｎｔｌａｅｃｔｓＡＺＡｃｅｕｏｔ：ａａｎｄｓｏｒｕｓｒｅｓｔｒｉｃｔｏｎｓｃａｎｓｔｍｕｌａ化ａｎｄｉｇｙｆｌｌｑｐｈｏｐｈｉｉｔｉｉｔＢＡＺＡｔｔｔｉｍｐｒｏｖｅｔｏｘｉｎｒｏｄｕｃｏ打ｃａａｃｏｆＡｏｒｗｍ．ｃｏｍａｒｉｎｃｏｎｅｎｏｆｕｎｉｐｐｙ戶ｐｙｐｇ’ｖｏｍｏｔｗｏｓｒａ打ｓｍｅｄｉｕｍｕｎｄｅｒｅｒｅｎｔｎｔｒｏｅｎａｎｄｈｏｓｈｏｒｕｓｌｕｅｆｐｏｐｏｒｗｗｔｉ过ｉｆｉｇｐｐｎｕｔｒｉｅ打ｔｓ，ｗｅｆｉｎｄｔｈａｔｉｔｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏＣＯ打ｓｉｄｅｒｔｈｅｇｒｏｗｔｈｓｔａｔｕｓａｎｄｔｏｘｉ打ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｅｖｅｌｏｆｎｏｌａｅｌｌａｔｅｓｃｏｍｒｅｈｅｎｓｖｅｎｏｒｄｅｒｔｏｏｂｔａｎｔｈｅｍａｘｍｕｍａｍｏｕｎｔｏｆｌｄｉｆｇｐｉｌｙｉｉｉｔｏｘｉｎｓｉｎａｌｇａｅｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎｒｏｃｅｓｓ．ｐＴｈｅｓｔｕｄｙｒｅｓ山化ｏｆ化ｅ化ｅｓｉｓｒｅｖｅａｌｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ化ｅｅｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｅｎｇａｎｄｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｎｕｔｒｉｅｒＵｓｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄａｚａｓｐｉｒａｃｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ乂／）邸ｗｒｗｍＡＺＤＹ０６ａｎｄＡＺＦＣ２２，ｗｈｉｃｈｈａｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｆｏｒｔｈｅｆｕｒｔｈｅｒｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ’ｏｆ儿ｓｉｎｉｎｄｏｏｒｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｏｂｔａｉｎｉｎａｍｏｕｎｔｏｆａｚａｓｐｒａｃｉｄｓ．ｇｉＮ－ＩＣｃｗｏｒｄｓ：Ａｚ幻成＞ｎｗ／ｗ饥ｉｔｒｏｅｎＰｈｏｓｈｏｒｕｓＡｚａｓｉｒａｃｉｄｓＬＣＭＳ／ＭＳｙ；ｇ；ｐ；ｐ； 目录０前胃１２１文献综述２１．１氮杂螺环酸的分类与性质２Ｉ丄１氮杂螺环酸的分类２１丄２氮杂螺环酸的性质６１２．氮杂螺环酸的来源与分布１０１环酸的分析方法．３氮杂螺１１１０．３．生物测定法－－２（ＬＭＳ）１１１．３．液相色谱质谱联用分析法Ｃ１２１．４巧稱营养盐对藻类的生长及产毒的影响研巧１２．４．１氮踞营养盐对藻类生长的影响１１４１５．．２氮磯营养盐对藻类产毒的影响１７１．５研巧的目的、意义及路线１７１５１．．研巧的目的与意义１８１．５．２技术路线１２氮憐营养盐对腹孔环胺藻生长及产毒水平的影响９２．１实验材料与仪器１９２．２实验方法２０２０２１．２．腹孔环胺藻的培养２长曲线的测定与藻细胞收集２１．２．２生２．２．３巧杂炼环酸的提取２２－２４巧杂炼环酸的ＬＣＭＳ／ＭＳ分析巧．２．２．２．５统计分析２４２５２．３实验结果２ＤＹ０６生长的影响２５．３．１硝酸盐和巧酸盐浓度变化对胜孔却胺巧ＡＺ２２硝酸盐和巧酸盐浓度变化对腹孔环胺藻ＡＺＦＣ２２生长的影响２９．３．２３３．３．３不同类型的巧源对两株腹孔环胺藻生长的巧巧２绝分分析３５．３．４两株腹孔环胺巧的产毒 ２．３．５硝酸盐和碟酸盐浓度变化对两株腹孔环胺藻产毒的影响３６２．４讨论４１２．４．１硝酸盐和巧酸盐浓度变化对两株腹孔环胺藻生长的影响４１２．４２．不同氛源对两株腹孔环胺藻生长的影响４３２．４．３硝酸盐和磯酸盐浓度变化对两株腹化环胺藻产毒的影响４４３结论、创新及展望５１３１．结论５１３．２本文创新之处５２３３．展望５２参考文献５３致谢６３个人简历６４在学期间发表的学术论文及研究成果６４ 热煤营养紐对腹孔环胺巧（＾ｚｆｌｄ／ｎｉｕｍｐｏ／ｗｒｕｍ）生长及产运水平的８＾巧／－Ｖ０刖呂２０世纪来，人类对环境的污染和破坏日益加剧，尤其是海洋环境的污染不容忽视。工农业和城市化发展中产生的大＊工农业废水、生活污水，近海养殖业产生的养殖废水排入到海洋中，使得海水的巧憐营养盐浓度、有机污染物种类等逐年増加，不仅改变了近海的营养物质结构，更加剧了海水富营养化程度。在一定的环境条件下，海水富营养化可导致海水中某些动物、浮游植物等生物在短时间内高度聚集増殖，造成该海域生态环境的恶化，威胁人类健康和海洋生态系统，形成有害赤潮（赵冬至２０１０）。其中部分有奉赤潮藻类会产生大量，的海洋藻奉素，当海洋藻毒素经食物链发生迁移转化进入人的体内，会引发人体中奉甚至死亡（Ｓｈｕｍｗａｙ，１９９０）。近年来全球范围内有害赤潮的频巧发生，严重污染海水养殖环境，威胁水产品食用安全。根据海洋藻毒素化学结构和性质的差异，２００４年３月ＦＡＯ／ＩＯＣ／ＷＨＯ将海洋藻毒素划分为８大类（Ｔｏｙｏｆｉｉｋｕ２００６）：短裸甲藻奉素类（Ｂｒｅｖｅｔｏｘｉｎｓ）、＾（ｉｃｍｉｎｅｓ、（Ｄｏｍｏｃａｃ）田软海绵（环亚胺类Ｃｙｃｌｉ）软骨巧酸类ｉｉｄ、大酸类Ｏｋａｄａｉｃａｃｉｄ）、石房始奉素类（Ｓａｘｉｔｏｘｉｎｓ）、化夷扇贝毒素类（Ｙｅｓｓｏｔｏｘｉｎｓ）、扇贝奉素类（Ｐｅｃｔｅｎｏｔｏｘｉｎｓ）和巧杂炼环酸类（Ａｚａｓｐｉｒａｃｉｄｓ）。这些海洋巧毒素被贝类等海洋滤食性生物摄食后，能够在它们体内发生宮集，当人类食用了过Ｓ的染毒海产品后，会引发各种急性中奉症状和巧性毒性效应（陈建华，２０１３）。在这８类一海洋毒素当中，巧杂巧环酸（ＡｚａｓｉｒａｃｉｄｓＡＺＡ）是最新发现的种海洋赤潮巧ｐ，韋素。近年来巧杂巧环酸中奉事件的频繁发生使其在世界范围内引起了广泛关注（Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．，２００３；Ｈｅｓｓｅｔａｌ．，２００５）。目前研巧发现大多数巧杂巧环酸主要由环胺藻巧（先化献沁Ｗ）的甲巧及其在贝类体内的迁移转化生成，其中毒症状与腹海性贝寒（ＤＳＰ）引起的中毒症状非常相似（李爱巧，２００８）。由于人们对巧杂巧环酸的认识较晚，关于环巧因子变化对其产毒影巧的相关报道较少。因此本论文Ｗ从我国南海分离出的腹孔环胺巧（乂Ｐ巧ＷＵＷ）ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２为研巧。对象，考察不同的巧巧菅养盐条件下两株巧生长巧产巧水平的变化该研巧工作将为分析巧杂巧环酸的产生机制积巧基础数巧资料和提供理论支持，对未来国内建立有效的巧杂巧环酸预防监满机制，保障海洋食品安全和保护人体健康具有重要的科学意义和研巧价值。？１ 氮煤巧养盐对巧孔环胺藻三幻况＂也生长及产考水平的响１文献综述１．１氮杂巧环酸的分类与性质１丄１氮杂炼环酸的分类一。氮杂螺环酸是类脂溶性含氮聚蹈类化合物，易溶于甲醇、乙酸等有机试剂一４０该奉素是种无色非晶质固体，碳骨架由个碳原子纽成，分子中有９个环和２０个立体异构中必１－１３９（见表）。根据氮杂巧环酸分子结构中Ｃ位上自由基团３６２。３的不同，可将氮杂巧环酸毒素分成３４８型和型两种类型６２型的氮杂螺环一酸的Ｃ３９位上是个甲基，当Ｃ３９３４８型１９９８年Ｓａｔａｋｅ位上甲基脱掉后是。自ＡＺＡ－等首次确定１的化学结构（Ｓａｔａｋｅｅｔａｌ．１９９８），１９９９年到２００３去间，，后从－－ＡＺＡ－２ＡＺＡ－ＡＺＡ＂４ＡＺＡＡＺＡ、Ａ－７、Ａ－、Ａ－－１、３、、５、６ＺＡＺＡ８ＺＡ９、ＡＺＡ０和ＡＺＡ－１１１ｔａｍｅｓ）。也相继被发现（Ｏｆｉｉｊｉｅｔａｌ．，９９９ａ，１９９９ｂＯｆｉｉｉｅａｌ．，２００１Ｊ，２００３；ｊ；－２００８年Ｒ油ｍａｍ等研巧发ＡＺＡ１２－二装基在，ｉ现了从到ＡＺＡ３２总共２０种含有和幾基的氮杂巧环酸衍生物（Ｒｅｈｍａｎｎ２００８）。近几年Ｋｒｏｃｋ，等也分发现了包ＡＺＡ－３３Ａ￣４２共１０种氮杂巧环酸毒素（Ｋｒｏｃｋｅｔａ。括到ＡＺｌ．２０１４）在所有被，发现的巧杂巧环酸中－１、Ａ－ＡＺＡ－，最常见的是ＡＺＡＺＡ２和３，其他的氮杂巧环一一酸奉袁部分是由海洋藻类直接产生，部分是经过贝类代谢转化后的产物。１丄２巧杂巧环酸的性质巧杂摄环酸具有热稳定性，但在强酸或强巧中结构不稳定，在冷藏条件下可长期储存。其毒性远比大田软海绵酸（０Ａ）强，该毒《有时还与听夷扇贝韋素ＰＴＸ一（ＹＴＸｓ）、扇贝毒素（ｓ）和大田软海绵酸同时存在于贝类中。般情况下ＡＺＡ－－－。１、ＡＺＡ２和ＡＺＡ３的毒性比其衍生物的毒性高巧杂巧环酸引起的临床中毒症状与腹泻型贝毒（ＤＳＰ）和０Ａ相似，主要有恶也、旧吐、严重巧泻和胃麻部痊牽等。巧杂巧环巧能导致多种器官损伤，主要的巧巧官有肝、巧、麻腺和胖等（Ｓａｔａｋｅｅｔａｌ．，２００２）。有关氮杂巧环酸的致毒机理一，目前还没有个明确的说法。研究发现巧杂巧环酸与ＯＡ不同，不能抑制蛋白巧酸巧活性，，ｅｔａｌ．不会产生神经毒性但具有显著的组织和细胞毒性（Ｔａｌｅｂ，２００６谭志军等２０１３）。；，２ 氣路营养接巧腹孔坏胺巧（＾ｚｆｌ成ＷＷＷ鮮ｐｏｎ＜ｍ）生Ｋ：及产毒水平的形响－表１１ｏｃｋｅｔａ氮杂躁环酸的化学结构（引自Ｋｒｌ．２０１２），Ｔａ－ｂｌｅ１１ＣｈｅｍｉｃａｌｓｒｕｃｕｒｅｓｏｆＡｚａｓｉｒａｃｉｓｔｔｐｄＴｏｘｉｎＲｉＲ２ＲｊＲ４Ｒｓ－ＨＣ比ＨＨＣＨ３ＡＺＡ１ＡＺＡ－２ＣＨ３ＣＨ３ＨＨＣＨｊＡＺＡ－３ＨＨＨＨＣＨ３－４ＨＨＯＨＨＣＨ’ＡＺＡ＿ＡＺＡ－５ＨＨＨＯＨＣＨｊＡＺＡ－６ＣＨ３ＨＨＨ州３ＡＺＡ－７ＨＣ印ＯＨＨＣＨ３ＡＺＡ－８ＨＣＨ３ＨＯＨＣＨｊＡＺＡ－９Ｃ比ＯＨＨ畑Ｈ，ＨＯＨＣＨＡＺＡ－…ＣＨ３ｊＨＡＺＡ－１１Ｃ出ＣＨｊＯＨＨ畑，３ 巧？营养泣对ａｔ孔环腺藻讯ｍ心ｗ；＞ｏｐｏｒｕｍ）生杉及产毒水平的彩响－表１１（续）ＴｏｘｉｎＲｉ民２Ｒ３Ｒ４民５－Ｈ３ＨＡＺＡ１２ＣＣ３ＨＯＨＣＨ３ＡＺＡ－ＨＯＨＨＯＨ州１３３ＡＺＡ－１４ＨＣＨｉＯＨＯＨＣＨ！－ＡＺＡ１５ＣＨ３ＯＨＨＯＨＣＨ３ＡＺＡ－１６ＣＨＣＨ３ＨＨＣＨ３！ＡＺＡ－１７ＨＣＯＯＨＨＨＣＨ３ＡＺＡ－１８ＨＣＨ３ＣＯＯＨＨＣ出ＡＺＡ－１９ＣＨ３ＣＯＯＨＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２０ＣＨＣＨ３３ＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２１ＨＨＯＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２２ＨＣＨ３ＯＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２３ＣＨＨＯＨＨ畑３３ＡＺＡ－２４ＣＨＣＨ３３ＯＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２５ＨＨＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２６ＨＣ战ＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２７Ｃ也ＨＨＨＣＨ３ＡＺＡ－２８ＣＨＣＨＨＨＣＨ３３３ＡＺＡ－２９ＨＨＣＯＯＣＨ３Ｈ佩－ＣＯＯＣＨＡＺＡ３０ＨＣＨａ３Ｈ畑，４ 氮巧营养往巧８１孔坤胺藻讯ｍｗｍｐｏ兴ｒ＾ｍ）生及产毒水平的於巧－表１１（续）ＴｏｘｉｎＲ民ｉ２Ｒ？Ｒ４Ｒ￥ＡＺＡ－３１ＣＨ３ＨＣＯＯＣＨ３ＨＣＨ３ＡＺＡ－３２ＣＨ３ＣＨ３ＣＯＯＣＨ３ＨＣＨ３ＡＺＡ－ｎＣＨＨＨＣＨ３３ｄ３！ＡＺＡ－３４ＨＣＨＨＣＨ３３ｎｄＡＺＡ－Ｈ３ＣＨ３５ＣｊｎｄＨＣＨ３ＡＺＡ－ＨＣＨ３６Ｃ３３ＯＨＨＨＡＺＡ－３７ＨＣＨ３ＯＨＨＨＡＺＡ－３８ｎｄｎｄｎｄｎｄＨＡＺＡ－３９ｎｄｎｄｎｄｎｄＨＡＺＡ－４０ｎｄｎｄｎｄｎｄＨ－ｎｄｎｄ畑ＡＺＡ４１ｎｄｎｄ３ＡＺＡ－４２ｎｄｎｄｎｄｎｄＣＨ３注：ｎｄ表示未知的基困ＦＡＯＷＨＯ／ＡＺＡ－／ＩＯＣ．／ｋ由初步巧定的ｌ的急性致毒的多考剂＊为００４ｐｇｇ贝组织，远低于其他贝类毒素（Ｔｏｙｏｆｉｉｋｕ＾２００６）．巧着对氮杂《环酸的巧入研巧，巧杂？环巧巧素对食品安全的危害也逐渐引起人们的重视，其中欧巧巧过立－－ＡＺＡ－ＡＺＡ巧Ｓ持准的目标成分法把ＫＡＺＡ２和３列为现有，規定了贝巧中巧条《环巧的控Ｍ标准（／ｋ），１６〇Ｈｇｇ 巧巧营巧益对设？Ｌ环胺巧成生长及产毒水平的於巧１．２巧杂螺环酸的来源与分布’似１９９５年１１月，荷兰至少有８人在食用产自爱尔兰的紫贻贝（４兮／＜７？＾＾＾／？）后中毒，临床症状与ＤＳＰ中奉很相似。鉴于该有毒紫略贝的捕巧海域未见产ＤＳＰ毒素的藻类存在一，因此怀疑是种新的毒素成分，首次发现了巧杂螺环巧。直到１９９８年，人们才从贝类中分离获得这种新的奉素，经过化学分析鉴别命名为一Ａｚａｓｉｒａｃｉｄｓ（Ｓａｔａｋｅｅｔａｌ．１９９８Ｏｆｉｉｉｅｔａｌ．１９９９ａ），直簡写成ＡＺＡ。在ｐ，；ｊ，后来＇（）、欧洲牡邮化／ｒｅａｅ况ｆ似）、欧洲大扇贝（尸ｅｃ化ｎｍｏｘｉ／ｍｔｓ长牡蜗＇ｇ咳ａｊ）、菲律宾始仔（记ｐｅｓｆＡＷ卸ｎａｎｗｍ）和紫贻贝等双壳贝类体内ＩＰ能发现，其中紫贻贝因具有累积高浓度氮杂操环酸的能力巧杂巧环度？，己成为分巧获得巧杂巧环酸的重要来源（Ｆｕｒｅｅｔａｌ．２００３ｋｏｌｏｄｋｏｖ２００５）。ｙ，；０，几年后２００２Ｔ．２００６，在撕或巧英国（Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．）、ａｌｅｂｅｔａｌ），摩洛哥（，巧Ｖａｌｅｅｔａ．２００８）巧萄牙（ｌ也相继发生了食用被巧杂巧环巧污染的海产品中毒事，件（ＡｚａｓｉｒａｃｉｄｓｈｅｌｌｆｉｓｈｏｉｓｏｎｉｎＡＺＰ）（见＾１）ｇ，表明巧杂巧环酸毒素在ｐｐ，图，。紧接着在日本（Ｕｅｏｋａｅｔａｌ．２００９、沿大西洋西欧海岸及北非地区都有分布，）．．加拿大（Ｗｉｎｅｒｅｔａｌ２０１０）和ｌｖａｒｃｚｅｔａｌ．２０１０），智利（Ａ也发现了氮杂巧环巧奉素。考’气／Ｙ困＾１全球ＡＺＰ事件的发生巧巧（更新至２０１２年７月３１日）ＦｉＯｃｃｕ＇－ｈｌｄＬｌ３１２０２ｇ．１１ｒｒｅｎｃｅｏｆＡＺＰａｌｌａｒｏｕｎｄｔｅｗｏｒａ引ｕｐｄａ化ｄ：Ｊｕｙ．１）＇，＝＝＝＝（Ｆｒｏｍｈｔｔｐ：Ｚｗｗ＼ｖ．＼ｖｈｏｉ．ｅｄｕｒｅｄｔｉｄｅＺｐａｇｅ．ｄｏｐｉｃｌＩ４ＪＳ９９Ａｉｉｄ５４２＆ｃｉｄ４７５８６＆ｃ３）６ 巧巧营养益巧巧化蛛枝巧＇（＾２０成ｗｗｎｏｗｒｗｍ）生长及产毒水平的於巧ｐ／由于ＰＴＸｓ、ＹＴＸｓ和ＤＳＰ等聚巧类毒素都可Ｗ由笛巧产生，因此人们最初一推断氮杂螺环酸也能由巧藻产生（Ｏｆｔｉｊｉｅｔａｌ．，１９９％）。不过目前在巧藻中直００＇＇未发现氮杂螺环厳。２３年Ｊａｍｅｓ等在甲藻（／ＶｏＷＫｎ从ｗＷＭｃｒｏｓ．咕ｅｙ）中检巧一出氮杂螺环酸。由于ｆｃｎｍ咕是种能够在体内累积藻奉素的异养型海洋巧类，因此还不能够确定氮杂燥环酸是否由该甲藻直接产生（Ｊａｍｅｓｅｌ．２００３ｔａ）。，２００７ｃｋ一年Ｋｒｏ等（Ｋｒｏｃｋｅｔａｌ．，２００９）从苏格兰东北部沿海分离出株编号为３Ｄ９－－的小型甲藻，经检测在该甲藻体内发现了ＡＺＡ１和ＡＺＡ２，在严格的独立培养－－３Ｄ９－－实验中发现能产生ＡＺＡ１巧ＡＺＡ２。由于ＡＺＡ１和ＡＺＡ２是人们最早在贝类体内发现和检测出的氛杂螺环酸奉素，这种小型甲藻也被他们认为是导致苏八２？－－格兰地医事件的直接原因１２１６ｉｍ，７Ｈｍ，。该甲藻细施长约宽约最ｆｕ‘＇＇终被命名为具刺环胺藻（／１：．．：化／！＂！訓？？扣＂、＜／（Ｔｉｌｌｍａｎｎｅｔａｌ．２００９）。／！？），Ｗ．ＭＡｚａｄｉｎｉｕｍｓｐｐ．＾？Ａｚａｓｐｉｒａｃｉｄｓｉｎｍｕｓｓｅｔｓ／ｐｌａｎｋｔｏｎ）图－（ｒｏｃｔａ．１１２氮杂操环酸及环胺藻属藻种的全球分布情况引自Ｋｋｅｌ２０２，－ＤｉｉａａｒｏｕｎｄｅｗｏｒＦｉｇ．１２ｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＡｚａｓｐｒａｃｄｓｍＡＡｚａｄｉｍｕｍｌｌｔｈｌｄ相关的研巧报道称具刺环胺藻多出现在北海（Ｔｅｔａｌ．２００９２０１０ｉｌｌｍａｎｎ，，，２０１１）、地中海（Ｐｅｒｃｏｐｏｅｔａｌ．，２０１３）、大西洋东部的法国巧爱尔兰沿巧（Ｎ紅ａｎｅｔａ．２１１、ｉｎｅｔａｌ．２０１２）、（ｌ．２０１２Ｓａｌａｓｅｔａｌ０）韩国沿海（Ｐｏｔｖ，中国沿海Ｇｕｅｔ，；，ａ１（ｓｅｌｍａｎｅｔａｌ．２０１２），ｌ．２０３）Ａｋ等？相比而言巧杂？环酸在，认及阳根廷沿巧，巧界范围的分布却更化广泛、北非、南美洲、亚洲和美国等地区都有发，在北欧－（Ｊａｍｅｓ巧ａｌ．２００２Ｋｏｎｔｚｅｔａ．２００９ＬｏｅｚＲｉｖｅｒａｅｔ；ｌｌ；现巧杂巧环酸的研巧报道，，ｐ８姚建华等－ａｌａｄａｌｅｎａｅｔａｌ．２００３；Ｖａｌｅｅｔａｌ，２００２００）（见图１），２０１０；，１２．．；Ｍ，，ｇ： 巧营巧接則■鴨孔齡誤化Ｚ／ｗｔ／ｍ戶／ＷＷＷ）生长及产奉水平的於响从具刺环胺藻和氮杂螺环酸分布的差异性推测，除具刺环胺藻外可能存在其它能产生该奉素的环胺藻。经过多年的研巧，２０１２年Ｋｒｏｃｋ等最终从腹孔环胺？‘＊？加藻藻（乂戶〇／；〇／／？）和／１／ｗｐＡ／加ｗａ／ｃｔＭ巧《细胞内分离出了氮杂螺环酸（Ｋｒｏｃｋｅｔａｌ．２０１２）。，Ｔ山ｍａｎｎ，，同时等也相继发现了两种新的环胺藻肥胖环胺藻（ＡｏＡｅｓｗｍ）和长孔环胺藻（．／，４ｏｏｎｇＭｗ），但不确定它们是否产氮杂螺环酸（Ｔｉｌｌｍａｎｎｐｅｔａ．１０）。ｌ２０２０１１在所有新发现的环枝藻中，巧化环胺藻的发现引起了人们的，，广泛关注。腹孔环胺藻不仅分布在欧洲沿海地区，也广泛分布在亚洲部分海域。在亚洲发现的巧孔环胺藻既包持从朝鲜近海分离出的ＷＷｃｆ．ｏｐｏｒｕ／Ｈｐ（Ｐｏｔｖｉｎｅｔａ．１ｌ２０２），也包括从我国近海分离出的藻株（Ｇｕｅｔａ．２０３）。，ｌ１，据报－道，在我国近海海域广泛分布有腹孔环胺藻（见图１３）。化ＩｌｏｗＳｅａ／ＢｏｈａｉＳｅａＸＵａ？ｏｏｏＩ毎／？〇◎曾＠ＱｔＥＲ鱗如參？ＡＺＡ－３６＝ｕｄ－１ｔｈｉｓＳｔｙＡＺＡ４０＝２Ｇｕｅｔａｌ２０１３Ａ２Ａ－４Ｐ１＊＊＊ｔ０５ＥＩＫＴＥ１１５Ｅ１２（ＴＥ１２５Ｅ图－３１我国近海攻孔环胺巧的地理分布巧其奉素组成（引自Ｋｒｏｃｋｅｔａｌ．２０１４），－ｎｄＦ．１ＧｅｏｒａｒｉｔｉｏｎＺＡｆｉｉｇ３ｇｈｉｃ出ｓｔｂｕａＡｒｏｌｅｓｏｆｐｏＫ＞ｒＭ／ｗｉｎＣｈｉｎｅｓｅｃｏａｓｔａｌｗａｔｅｒｓｐｐ／８ 叙賊替养祕对议化坏胺巧Ｍｍ抓Ｈ山ｍｐｏ／ｗｒｗ／？）生氏及产巧水平的於响腹孔环胺藻不仅能产生氮杂螺环酸，而且不同海域分布的巧孔环胺巧藻株产生的毒素组分具有很大的变异性和多样性。硏究发现，腹孔环胺藻藻株ＡＺＦＣ２２－－产ＡＺＡ２藻株ＡＺＤＹ０６ＡＺＡＡＺＡ－ＡＺＤＩＩ４３、ＡＺＤＨ５５；产２和３６；藻株巧－ＡＺＤＨ４１产ＡＺＡ－ＡＺＡ＂１１；藻株ＡＺＢＨ０１和ＡＺＢＨ０３产４０，鉴别发现ＡＺＡ４０－１ｋｅ－－ＡＺＡ的同分异构体（Ｋｒｏｃｔａｌ．２０ＡＺＡ是１４）。１１３６，在我国近海ＡＺＡ和是分布最广的两种氮杂螺环酸毒素，在潮海、黄海北部、东海和南海都有分布。不￣－过ＡＺＡ２和ＡＺＡ４０ＡＺＡ－２和ＡＺＡ－两种毒素只分布在东海和南海。其中１１是＊３６２型－Ｗ和ＡＺＡ的氯杂螺环酸奉素，ＡＺＡ４０是３４８型的氮杂螺环酸毒素。目前己经确定产氮杂操环酸的环胺藻搞的藻类主要宵具刺环胺藻、腹孔环胺藻和肥胖环胺藻，。腹孔环胺藻细胞形态和大小与具刺环胺藻很相近细胞长度约—－＇１１１６８－１２ｉｍ。其巧１环胺藻和腹化环胺宽度约＾在光学显微镜和妇描电窺１］￣４－藻的细胞分别如團１，１５所示。图光学盈傲镜和扫描巧境下的具刺环胺藻细胞（引自Ｓａｌａｓｅｔａｌ．２０１１），＇＂４内〇ｙｗｗｃｅＮｕｎｄｅｒｏｉｌｉｎｎｉｎｅｌｅｃｏｎｍｉｃｒｏｓｃｏＦｉｇ．１ｙ４．ｓｐｉｐｔｃａｍｃｒｏｓｃｏｐｅａｎｄｓｃａ呂ｔｒｐｅＰｉｌｌｆｉＷｔＰ１ ＇氮躲营巧祕巧巧化坤胺誤ＭｚｉＳｆｄｙｗｗｎｐｏｗｒＭＷ）生长及产辜水平的於响／國隱■爆函－５（引自Ｇｕｅｔａｌ．２０１３ｊ酉，１扫描电镜和化学显微镜下的腹化环胺藻细胞－ｓｉｌｔｒｏｎｍｃｒｏｓｃｏｅＦｉｇ．１５Ａ．ｏｏｒｕｍｃｅｌｌｕｎｄｅｒｏｔｉｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｅａｎｄｃａｎｎｎｅｅｃｉｐｐｐｐｐｇ１．３氯杂螺环酸的分析方法目前－，关于氛杂炼环酸的分析方法主要集中于生物渊定法和液相色谱质谱联用分析法－ＭＳ）。（ＬＣ１．３．１生物測定法生物測定法主要包括小鼠生物测定法和小鼠口版测试法。小鼠生物测定法的一原理是通过定物理化学方法提取有毒藻类或染毒贝类样品中的奉素，将毒素提取液注射到小白鼠腹腔里，记录其存活时间Ｗ计算样品的毒素含量。这种基于动物对毒素的生物反应来分析测定毒素总毒性的方法不需要复杂的分析仪器设备，操作性强，是目前较常用的贝毒分析方法，被广泛用于ＯＡ、ＤＴＸｓ等脂溶性毒素的分析检测，人们借鉴性的采取该方法用于。鉴于氮杂螺环酸也是脂溶性毒素氮杂螺环酸的检测分析。通过大批量的培养氛杂螺环酸的产毒藻类或者取贝类消，化腺，用甲時等有机溶剂提取该毒素，统计小鼠死亡时间进行定量不过用这种１０ 巧碟营养益对晚孔环巧获讯ｍｉ／ｍｐｏｐｏｗｗ）生及产巧水平的影巧定量方法获得的分析结果会产生假阴性（Ｊａｍｅｓｅｔａｌ．２００２）。该方法的不足之处，还在于不能够测定样品中氛杂螺环酸的种类和含量；提取液的含盐量和ｐＨ值对测定结果影响较大；受不同研巧机构和实验室采用的试验小鼠的生理特征的差异性影响；，测试结果重现性和可比较性较差在许多国家大量使用小鼠进行生物实验，违背动物保护公约的相关法律规定。小鼠口服测试法是将食物与贝类样品混合后投喂预先饥饿的小鼠，观察其在一Ｖ（ａｎｅｔａｌ．定时间内的排泄情况，结合食物残留虽和小鼠粪便进行半定里分析，１９９３）。在１９９５年荷兰发生的ＡＺＰ事件中，人们利用该方法检测被氛杂螺环酸污染的贝类样品获得了良好的阳性结果一直。目前使用该方法得到的测试结果也－ＡＺＡ－－被荷兰和欧盟的官方控制立法程序所认可。如果样品中１、ＡＺＡ２和ＡＺＡ３总童超过了６０ｌ／ｋ，则可判定其为阳性样品。１＾ｇｇ－－ＭＳ）１．３．２液相色谱质谱联用分析法（ＬＣ一液相色谱分析技术是用液体作为流动相进行色谱分析的种色谱分析技术，该技术方法的特点是不能由色谱国直接给出未知物的定性结果，必须依靠标准物质作为对照来判断未知物。而质谱分析技术的特点是灵敏度窝、分辨率好，具有较强定性能力。将质谱技术与液相色谱分析联，不过对处理样品的纯度要求很高一－－（Ｌ合在起建立的液质联用技术ＣＭＳ）不仅能对样品进行高效分离纯化，还、解决了色谱分析定性能力弱的问题，特别适合挥发性低亲水性强的有机物Ｗ及热不稳定化合物的分析处理。目前该技术己在有机化学、食品分析、医药研巧、环境分析、海洋生物奉索分析等方面发挥着巨大作用。随着对巧杂巧环酸分析的立了利用液相色谱－质谱联用技术分析检测该毒素的技术研巧深入，人们逐步建方法（Ｌｅｈａｎｅ巧ａｌ．，２００２；Ｍｏｒｏｎｅｙｅｔａｌ．，２００２；Ｌｅｈａｎｅｅｔａｌ．，２００４；ＯｆＵｊｉｅｔａｌ．，１９９９ａ）。、撕威、德国和新西兰的很多实验室被广泛使用？目前该技术方法在爱尔兰－为了遥免在质诸分析时色巧共流物对分子巧子的干扰，可采用液相色诺串联质诺联用技术（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）对巧杂巧环敌进行分析。串联质谱（ＭＳ／ＭＳ）的一工作原理是在第级质巧选择目标化合物巧子，然后在碰挂室内打碎处理后进行－第二级质谱妇描分析。ＬＣＭＳ／ＭＳ的巧据采窠方式有全扫面、子离子扫描和多反应巧子监測Ｈ种；子巧子？全扫面采窠的数据可用于未知化合物的鉴别及确定，记录产物离子扫描可Ｗ筛选将定目标离子，排除千扰巧子；多反应监測用于检＊１１ 热巧营养益对巧化环胺巧扣ｎｍｍｐｏｐｏｒＭＷ）生长及产毎水平的杉响－ＭＳＭＳ测己知的目标化合物。ＬＣ／方法被用来分析氮杂螺环酸不仅因为该方法灵，敏度和选择性高，检出限低，特别适合对低浓度毒素样品的定性分析更重要的是该方法可Ｗ用标准毒素定里分析氮杂螺环酸衍生物，有助于阐明新的毒素及其衍生物的化学结构（马景刚２０１２）。，ＬＣ－ＭＳ总之技术可Ｗ快速，，应用、准确地分析贝类体内累积的氮杂螺环酸但由于该技术对样品预处理要求高、分析仪器及费用昂贵，对分析人员的专业素质要求高ＬＣ－ＭＳ。，限制了技术在氮杂螺环酸毒素分析领域的广泛应用１．４巧碟营养盐对藻类的生长及产毒的影响研究海洋藻类是海洋中不可或缺的生物物种，通过光合作用维持海洋中的碳氧平。衡，并为大多数的海洋动物提供了丰富的食物来源然而藻类的过度巧殖会引起赤潮的爆发，危害海详生态环境。有毒赤潮藻类的生长及产韋受到多种环境因子（包括光照、盐度、温度和营养水平等）的影响。在各种环境因子中作为藻类生长的物质基础，氮碟营养盐的变化将会显著影响有奉海藻的生长及产毒倩况，从而间接影响有害赤潮的发生。１．４．１巧碟营养盐对藻类生长的影响海水中的氣营养盐包括有机氛化合物）（尿素、氨基酸等和无机氮化合物（硝酸盐、按盐等），機营养盐包括无机碟化合物（ＮａＨＰ〇４、Ｎ姐２Ｐ〇４等）和有机碟化合物（甘油稱酸钢、ＡＴＰ等）。氯磯昔养盐在藻类生长中起到重要作用，氮碟昔养盐的浓度变化和巧巧营养盐形式的不同都将会在一定程度上影响藻类的生长。－般情况下，，巧营养盐浓度变化对不同藻类生长速率的巧响会有所不同随着添加的巧营养盐浓度的増加，巧类的比増长率会巧大，生长速率会有所増加，一定程度上抑制藻类的快速生长但是过高的氮营养盐浓度将会在。对分离自中国南海的塔玛亚历山大巧加ＷＷ化／ｗａｒｅｎｓｅＣ１０１的培养研巧发现，当硝酸盐浓度低于８８０＾ｌＭ时，硝酸盐浓度越高，巧细胞生长越快，藻密度越髙（Ｗａｎｇｅｔａｌ，．２００２）。采用硝酸盐为巧源对塔玛亚历山大藻批次培养时当培养液中氮浓，度小于１７６５ｉＭ时，塔玛亚历山大巧的生长速率随巧浓度增加而巧加，在１００ｊ－ｉＨＭ下获得巧大生长速率（化５１ｄａｙ），当氮浓度过巧时其生长速率有所巧低，（江天久等，２００６；Ｌｅｏｎｇ幻ａｌ．，２００４ｂ）。对于在巧源选择上优先利用锭氮的甲藻２１ 想谈苦养盐对巧孔环巧巧Ｕｚ化扣Ｉ山ｍｐｏｐｏｒｕｍ）生长及产巧水平的Ｋ咱一来说，高浓度按氮也会抑制甲藻的生长。不管是用单的钱氮培养微小亚历山大藻，还是在用谷氨酸、甘氨酸和按氮的混合培养液培养海洋原甲’藻（／ＶｏｒａｃｅＷｒｕｍｍｉＣｆｌ／ｗ），当培养液浓度高于５０ｉＭ１时细胞的生长都将受到｜抑制（Ｃｈａｎｇｅｔａｌ．，１９９７ａ；王正方等，１９９６）。５５０＾Ｍ的按氮甚至使海洋角管藻Ｃ’（ｅｒａＭｕ／ｚｎａｐｅ／ｆｌ灿：ａ）、中肋骨条藻（筑ｅ／ｅ化ｎｅｗ口ｏｗＭ化ｍ）停止生长（ＹａｎｅｔａＬ２００２）。，ｎ〇３－ｎ、ｎ〇－ｎ等）有的藻类當向于利用环境中的硝态和亚硝态巧（２，有的一ＮＨ－Ｎ等）藻类趋向于利用环境中的氨态氮（４，研巧发现巧多甲藻般选择利用还原压力小的还原态氮，在某些海域钱盐等还原态氮浓度较高时容易巧发赤潮，也间接的反应了藻类对氮源的选择（Ｄｏｒｔｅｈｅｔａｌ．，１９９０；Ｇｌｉｂｅｒｔｅｔａｌ．，２００】；Ｌｅｖａｓｓｅｕｒｅｔａｌ．，１９９３；Ｌｏｍａｓｅｔａｌ．，２００１）〇不仅氮营养盐浓度对藻类生长影响很大，不同形式的氮源也会影响藻类的生）长。藻类不仅能利用海水中的溶解态无机氮（硝酸盐、钱盐等，也会选择性的（氨基酸）。利用部分溶解态的有机氮、巧素等海水中有机氮源既包括人类生产生活输入到海洋中的有机肥料等。，也包括海洋生物自身的代谢产物在海洋中尿可Ｗ在藻体内积累，依巧尿素巧的素是比较常见的氮源，当被藻类吸收后，通常作用把尿素分解生成Ｎ叫和Ｃ〇２。Ｕｃｈｉｄａ研巧，ＮＨ；作为还原态巧源随后被吸收发现海详原甲藻在巧源不足的情况下可Ｗ利用培养基中的尿素，通过检测发现培（Ｕｃｈｉｄａ１９７６）。除了尿素，洛解态的务基酸（Ｆａｎｅｔａｌ．２００３养液中有Ｎ叫生成，；，Ｓｔｏｅｃｋｅｒｔ２００３）、気基葡萄糖（Ｂｅｒｍａｎ１９９７）、鸟嚷吟（Ｂｅｒｍａｎｅｔａｌ１９９９）、ｅａＬ，，，腐殖质（Ｃａｒｌｓｓｏｎｅｔ化１９９３；Ｄｏｂｌｉｎｅｔａｌ．，２０００）和动物排泄物（Ａｒｚｕｌｅｔａｌ．，２００１），等都能够被海洋巧类吸收而促进其生长。其中海水中的溶解态氮基酸是最常被巧类吸收利用的有机氮源。至一些微小，甚在某些营养盐条件下，海洋巧类对氨基酸的吸收速率会加快原甲藻对氨基酸的吸收速率和锭盐的吸收速率相似（Ｊｏｈｎ，１９９９；Ｆａｎｅｔａｌ．，２００３）。。通常海水中洛解态的氨基敌主要分为巧胺类．氮基巧和酸性氨基酸两大类巧胺类、务基酸有天冬巧胺和谷氮巧胺等，酸性巧基酸有天冬纪酸谷氨酸和丙氮酸等ａｖｅｎ。，然后才（Ｂｒ１９８４）研巧发现甲藻和部分微藻会优先利用巧胺类务基酸，是酸性氮基酸，这也是谷氮巧胺和天冬敌胺比天冬氨酸和谷氮酸更快更容易被吸１３ 巧■巧营养紐对化孔环胺藻（Ｘｉｆｌ况生长及产巧水平的影响收的原因（Ｆｌｙｎｎ，１９９０）。另外，在用多种氨基酸组成的混合培养基培养芬迪湾’亚历山大藻（ｖ４／ｅｒａ／ｕ／，７ｗｗ／ｗｕｖｅｎｓｅ）时发现其在生长初期对氨基酸的吸收速率（，很慢，到了指数生长期对氮基酸的吸收速率逐渐加快稳定生长阶段则停止对氨９９９），由此可见在不同基酸的吸收（Ｊｏｈｎｅｔａｌ．１的生长阶段藻类对氨基酸的吸，收也会有一定的差异。除了溶解态的氨基酸外．腐殖质和动物排泄物也是某些藻类的重要有机氮源。用腐殖质和动物排泄物分别培养链状亚历山大藻（乂ｃａ化ｎｅ化Ｊ），发现腐殖质可促进链状亚历山大藻生长，动物排泄物对链状亚历山大藻的生长没有促进—作用／／ｅ化ｎａｃｉｆａｚｓＷｖｖｏ），些贻贝的排泄物却能刺激其；对于赤潮异弯藻（皆＂２０００ａｌ２００１ｉｌｓｓｏｎ１９９３ＤｏｂｌｉｎＡｒｚｕｅｔａｌ．）。生长（Ｃ，，；，；不仅海水中的氮营养盐为藻细胞生长及蛋白质合成提供了重要物质基础，海水中的碟营养盐也在海洋藻类生长中发挥着不可替代的作用。除了人们向海洋中大量排放的巧酸盐外，海水中的溶解态含巧化合物多为海洋生物代谢分泌的有机巧，相比来说，海水中的各种氮源（有机氮、无机氯、巧气等）的来源和含量更加丰宮，海洋中大部分海域的稱营养盐的含童远远低于巧营养盐的含呈，所巧一营养盐的含里会被作为部分海域富营养化的标志（钟娜２００７）。巧菅养盐般，颗粒态（有机巧等）和溶解态（无化機等）的形式存在于海水中。巧类主要利，用海水中的无机巧进行生长代谢活动，当无机巧不足时也会选择性的吸收部分有机巧（陈慈美Ｏｈｅｔａｌ．２００２）。，１９９０；，，相关研巧发现，虽然不同的巧类对巧营养盐的需求不同但是只有在适合其生长的浓度范围内藻类才能正常生长，过髙或过低的巧营养盐浓度都会抑制藻类的生长：，因此可将适合海洋巧类的生长的巧适路营养盐浓度划分为Ｈ个浓度范围巧营养盐浓度低于或者巧于化６５片Ｍ时，巧能正常生长；巧营养盐浓度低于化６５ｊｉＭ时才正常生长，巧于０．６５ｎＭ则巧制其生长，比如部分裸甲藻（巧ｗｒｎｏＪｉｎ山ｍ）等；巧菅养盐浓度巧于化６５ｆｉＭ时才能正常生长，如海洋原甲藻巧塔玛亚历山大藻等（王葫巧等，２００１王正方等，１９９６；张宜巧等１９９９）。；，虽巧海水中巧营养浓度的变化对巧类生长影巧很大，但是海水不同形式的巧一巧对藻类生长都有定的促进作用。相比有机巧，无化巧是藻类生长比较容易获一得一种巧巧些，它的存在可满足大部分海洋藻类对巧巧养盐的需求，不过在４１ 巧煤巧养站对议孔环胺巧扣ｍｗｍ／ｗｐｏｒｕｍ）生及产巧水平的巧响，情况下，特别是当海水中无机稱限制藻类生长时，有机憐的作用就比较明显藻类体内的憐酸酶能将有机機化合物水解成为溶解态无机稱，使藻细胞能够吸收利用（张清春２００４）。Ｏｈ等用多种有机機化合物和无机憐化合物单独培养塔玛亚，历山大藻时也发现部分有机憐化合物对塔玛亚历山大藻生长的促进效果与无机（ｔａ２００２），憐化合物相同Ｏｈｅｌ．，。当无机稱化合物不足维持藻类生长的时候（Ｏｈｅｔａｌ．２００２）。许多有奉赤潮藻类都能够选择性利用有机機化合物，其中利玛Ｃｈｈｌｌ）原巧藻（Ｐ．、三角褐指藻（Ｐｈｏｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ（ｒｉｃｏｎｗ化ｍ）、小巧藻（ｒｅａｅｔａｌ９９５Ｔｏｍａｓｅｔａ１可Ｗ利用甘油碟酸钢作为機营养源（Ｈｏｎ．Ｊｌ．９９３；王海黎ｇ；，等１９９５）；栋鞭藻（ＯｃＡｎｗｉｏｗｏｓ）和栋曼藻（／Ｖｉａｅｏ巧Ｓ化）可利用稱酸葡萄，ＭＰＡＤＰ为巧源（Ｃｏｔｎｅｒｅｔａｌ．１９９２ＶａｎＢｏｅｋｄｅｔａｌ．１９９１）。糖、Ａ和等作，；，１．４．２氮稱营养盐对藻类产奉的影响氮巧营养盐的变化不仅影响藻类的生长，还将影响藻细胞的毒素含童，间接一一。，但影响藻类的产毒水平在不同的环境条件下，同株藻的巧素组成般不变一中巧养盐细胞毒素含量却经常变化。般来讲，藻类细胞的产奉水平不仅与海水浓度变化有关，还与海水中营养盐的形式有关。在畜昔养化的海域，海水中氣碟菅养盤充足，在这种条件下藻的生长和产巧６４＞８８０能力都将会提奋。研巧表明当硝酸盐浓度在２ｉＭ之间变化时塔玛亚历山ｆ大藻的产毒水平巧着硝酸盐浓度的增加而堪加，在最大浓度时获得最大毒巧含＊（Ｗａｎ２００＾。铜绿微囊巧（Ｍｃｒｏｓａｅｒｕ挪０５。）细胞中微囊巧毒巧的含量ｇ，巧如１ｍ／巧的产毒有在较巧浓度为．８３ｇＬ时达到巧大，但按巧浓度过大则对铜绿巧囊抑制作用（张巧等２００６）。，当海水中巧菅养盐的浓度较巧，巧昔养盐浓度成为限制巧类生长及产巧的主要因子，将会出现巧限制现象；当海水中巧营养盐浓度较巧，巧营养法浓度成为制现象一？巧研巧认为巧菅养盐限制藻类生长及产毒的主要因子，将会出现巧限充足条件下藻细化毒亲含量巧于巧营养盐限树时毒巧含量（Ｆｒａｎｇ邸ｕｌｏｓ，２００４），（Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．１９９０在批次培养实验中发现，巧素合成会巧少，；，在巧限制条件下Ｆｌｎｎ９４Ｌｉｉｅｒｅｔａｌ．２００３）？可能因为在巧限制巧况下，巧细化会ｅｔ沁１９；ｅｍｅ，ｙ，ｐｐ优先利用巧巧用于细化的増殖分裂，用于毒巧合成的较少，毒巧合成代谢相对缓１５ 氣巧营养盐巧腹孔环胺誤讯ｗｔｍｉ／ｗ／ｗｒｗＭ）生长及产毒水平的影晌慢，从而使得毒素合成量减少（李天深，２００７）。氮限制时芬迪湾亚历山大藻单位体积的毒素含量就远低于氮充足时单位体积毒素含量（Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，１９９０）。由于藻毒素分子结构的不同，藻类对氮源利用方式的不同，不同形式的氮营养盐对藻类产毒也会有不同程度的影响。用硝酸盐、按盐等无机氮源对利玛原甲藻和亚历山大藻批次培养时发现一，Ｗ硝酸钥为唯氮源时利玛原甲藻的细胞毒素含量高于ｔ一Ｊ？氣化按为氮源时细胞毒素含量，相反Ｗ氨氮为唯氮源时的亚历山大藻的细胞毒素含量却远高于Ｗ硝酸盐为氛源的细胞毒素含量（Ｌｅｏｎｅｔａｌ．２００４，ｇ；Ｌｅｖａｓｓｅｕｒｅ一ｔａ１ｌ．９９５２００８，钟娜等）。；，除了无机氮，些有机氮对藻类产奉也有促进作用？。用尿素培养塔玛亚历山大藻、短凯伦藻（Ａ：口化？，口ｂｒｅｖｋ）时发现，随着尿素浓度的增加细胞奉素含量会显著增加（Ｓｈｉｍｉｚｕｅｔａｌ．，１９９３）。在用酵母浸出液培养微小亚历山大藻时，不仅可Ｗ促进微小亚历山大藻的生长，在低氮状态下的微小亚历山大藻细胞毒素含量显著増加，然而在培养微小亚历山大藻时，尿素对其生长及产毒几乎没有刺激作用，藻株生长较差，细胞毒素含星较低（张清春等２００６）。，相比氮营养盐对藻产毒的影响，憐营养盐对藻生长和毒素产生的作用比较复杂，氮可直接影响毒素合成，而磯可能是通过影响细胞内的氨基酸的合成代谢而间接影响毒素的合成（于仁成，１９９８）。当氮源充足时，在憐限制条件下细胞毒素含量会升高（Ａｎｄｅｒｓｏｎ巧化，１９９０；Ｆｌｙｎｎ幻ａｈ，１９９４；Ｊｏｈｎａｎｄ巧ｙｎｎ，２０００；Ｌｉｅｍｅｉｅｒｅｔａｌｐｐ．２００３Ｙｕ２０００。用，；＾稱酸盐培养塔玛亚历山大藻时发现在较低的巧酸盐浓度下藻细胞毒素含里较离，随着稱酸盐浓度的増加，藻细胞毒素含量变化并不会巧加，甚至会有所降低（Ｆｒａｎｇ６ｐ山ｏｓ，２００４；Ｔｏｕ２ｅｔａｅｔ化２００７Ｗａｎ，；ｇｅｔａｌ．，２００２，２００５）。低碟浓度下（化Ｉ６ｍ／Ｌｇ）微小亚历山大藻的细施毒素含量巧达Ｕｐ於Ｃ州，高稱浓度下（ｌ．８６ｍｇ／Ｌ）细胞毒素含量仅为２ｐｇ／ｃｅｌｌ。鉴于不同形式巧营养盐对藻类产毒的影响，不同形式的巧昔养盐对巧类产毒的巧响也不容忽视。在用不同形式的巧营养盐培养不同藻时，稱营养盐对巧细胞产奉的促进作用也会有所不同。用ＮａＨ２Ｐ〇４、巧酸甘油和ＡＴＰＨ种巧菅养盐分别培养微小亚历山大藻和利玛原甲巧时发现，在巧限制条件下，Ｈ种巧营养盐对微小亚历山大藻细胞产毒影响较小，稳定期藻细胞奉巧含Ｓ均维持在２２ｆｉｎｏｌ／ｃｅｌｌ左右，但兰种巧营养盐对利玛原甲巧细胞产毒影响较大，巧素总量巧单１６ 巧碟营养盐对ＳＩ孔环胺巧化Ａｍｕｍｐｏ／ｗｒｗＭ）生长及产巧水平的於喃位细胞毒素含量都有显著性差异（杨维东等２００８，张清春等２００６）。；，１．５硏究的目的、意义及路线１１．５．研究的目的与意义近年来全球范围内有害赤潮频繁发生，有毒赤潮藻类的过度増殖不仅会加剧海水富营养化还会释放大童藻毒素，严重污染海水养殖环境，威胁水产品食用安全。有霉赤潮藻类的生长及产奉不仅受光照、温度等物理因素的影响，还受营养盐变化等多种化学因素的於响，其中海水中氛、碟营养盐是藻类生长的基础物质，直接影响有奉藻类的生长及产毒情况，从而间接影响有害赤潮的发生。在我国，近海有害赤潮的爆发问题也日益严峻，有害赤潮发生频率越来越商、持续时间越来越长，新的有毒赤潮藻种不断出现。尽管目前我国还未发生食用海产品后的氣杂揀环酸中毒事件，但是相关研巧发现在我国近海海域广泛分布着氛杂螺环酸的产毒藻腹孔环胺藻。由此推断，我国近海养殖海水中可能存在氮杂探环酸毒素，该毒素的存在将对近海养殖业和人们的海产品食用安全造成很大的威胁。由于我国对该毒素的研巧起步较晚，对其毒性特点、致毒机理、检测方法和环境因素对该产毒藻种生长及产奉变化影响等内容的报道甚少。因此，本论文分离自我国南海海域的两株腹化环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２为研巧对象，考察氮憐营养盐变化对两株藻生长和产奉水平的影响。该研巧不仅为腹孔环胺藻培养条件的优化和获取更多的巧杂爆环酸巧素提供了重要的技术和方法，也为进一步分析氮杂巧环酸的产生机制积累基础数据资料，对未来国内建立全面有效的海洋藻毒素预防监测机制，保降海洋食品安全和保护人体健康具有重要的科学意义和研巧价值。１７，、 玻路营养盐对腹孔环胺巧生妖及产巧水平的化巧１５２．．技术路线￣该论文研巧采用的技术路线如图１４所示保持藻株正常生长的氣营保持藻株正常生长的巧营＾养盐浓度不变，在不同＾养盐浓度不变，在不同巧在不同気源下批次培养腹营养盐浓度下批次培养腹昔养盐浓度下批次培养腹化环胺藻（Ａｐｏｐｏｒｗｍ）１孔环胺藻（乂ｏｏｎｗｗ）孔环巧藻ｏｏｒｗＭ）ｐｐ（乂ｐｐｉＬ＿＿收集对数生长期和稳定生长期的藻细胞ＩＩＴ１离屯、收集上淸液合并上清用甲醇用甲醇处理后，冻融、＿定容起声破碎飾胞＾取定量样品毒素提取液ＺＪ，经有机系巧膜过滤后准备进样ｉ－巧朵螺环酸的ＬＣＭＳ／ＭＳ分析图Ｍ论文研巧采用的技术職，逃逆。－Ｆ．１４ＴｈｅｃｈｎｏｌｏｒｏｆｒｅｓｅａｒｃｈｉｎＡｉ出ｉｉｇ化ｇｙｏａｄｍ叩ｓｅｓｓ 巧巧营养盐对巧孔环胺藻（．心山ｍｐ巧＞ｏｒｗｍ）生长及产霉水平的於响２氮碟营养盐对腹孔环胺藻生长及产奉水平的影响甲藻的生长及细胞产毒水平不仅受温读，还、光照等环境因素的影响受氮憐Ｆｔ１Ｈｕｔａ．２００６ａ２００６ｂｅｄａｒｉａｅｔａｌ．营养盐变化的显著影响（ｌｎｎｅａｌ．９９６ｅｌＧ，ｙ，；，，；２００７）。不同种类有毒甲藻产生的藻毒素的化学结构和毒素狙成不同，氮碟营养盐变化对藻细胞产毒水平的影响程度也会有所不同。在己发现的有毒甲藻中，腹孔环胺藻就是一种能产生氮杂據环酸毒素的小型甲藻。研究发现在我国东部沿海广泛分布着腹孔环胺藻（Ｋｒｏｃｋｅｔａｌ．，２０１４；Ｇｕｅｔａｌ．，２０１３）。尽管目前我国还未近几年我国近海有害赤潮的爆发问题日益严见氮杂螺环酸中奉事件的报道，但最，峻，有害赤潮发生频率越来越高、持续时间越来越长、有毒赤潮藻种也越来越多严重危害沿海养殖业和海产品食用安全，。因此本文分离自我国南海海域的两株腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２为研巧对象，采用批次培养的方法，分别考察了不同氮碟营养盐条件对两株藻生长和产毒水平的影响。２．１实验材料与仪器Ｉ新鲜海水；采自青岛市喷山区石老人海水浴场附近海域；（）口）放孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２：国家海洋局第Ｈ海洋研巧所顾海峰老师惠赠；（３）硝酸钢：色谱纯，美国Ｓｉｇｍａ公司；（４）巧酸二氮钢：色谱纯，德国Ｍｅｒｃｋ公司；５六水Ｈ巧化铁：优级纯，上海市国药化学试剂有限公司；（）（６）己二胺四奋酸二钢二水合物：优级纯，上海市国药化学试剂有限公司；；７五水硫酸铜；优级纯，上海市国药化学试剂有限公司（）（８）二水钮酸钢：优级纯，上海市国药化学试剂有限公司；巧）屯水硫酸巧：优级纯，上海市国药化学试剂有限公司；１０六水巧化钻：优级纯，上海市国药化学试剂有限公司；（）ＩＩ四水ｉ；优级纯，上海市国药化学试剂有限公司；（）［化链１Ｂｉ２：生化试剂，北京中生瑞泰科技有限公司；（巧维生素（１３）维生素Ｈ；生化试剂，上海市国药化学试剂有限公司；（１４）维生巧Ｂｉ；生化试剂，天津市广成化学试剂有限公司；１９ 营巧色巧Ｂ孔巧技ｇ生长及产毒水平的Ｒ响〇５）巧杂巧环酸：加拿大国家研巧院海洋生物研巧巧（Ｃａｎａ出ａｎＮａｔｉｏｎａｌＲｅｓｅａｒｃｈｏｕｎｃ．ＨＣｌｉ，Ｎ．ａｄａ）ｉｌａｆａｘＳＣａｎ；＾６东波细胞巧碎化－Ｕ）超；ＫＳＳＯＦ，宁波海逗科生超声巧备有限公司；１７培巧箱－２８０ＢＸ（）化照：ＨＤＬＨＰＧ，哈巧滨市东联电子技术开发有巧公司；（１８）ＬＣＭＳＭＳ系巧：Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０离巧巧相色谨ｔＰａｌｏＡｋａ，ＣＡ，ＵＳＡ），配备．＼ｉｌｅｎｔ６４３０幸联四巧杆巧诺化．联结接口为ＥＳＩ源：ｇ＊Ｘ０９）色巧持：ＩｈｅｎｏｍｅｎｅｘＬｕｎａＣ１８（５０２．１ｍｍ．３ｉｍ），美国化抑ｏｍｃｎｃｘｆ公巧。２、２实验方法三．２、１巧托环技巧的巧巧实接《巧的巧孔巧按藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２计离自我星索海海域．在实验＇－０责基趙进行抵巧适养室中１１＾２巧砖基（＆巧２，巧巧５０〇１１止審巧巧，每巧海水．适琴骂巧套然巧禾巧自青Ｓ巧巧山运石老秦水咨巧昨适海＾ＨｉｉＳＯ．監案５０＾经孔控化＾章啤巧渥合户维巧痕忌恣运落化蹇养蓋ｐ，海＂￣＊６＝．》０００（＜０００＾．＆窜＊藻梓磋垄专奇光損亏龙垣比丄出）为１三：１２，巧盏￣巧专安栓巧甘皇柔．草参考２０１４巧巧巧含巧漢水羊＆巧受１３２０年重国家抹《＝海洋巧公巧巧靑运巧巧洋境或夸违，忘老人巧乂惡巧朽运磊键巧水巧？５．挨送Ａ运《案巧古１友；！０：ｉＭ平巧《宝亩１．７１ｉＭ：巧整蓋本度法重扣请ｊ｜＇＇（１公ｉｌｅＣ＾Ｍ、平场蔽定如＿５６ｊｉＭｔ＇＾衣考察局１１＆兹《案７：巧？＾辰柔ＡＺＤＹ０６巧ＡＺＰＣ２２巧生长及芦寒水平抗於巧巧、蔓Ｆ：璋巧＊Ｉ（ｌ、Ｘｊ巧酸蓋藻宝Ｚ３６Ｍ＜裙度爸《重：汾：典；ｐ＇、ｖｉ达ＵＰ，巧寒瑶上巧巧空巧液定不巧，在ｉ、筵颗凳荣罢ｔ巧培养中悉ｒｆ哩盤；要按）、、战：、巧鑑添孤巧巧度毯振宅取化请０＼旨然寒京汾Ｊ嘴抑Ｉ＇、ｘ’ｖｎ＼、办＾Ｎ）、巧龜悉７伊＾于考黑是罢框羊替养，巷襄条Ｉ畔芝争巧巧、１１守３释巧子菜巧痕巧．三挺霉子巧狂三藉维巧粟＝ｉ＝；：平看巧考子療巧报？维進々？遷最化松化？藻细聚、蹇盖女，空贵巧＾二ｉ献、］．樂＃載巧教ミｘ巧＾逆ｅ餐丧莫罢堯市银巧祐柔军重空１拍曲田酿》止左巧＊■＾＾車平，馬哦巧寬來专巧馬後巧把环巧棄巧生卷爱：｜察＿妻水巧１再肢杏Ｆ３进Ｉ ＆冉营养化对曲孔巧技藻ＭＭｄｉｎｍｍｗＪｏｎｉＭ）生长及产毒水平的Ｒ响培养基的基础上，控制培养基中硝酸盐的浓度不变，在批次培养中设计四组实验，每组添加的巧酸盐浓巧依此为０（自巧海水）、３．６ｉＭＷ．ｌｘｐ）、３６ｌＭ（Ｉｘｐ）、ｊ＾ｘ１０９ｉＭ（３Ｐ），每组同样设７个平行样于光照培养箱中巧养，培养条件完全相＾同，其中３个平行样用于巧细胞计巧，２个平行样用于对数生长期细胞巧殖速率最快时收集藻细胞，２个平行样用于稳定生长中期收集藻细胞。当母巧培养到对数生长期时进行接种，保持各锥形瓶中初始巧密度在１０００ｃｅｌｌｓ／ｍＬ左右。考察不同形式巧源对两株腹孔环胺巧生长状况的於喃时／２培养基的巧，在Ｆ础上，保持培养基中巧酸盐的浓度不变，采用的两种额源分别是尿案（有机汲源）和硝酸钢（无机氮源）。在批次培养实验中设计两组实验，分别是ＮａＮ〇３沮（８８２ＨＭ）、Ｃ０（ＮＨ２）２组（４４！ｎＭ），两组中巧酸盐浓度均为３６ｊｉＭ。毎组设计７个平行样于光照培养箱中培养，培养条件完全相同，其中３个平行样用于藻细胞计，２个平行样用巧，２个平行样用于对巧生长期细胞巧殖速率最快时收集巧细胞于稳定生长中期收集巧细胞。当母液培养到对数生长期时进行接种，保持各锥形巧中初始藻密度在ｌＯＯＯｃｅｌｌｓ／ｍＬ左右。２．２．２生长曲线的測定与藻细胞收集ＦＣ一巧孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺ２２自接种后毎規天进斤藻细胞计巧，计巧，，前培养液要充分摇匀，计巧时毎姐采兰个平行样每个平行样计数两次取最终＾。平均值，并计算藻细胞密度，式培养时间对巧细胞密度绘制生长曲线如果巧巧度过大，可用自巧海水稀释后再计数。培养藻种的比增长率通过下列公式计算：－。瞒ｉｎ曲…户ｔ－ｔ（〇）。Ｗ，Ｗ表示ｔ天后藻细胞密度其中，〇表示初始藻细胞密度ｆ当藻种达到对数坐长期细胞増殖速率最快和稳定生长中期时，每沮选择２个１平行样分期收集藻细胞，收集藻细胞前锥形瓶中培养液要充分摇匀，摇匀后取，。１１止藻液于显微镜下计算藻密受，如果藻密度过大用自巧海水稀巧后再计巧１＾，．７１１１记录完培养液中的藻密度后，再将培养巧摇匀，取２〇〇〇１巧液用０＾的玻°－１８Ｃ的冰箱巧纤维巧膜收集。将收集好的藻细胞淀膜折４后用锡巧纸包住放在中进行冷冻保存，Ｉ 巧棋营养盐对巧孔环胺巧（Ａｚｆｌ沾ｍｕｍｙｐｐｏｒｕｍ）生松及产寒水平的影响／＊２－表１Ｆ／２培养基配方ｕｉｌａｒｄｅｔａｌ．１％２１９７５）（引自Ｇ，，Ｔａｂ－ｌｅ２１民ｅｃｉｅｆＦ／２Ｍｅｄｉｕｍｐｏ成分质里配制方法保存液ＮａＮ〇３７．５ｇ溶于ｌＯＯｍＬ蒸馆水中定容保存液１Ｎ＊ａＨＰ〇？２〇０．５ｇ２４－ＨＣｕＳ〇４５〇０．９８２ｇ？２ＺｎＳ〇４７Ｈ０．２ｇ２分别溶于…ＧｍＬ蒸—？ＨＣｏＣ１．０ｌ６Ｏｇ里元素储存液ｊ２微链水中定容’ＭｎＧ４Ｈ〇１８保存液２２２ｇＮ．０ａＭｏ〇２Ｈ〇．６３２４２ｇ■ＦｅＣｌ６ＨＯ３．１５ｇａ２溶于ｌ〇〇ｍＬ蒸馆水中，加入上述微量元素储存液各１ｍＬ．定容到１０００ｍＬＮ？ａｊＥＤＴＡＺＨｊＯ４．３６ｇ维生素Ｂ０．１ｉｇ维生素Ｈ０．５ｍｇ溶于１０００ｍＬ蒸巧水中定容保存液３维生素Ｂ０．５ｍｕｇ’４化＆〇９０３１２３巾．０ｇ溶于００ｍＬ蒸巧水中定容保存液注：保存液４用于培养桂巧时使用２．２．３氮杂巧环酸的提取－将收集巧细胞的玻巧纤维巧腹从１８Ｘ的冰箱中取出，在室温下解冻剪碎后、１ｍＬ１００％转移到５０ｍＬ塑料离屯管中，向离也管中添加５甲醇溶巧，沒没德巧，接着将塑料巧也管密封好，放到液巧中冻巧３次，每次５ｍｉｎ。冻曲完毕，在４＂Ｃ下用超声波细胞破碎仪处理３０ｍｉｎ。超声破碎后用巧速冷冻离也机在４吃，ｘ２００００ｇ下巧也分离ｌＯｍｉｎ，离也后收集上巧巧，接着再向含有巧巧的５０ｍＬ巧也管中加入。ｌＯｍＬ１００％甲爵巧荡摇匀，重新进行巧也分巧ｌＯｍｉｍ收集上巧液２２ 巧巧营养站对巧孔环胺藻生杉及产巧水平的１＾巧、合并上清液，将上清液离屯分离１０ｍｉｎ后转移到２５ｍＬ容里瓶里，用１００％甲醇定容。最后将定容好的上清液转移到２０ｍＬ样品瓶里。从样品瓶里取ＩｍＬ溶液用化２２叫ｎ的有机相滤膜过滤到１．５ｍＬ样品瓶里准备进样分析（Ｊａｕｆｆｒａｉｓｅｔａｌ．，２０１２，２０１３）。２－ＭＳ／ＭＳ分析．２４氮杂螺环酸的ＬＣ．ＬＣ－ＭＳＭＳ系统Ａｅｎ／：ｇｉｌｔ６４３０串联四级杆质谱分析仪，巧备有Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０°ＨＰＬＣ（ＰａｌｏＡｌｔａ，ＣＡ，ＵＳＡ），联接接口为源，ＥＳＩ的源温度是３５０Ｃ，电°压为％００Ｖ；色谱柱Ｐｈ抑ｏｍｅｎ巧ＬｕｎａＣ１８（５０＂．１ｍｍ，３ｆｉｍ），柱湿３５Ｃ，进样Ｓ５ｉＬ，流速为３００１７１１１扣。选择的流动相；流动相Ａ为超纯水溶液，流＾＾动相Ｂ为９５％乙脂溶液，二者均含有２ｍＭ甲酸氨和５０ｍＭ甲酸。采用梯度洗－７Ｂ脱的方式对样品中毒素进行分离：０ｍｉｎ流动相的比例从２５％升髙到１００％；－０－０５ｍｉｎ７１０ｍｉｎ％，Ｂ１００２５％维持１００的流动相Ｂ；１１．流动相从％降为；－１２１０．５１４ｍｉｎ平衡色谱柱（马巧刚，２０）。具体检测的巧杂巧环酸毒素的质谱参数如表２－２所示表２－２巧杂巧环酸分析的质谱参数Ｔａ－ｔｂｌｅ２２Ｔｈｅａｚａｉｒａｃｉｄｓｏｘｉｎｓｍａｓｓｓｐｅｃｔｒａａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｓｐｐ考案名称母巧子（ｍ／ｚ）子离子（ｍ／ｚ）Ｆｒａｇｍｅｎｔｏｒ（Ｖ）ＣＥ（Ｖ）－ＡＺＡＸ９２８．５９１０．５１８０３０ｉＡＺＡ－Ｘｉ９２８５３４８．３１８０６０．ＡＺＡ－Ｘｓ９２０．５８４０．５１８０３０－３４８ＡＺＡＸ４９２０．５．５１８０６０ＡＺＡ－８２Ｘｓ９１８．５０．５１８０４５ＡＺＡ－沿９１８．５３６２．５１８０饼ＡＺＡ－１１８７２．５８５４．５１８０３０－８６０ＡＺＡＸ７．５８４２．５１撕３０ＡＺＡ－７８５８．５８４０．５１撕３０－８５８３８．３１８０说ＡＺＡ３６．５４ＡＺＡ－２８５６．５８３８．５１撕３５ＡＺＡ－２８５６．５６７２．４１８０５５２３ 巧媒营养站对巧孔环胺藻扣ｎ山ｍｐｏｐｏｒｗｍ）生长及产考水平的！响２－２表（续）毒素名称母离子（ｍ／ｚ）母离子（ｍ／ｚ）Ｆｒａｍｅｎｔｏｒ（Ｖ）ＣＥ（Ｖ）ｇＡＺＡ－２８％．５３６２．１１８０６０ＡＺＡ－４１８５４．５８３６．５１８０３０－４ＡＺＡＩ８５４．５６７０．５１８０５５－ＡＺＡ３７８４６．５８２８．５１８０３０ＡＺＡ－３７８４６．５３４８．３１８０６０ＡＺＡ－４８４４．５８化．５１８０３０ＡＺＡ－１４２．５２４８８．５１７０３０－ＡＺＡ１８４２５７２３．６．１７０５５ＡＺＡ－４０８４２．５３４８３１８０．６０－ＡＺＡ３５．５８．８３０１２５１８０３０ＡＺＡ－Ｘ８３０ｇ．５３６２．１１８０６０ＡＺＡ－３８８３０．５３４８．３１８０６０ＡＺＡ－３８２８．５８１０．４１８０３０ＡＺＡ－３８２８．５６５８．４１８０５５ＡＺＡ－３４８１６．５７９８１．５８０３０ＡＺＡ－３９８１６３４８３．５．１８０６０ＡＺＡ－３３７１６．５６９８．５１８０３０注－：ＡＺＡＸ为未确定的氮杂巧环酸毒案２．２．５统计分析ｎ和ＳＰＳＳ－实验数据用ｏｒｉｇｉ软件进巧分析，用单因素方差分析ＡＮＯＶＡ进行差异性的统计分析，当Ｐ＜０．０５表示具有显著性差异。单位细胞毒袁含量的计算方法如下：Ｃ—（２）ｅｃｉｌ其中，Ｃ〇表示样品奉素浓度（ｆｇ／ｎ止），Ｗ表示细胞密度（ｃｅｌｌｓ／ｍＬ），Ｋ表示样品体积（ｍＬ）。单位体积毒素含＊的计算方法如下：２４ 新谈营养盐对胜孔环胺覆奶Ｉ山ｍ／ｗｐｏｆｘ／ｍ）生长及产巧水平的巧巧仁二Ｃ乂Ｎ（３）＾ｃｅｉｉ其中，［，£？表示单位细胞毒素含量（ｆｇ／ｃｅｌｌ），／Ｖ表示细胞密度（ｃｅｌｌｓ／ｍＬ）。２．３实验结果２．３１．硝酸盐和碟酸盐浓度变化对腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６生长的影响ＡＺＤＹ０６的生长曲线如图２－在不同的硝酸盐和憐酸盐浓度下腹化环胺藻１－－所示，细胞比增长率如图２２所示，最大藻细胞密度如图２３所示。控制培养液＞＜１Ｍ）时，〇．１＞（８８ｉ中碟酸盐浓度不变当添加到培养液中硝酸盐浓度低于ｆ，腹孔环胺藻的对数生长期较短，细胞比増长率和最大藻细胞密度也较低。其中自然海水（未添加硝酸盐）培养下藻株的生长状况较差，最大藻细胞密度低于５０００ｃｅｌｌｓ／ｍＬ。向培养液中添加１挪（８８２＾ｌＭ）和３側（２６４７＾ｉＭ）时，批次培养藻ｘ株的生长期变长ＩＮ培，细胞比増长率和最大藻细胞密度也高于自然海水和化养条件，。当未向自然海水中添加硝酸盐时藻株生长明显受阻随着外加硝酸盐浓度的增加，说明藻株ＡＺＤＹ０６对硝酸，藻株的比增长率和藻细胞密度都会増加盐浓度变化有积极的响应。当外加氮源的浓度升高至标准配方的３倍时未明显促进藻株的生长。添加不同浓度的巧酸盐培养腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６的结果表明，在不添加巧，酸盐的自然海水中甲藻的生长明显受到限制，生长状况较差且生长周期短细胞比増长率和最大藻细胞密度也低于其他Ｈ组培养条件；当向培养液中添加化ＩｘＰ时，甲藻在前４ｄ内的生长速率与自然海水条件下的生长速率基本相同，经过平６ｄ后的生长速率逐渐加快，，藻细胞密度也迅速巧高缓的生长过渡到第，细胞ｘ向培养液中添加ＩＰ时，藻株也在４ｄ后进到２０ｄ时巧细胞密度达到巧大；当一ｄ入指数生长期，，直稳定巧长到１４后藻密度迅速增加接着连续快速巧长到１８ｄ左右进入稳定期，在此浓度下藻株的生长状态最好，细胞比増长率和藻细胞Ｘ密度最巧。但当外加磯酸盐的浓度升巧至３Ｐ时，藻株的生长明显受到抑制，虽巧巧株比巧长率和巧细胞密度与添加化时巧差不大，但相对较早（化ｄ）进ｘ１６巧３ｃｅｌＷｍＬ，也远远低于ＩＰ培养条件入巧定生长期，最大藻细胞密度仅为下的最大藻细胞密度。由此看来，维持巧孔环胺巧ＡＺＤＹ０６的正常生长也巧要添加适量的稱酸盐，但对巧酸盐浓度的适应范围相对较窄，在低巧酸盐和巧巧酸２５ １窥巧营菲盐对巧孔环故巧（＾ｒ化／如山生长及卢寒水平的影晌盐浓度下均不利于其快速生长。本实验的研究结果表明，适合腹孔环胺藻生长的最佳的外加槐酸盐浓度是％１＼４，最佳的外加硝酸盐浓度是８８２４＼４，正是？／２培＾养基的标准配方浓度。１６００００Ｔａ■〇函。０－＿Ｉｌ〇ｘＮ／章．ｉ＼—－Ｘ１ＮＩ／一—公－占３香８００００ｘＮ去卢賣／束、已赡量＂＂￣１〇．．，．０４８１２１６２０２４Ｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅ（ｄａｙ）４００００－１ｂ．Ｔ十．—／＾３２０００－０／ＪＯ．ｌｘｐ／－■＿ｘｌ？拿２４０００－Ｔ＿＾ｘ３Ｐ４ｘ，Ｌｗ．放Ｉｕ８０００－ｙＪ７ＩＩＩＩＩＩ０４８１２１６２０２４ＣｕｌＵｉｒｅｒｉｍｅｄａ（ｙ》－２）０６图１在不同硝酸盐（ａ）和碟酸茲（ｂ浓度下腹孔环肢藻ＡＺＤＹ的生长曲线－ｕＦｉ．２１Ｔｈｅｒｏｗｔｈｃｒｖｅｏｆ＾ｏｗｒｗ所ＡＺＤＹ０６ｕｎｄｅｒ出ｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒａ化ａａｎｄｈｏｓｈａ化ｂｇｇｐ／（）ｐｐ（）ｃｏｎｃｅｎｒａｉｏｎｓｔｔ：■ 巧踩菅养盐对巧孔环巧巧讯ｍｗｍｐｏｗｒｕｗ）生长及产巧水平的彩响／表２－３不同巧路营养茲浓度下腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６的采样时间Ｔ－ａｂｌｅ２３ＳａｍｏｐｏｒｕｍＡＺＤＹｒｈｏｈａｔｅｐｌｉｎｔｉｍｅｏｆＡ．０６ｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｅｎｔｎｉｔｒａｔｅａｎｄｐｓｇｐｐｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ营养盐条件指巧生长南／ｄａｙ稳定生长期／ｄａｙｘ〇Ｎ１１１８ｘＯｌ．Ｎ１３１８ｘＩＮ１３２２３ｘＮ２２１３ｘ〇Ｐ１４１０Ｏｘ．ｌＰ１４２０ｘ２０Ｉｐ１４３ｘＰ１２１８０＜．４１］圆ｙ■ｙＤ．。０８８０＾８８２ｘ２６４７ｘ（．１）（ｌ）（３）巧化苗技＊０．３１麵醒麵ｓｂｉｔ１１１图２－２不同硝酸结和巧酸盐浓度对巧孔环胺藻ＡＺＤＹ０６最大比巧长率的巧响－ｍｕｍｉａ化ａｎｄｈａ化ｃｏｎｃｅｎ仔ａｔｏｎｎｍａｘｅｃｆｉｒｔｈ．２Ｅｆｅｃｔｓｆｄｉｆｅｒｅｎｔｎｔｒｓｉｓｏｉｉｃｏｗ．Ｆｉｇ２ｏｐｈｏｐ巧ｇ．ｒａ化ｏｆＺＤＹ０６乂ｐｏ／？ｏｒｗｍＡ巧 巧巧巧养狂对腹孔环胺巧＇（ｙ４ｒａ讯ｗｗｗｐｏｏｒｕＨｉ）生长及产韋水平的影响ｐ１５００００Ｔ－：１２００００ｈ－咖瞧胃－ｉｌｌＪ胃圓圓圓０８８Ｏｘｘ（．ｌ）８８２（ｌ）２６４７（３ｘ）巧如猜陳巧度（ｐＭ）４００００１胃－Ｉ瞧２００００－Ｉ＾Ｉ睦編咖。。。。－＾１論論輸－ｘｘｘ０３．６．ｌ３６ｌ１３（Ｏ）（）０９（）就口巧瞄棘度（ｐＭ）国２－３不同硝酸盐和槐酸盐浓度对媛孔环胺藻ＡＺＤＹ０６最大藻细胞密度的影响Ｆ－ｉ．２３Ｅｆｅｃｔｓｏｆｉｅｒｅｎｔ打ｒａｎｄｓｍａｘｍｕｍｄｆｉｔｔｅａｐｈｏｐｈａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｎｏｎｌｅｎｔｇｉｓｉｃｅｌｄｓｉｏｆｙＡ．ｏｏｔｕｍＡＺＤＹ０６ｐｐ ＇新碟营养盆对ＳＳ孔环胺藻成ｍｕｍｏｐｏｒｕｗ）生长巧产毒水平的化响ｐ２．３．２硝酸盐和憐酸盐浓度变化对腹孔环胺藻ＡＺＦＣ２２生长的影响在不同的硝酸盐和憐酸盐浓度下腹孔环胺藻ＡＺＦＣ２２的生长曲线、细胞比增－Ｙ０６长率和最大藻细胞密度如图２＊４－２，、２５和６所示，同藻株ＡＺＤ相比藻株ＡＺＦＣ２２的生长期较短，基本在１５天左右。自接种２ｄ后就迅速进入对数生长期，在４组培养条件中，用自然海水培养时藻株的生长状况也很差，细胞平均比增长率和藻细胞密度也最低，与未添加硝酸盐的自然海水培养下巧孔环胺藻ｌＯＡＺＤＹ０６生长状况相似，而且在此条件下都没有经历明显的对数生长期，到ｄ左右藻株就停止生长胞密度逐渐降低。随着添加硝酸盐浓度的增加，藻株，藻细ｘＸＩＮ、Ｎ，的生长状况显著改善，当添加３时，生长到第６ｄ左右藻细胞密度迅速增加１０ｄ左右，没能，不过到了藻细胞密度达到最大值后生长速率突然下降维持明显的稳定生长期，藻细胞即迅速死亡。当添加Ｏ．ｌｘＮ时，从藻株的生长曲１２线中可看出明显的指数生长期和稳定生长期变化，约经过ｄ后进入稳定生ｘ长期３Ｎ培养条件，，此时藻株的比增长率和最大藻细胞巧度均高于自然海水和不过低于ｘＮ培养条件，这与腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６在不同硝酸盐浓度条件下的Ｉ生长变化有所不同。尽管藻株ＡＺＦＣ２２对硝酸盐浓度的变化也表现出积极的响一些，最适宜的硝酸盐浓度低于藻株应，但其适应的硝酸盐浓度的范围更窄ＡＺＤＹ０６的适应浓度。在添加不同浓度的雜酸盐的培养过程中，藻株ＡＺＦＣ２２的生长造势对碟酸盐的响应规律与巧株ＡＺＤＹ０６基本相同。首先在用自然海水培养时藻株生长效果ｘ，。在ＩＰ条件下，两株都很差，生长期很短细胞比增长率和藻细胞密度都很低藻的长势最好，藻株的比巧长率也高，获得最大的藻细胞密度。随着巧酸盐浓度３ＸＰＩｘＰ条件。的增加藻株的生长反而受到抑制，在条件下巧大巧细胞密度低于Ｘ藻株ＡＺＦＣ２２对巧浓度路酸盐３Ｐ）的耐受能力略巧于藻株ＡＺＤＹ０６，而藻株（ｘＡＺＦＣ２２对低浓度硝酸益（Ｏ．ｌＮ）的适应能力路好于巧株ＡＺＤＹ０６。本实验的研巧结果表明，藻株ＡＺＦＣ２２在外加硝酸盐浓度为８８ｈＭ时生长期最长，生长状况最好；在外加巧酸盛浓度为３６ｍＭ时的生长状况巧好。２９ ’山巧巧营养盐对巧孔环巧巧／ｎｏｎ／ｗ）生长及产巧水平的巧巧（心ｆｌ讯ｎｗｐｐ６００００ａ１王０一４５０００－Ｘ０．１ＮｉＩ＝ｘＩＮ／／＼ｒ—ｘＮ３Ｘ／ｙ＾－％／＂３００００／ＶＬ－／．：Ｖ／「■■■１ＩＩＩ＼Ｉ！Ｉ０２４６８１０１２４６１１Ｃ山ｌｔｉｄａ：ｕｒｅｍｅ（ｙ）１ｉ８００００Ｔ１ｂ／ＩＩ■丄０／６ＷＷ－—ｘ三ｏ＼＜．ｉｐ一—ＩｘＰＩ／＼－Ｉ一＝ｇ２００００－人。＾＾＾￣￣若杉￣￣？０■＾？Ｕ厂ＩＩ１ＩＩＩＩＴＩ０２４６８１０１２１４１６１８Ｃｕｌｔｕｒｅｒｉｍｅｄａ（ｙ）图２＊４在不同硝酸茲（ａ）和巧酸點（ｂ）浓度下巧孔环胺藻ＡＺＦＣ２２的生长曲线￣Ｆ．２４ＴｈｗｉｇｅｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆＡ？ｏｒｗ／打ＡＺＦＣ２２ｕｎｄｅｒｄｉｆｅｒｅｎｔｎｔｒａｔｅａａｎｄｔｅｉ（ｈｏｓｐｈａｂｇ；／）（）ｐｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｃｍｓ３０ 巧巧昔养盐对巧孔环巧巧山ｍ／＞ｏ／＞ｏｒｗ？）生长及产毒水平的巧■２＾４２２；．，表不同氮稱营养盐浓度下腹孔环胺藻ＡＺＦＣ的采样时间Ｔａｂ２－ｍｍｅｌｅ４ｌｉｎｔｏｆＡ．ｏｎＡＺＦ２ｕｎｄｅｒｄｉｅｒｅｎｔｎｉｒａｔｅａｎｈｏＳａｐｇｉｏｉｍＣ２ｆｆｔｄｓｈａｔｅｐｐｐｐｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ＾养盐条件指数生长期／ｄａｙ稳定生长期／ｄａｙ〇ｘＮ８１２ｘＯｌ９１４．ＮｘＮＩ８１１ｘＮ３８１１〇ｘＰ８１３Ｏ．ｌｘＰ１１１６ｘＩＰ１２１６ｘ３Ｐ１１１５０－．６１ｒ■誦目Ｉ＇！给！００和听Ｉｙｘｘ０８８｛０．＼）８８２｛｜）２６４７（３）ｍａｍｍｓｓｍｍｍ０．６１＊－＇ｌ＋ＶＩｌ自Ｉ誦Ｉ；ｊｉＵＪ＿ＵＭＫｌｋ？ＫＭｉＨ（ｐ）图２－５不同靖厳盐和巧酸點浓度对朦孔环胺藻ＡＺＦＣ２２最大比巧长率的巧响，＊－ｒｅｎｎｒｔｅａｎｈａｔｅｎｃｅｎｔｒａｍｕｍｗｔｈｉｏｎｓｏｎｍａｘｉｆｉＦｉｇ．２５ＥｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｅｔｉｔａｄｐｈｏｓｐｃｏｔｉｓｐｅｃｃｇｒｏｒａｔｅｏｆＡ．ｏｏｎｄｍＡＺＦＣ２２ｐｐ＇Ｆ、 巧巧巧养盐对巧孔环胺巧（先山ｗｐｏｐｏｎｖｗ）生及产巧水平的咱６００００－１三５００００－：：：Ｉ瞧＾誦ＨｉＩＩＩ０ｘｘｘ８８Ｏ．ｌ８８２ｌ２６４７３（）（）（）滿）口巧酸笠巧度（ｍｍ）８００００１－６。。。。Ｉ麵胃－ｉＩ麵Ｈ－１關０３．６Ｏ．ｌｘ３６ｌｘ１０９３ｘ（）（）（）規扣巧巧盐巧度（ｍｍ）国２－６不同稍酸盐和購敌點浓度对腹孔环胺藻ＡＺＦＣ２２最大藻细胞密麼的影响－Ｆ．Ｅｆｅｃｔｒｅｎｔｎｔｒａｔｅａｎｈｏｓｈａｔｅｎｃｅｎｔｒａｔｎｏｎｍａｘｍｕｍｃｅｌｌｎｓｉｔｉｇ２６ｓｏｆｄｉｆｅｉｄｐｐｃｏｉｏｓｉｄｅｏｆｙＡ．ｏｏｒｕｍＡＺＦＣ２２ｐｐ３２ ’巧巧若养盆对巧孔环胺巧此ｍｗｗｐｏｐｏｒｗｍ）生长及产毒水平的巧巧２．３．３不同类型的氮源对两株腹孔环胺藻生长的影响２－７添加不同类型的氮源条件下两株腹孔环胺藻的生长曲线如图所示。可ＷＬ：Ｊ４ｄ看出，Ｊ肖酸纳、尿素为氮源时，藻株ＡＺＤＹ０６在后进入指数生长期；藻株ＡＺＦＣ２２在接种后未出现明显延滞，迅速进入指数生长期，且其生长期比藻株ＡＺＤＹ０６的生长期短，藻细胞密度也较高。Ｗ尿素为氮源时，藻株ＡＺＦＣ２２约经Ｊ过１２ｄ的指数生长期后，藻细胞密度达到最大，进入稳定生长期；ｔｊ肖酸钢为巧源时，藻株约经过１６ｄ的指数生长期后，藻细胞密度达到最大，然后细胞大。ＡＺＤＹ０６在两种氮里调亡，藻细胞密度迅速下降，无明显的稳定生长期藻株源下１６ｄ之前的生长曲线基本相似，巧素为氮源时该藻株的比增长率相对较高，但藻细胞生长速率均远低于藻株ＡＺＦＣ２２。尿素为氮源时，藻株ＡＺＤＹ０６在１６ｄ时细胞密度达到最大后逐渐降低；硝酸钢为氮源时，该藻株在１６ｄ后快速増殖，细胞密度迅速增加，到２４ｄ时细胞密度达到最大，之后未出现明显的稳定生长期即进入衰亡期。７Ｗ００＿〇＿ＡＺＤＹ巧苗巧（０６）１—ＡＺＤＹ０６原巧）Ｉ（眶－６＊＿？＿ｇ＠ＡＺＦＣ２２Ｊ￥Ｗ）尿巧（ＡＺＦＣ。）＼Ｉ５００００－／爵Ｉ＾３００００－ｔ巧＼Ｉｊ１勝４＾分、圓－心少０〇４８１２１６２０２４２８３２ＣｕＫｕｒｅｔｉｍｅ（ｄａｙ）图２－７不同氮源下腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２的生长曲线Ｆｉｇ．２－７Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｏｆ乂／Ｗ巧ｏｒｗｗＡＺＤＹ０６ａｎｄＡＺＦＣ２２ｕｎｄｅｒ出ｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅ■ｈ ＇热媒营养盐对巧孔环胺藻讯ｗｗｍｐｏｐｏｒｕｗ）生长及产窜水平的影响表２－５不同氯源下巧孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２的采样时间Ｔａｂ２－５ＡｌｅＳａｍｌｉｎｔｉｍｅｆｐｇｏｏｏｎｗｉＡＺＤＹ０６ａｎｄＡＺＦＣ２２ｕｎｄｅｒ出ｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｅｎｓｏｕｒｃｅｐｐｇ指数生长期／ｄａｙ稳定生长期／ｄａｙ硝酸巧（ＡＺＤＹ０６）１５Ｙｓ尿素（ＡＺＤＹ０６）１０１６硝酸纳（ＡＺＦＣ２２）９１６尿素（ＡＺＦＣ２２）７１５两株腹孔环胺藻在不同氮源下的最大比增长率和最大藻细胞密度如表２－６所示。Ｗ尿素和硝酸纳为氮源时乂７〇ｏｒｗｍ（ＡＺＤＹ０６）／ｐ的最大比增长率分别为化１８－－ｉ０ｉ４４（ｉ、．１４ｄｘｘ，最大藻细．７ｉ〇ｃｅｎｓ／〇胞密度分别为１ｍＬ４ｌｃｅｌｌｓ／ｍＵ尿素－和硝酸納为氛源时乂ｗｆｏｒｕｍｉＣＡＺＦＣ２２）的最大比增、０／长率分别为〇．３５ｄ．３４－ｉｘ４４ｄ，最大藻细胞密度分别为４．４ｌ〇ｃｅｎｓ／ｍＬ、６ｘｌ〇ｃｅｓ。Ｉｌ／ｍＬ从实验结果可看出，相同巧源下藻株ＡＺＦＣ２２的最大比增长率和最大藻细胞密度均离于藻株ＡＺＤＹ０６。Ｗ尿素为氛源时，两株腹孔环胺藻的最大比増长率均高于Ｗ硝酸钢为氮源时的最大比增长率，但两株甲藻在レ义泉素为氮源时的最大藻细胞密度却低于Ｗ硝酸钢为巧源时获得的最大藻细胞密度。表２＞６在不同巧源下腹孔环胺澡ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２的最大比巧长率和最大巧细胞巧度（平均值±标准差）Ｔａｂ－ｗｈｍｕｍｌｅ２６Ｍａｘｉｍｕｍｓｅｃ巧Ｃｒｏｒａｔｅａｎｄｐｍａｘｉｃｅｌｌｄｅｎｓｉｔｆ乂？ｏｒｕ／ｗＡＺＤＹ０６如ｄｇｙｏＰ巧ＡＺＦＣ２２ｕｎｄｅｒｄｉｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅ（ｖａｌｕｅｓａｒｅｍｅａｔ仕ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒ）－ｉ＾最大比巧长率（ｄ）最大细胞巧度（ｘｌＯｃｅｌｌｓ／ｍＬ）＾酸钢（ＡＺＤＹ０６）０．１４±０．０４４±０．４尿巧（ＡＺＤＹ０６）０．１８±０．０５１．７±０．１硝酸巧（ＡＺＦＣ２２）０．３４±０．０６６±０．４巧巧（ＡＺＦＣ２２）０．３５±０．０６４．４±０．１３４ 汲煤营养盐对巧孔环胺巧（＞４２化化Ｉ山ｍｏｏｎ／ｗ）生长及产巧水平的Ｒ响ｐｐ２．３．４两株腹孔环胺藻的产毒姐分分析－／Ｍ２２采用ＬＣＭＳＳ方法分析腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ的产毒组分，发现两株巧主要产生ＡＺＡ－２毒素，其中对巧株ＡＺＤＹ０６的样品检測发现其还能产－７ＺＡ－只生少量ＡＺＡ。由于缺少Ａ７毒素的标准品且该毒素含量较低，本论文中分析比较了不同氛稱营养盐培养条件下两株藻产生ＡＺＡ－２毒素的巧况。ＡＺＡ－２标准毒素和腹孔环胺藻的奉素提取样品的色谱图如２－８所示。２００００＞８５６．５６７２．４］、＞８５６．５８３８．５？—ＡＺＡ－２－１１５０００ｉｉ？Ｉ反｜｜？－３，；１１００００ＣＩ，芝．．｜占｜｜－５０００｜｜｜｜｜１１化＇■０ＵＩＩ＇Ｉ．ＩＩ．Ｉ，０２４６８１０ＲｅｔｅｎｔｉｏｎＴｉｍｅｍｉｎ）（６０００＞８４０８５８．５．５］化６＞６７２．５．４－８５６．５＞８３８．５５０００？－—ＺＡ－２Ａｊ４０００－；■ｌ＾：？！Ｓ３０００－Ｃ｜｜＇Ｉ１－２０００－１；１｜…Ｗ－—ＵＡＺＡ－７＿＿＿〇，］，０２４６８１０Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｍｉｎ）（＾－８－２？２ＡＺＡ标准毒素和糜孔环胺藻样品毒素提取麵色谱围）（Ａ．标准毒素．；Ｂ毒素提取液－－ＡＺＡ２ｔｒｔｔｔｏｆ，乂？〇？〇．Ｆｉｇ．２８Ｔｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓｏｆｓａｎｄａｄｏｘｉｎａｎｄｅｘｒａｃ／；（Ａ．Ｓｔａｎｄａｒｄｔｏｘｉｎ；Ｂ．ｅｘｔｒａｃｔｏｆＡ．ｐｏｐｏｒｕｍ）．Ｐ；Ｍ 热稱营养盐对巧孔环胺巧（心ｏ试生长及产焉水平的影响２．３．５硝酸盐和槐酸盐浓度变化对两株腹孔环胺藻产毒的影响硝酸盐和磯酸盐浓度变化对腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６的单位细胞毒素含量的影响如图２－９、２－１０所示，从图中可Ｌ：＞１看出指数生长期单位细胞毒素含虽均低于稳定生长期的毒素含量。在指数生长期４个硝酸盐组中，向培养液中添加化ＩｘＮ、ＩｘＮ和３ｘＮ时单位细胞毒素含呈相似，约为化３ｆｇ／ｃｅｌｌ，Ｈ组么间没有显著性差异（ＡＮＯＶＡ，Ｐ＞０．０５）。自然海水组中（未添加硝酸盐）单位细胞毒素含量比其他３组高出２倍＾，心上达到０．８ｆ／ｃｅｌｌ，同其它兰姐相比具有显著性差异（ＡＮＯＶＡｇ，Ｐ＜０．０５）。在稳定生长期，只ｘ有添加化ＩＮ时单位细胞毒素含呈低于ｌ．Ｏｆｇ／ｃｅｌｌ夕ｈ其余３组？ｘ浓度下奉素含呈维持在１．１１．３ｆｇ／ｃｅｌｌ左右，而且化ＩＮ组的单位细胞奉素含虽与自然海水组和ｘＩＮ都具有显著ＡＮＯＶＡＰ＜０．０５），与性差异（，３ｘＮ组差异性不大，自然海水、レＮ和＞＜３ＮＨ组之间单位细胞毒素含里没有显著性差异（ＡＮＯＶＡ，Ｐ＞０．０５）。由此来看，藻株ＡＺＤＹ０６在氮限制（自然海水）条件下因藻细胞生长缓巧使得其在指数生长期的单位细胞内的寒素含量最高，但在稳定生长期由于藻细胞停止分裂増殖，单位细胞内毒素含＊总体差异不大。在４个磯酸盐组中，藻株ＡＺＤＹ０６在指数生长期由于在添加条件下生长快速，使得其单位细胞毒素含虽明显低于自巧海水、添加Ｉｘｐ和３ｘＰ的Ｈ个实验组（＞ｌ．ｌｆ／ｃｅｌＤ（ＡＮＯＶＡ，Ｐ＜０５）。ｇ．０在稳定生长期，该藻株在自然海水和添加３．６ｌＭ（Ｏ．ｌｘｐ）的培养基中获得的单位细胞奉素含５（＞ｉ＾．８ｆ／ｃｅｌｌ）ｇ，明显巧于其在较巧巧酸盐浓度（ｉｘｐ和３ｘｐ）条件下的奉素含量（ｉ．ｏｆｇ／ｃｅｌｌ）。尽巧该巧株在添加化和３ｘＰ条件下的生长状况差异不大，但在稳定生长期低浓度巧酸盐条件下的单位细胞毒素含＊却明显升离，说明低巧酸盐浓度条件下有利于巧株ＡＺＤＹ０６产毒水平的升髙。３６ 热巧营养姐对ｆｌ！化环胺巧如生长及产巧水平的影响１〇＊１圆指数生长期１ｉ。５－ｉｂｂ！ｉｉｌｌ■Ｉｉ０８８ＯＪｘ８８２ｌｘ２６４７ｘ（）（）（３）巧化冉隊巧度（ｐＭ）圓稳故长期１５１０８８Ｏ．ｌｘｌｘ４７ｘ（）８８２（）２６（３）巧如硝酸结巧度（＂Ｍ）ｊ图２－９氯营养盐浓度对腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６单位细胞毒素含量的影巧（不同小写字母表示差异达５％显著水平）２－Ｆｉ．９ＥｆｅｃｔｏｆｎｉｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＵ）ｘｉｎｃｏｎｔｅｎｔｅｒｃｅｌｌｏｆＡｗ／ＴｏｒｕｍＡＺＤＹ０６ｇｐ／ｄ．ｉｆｅｒｅｎｔｌｅ打ｅｒｓｍｅａｎｔｉｎｉｆｉｃａｒｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｔ００５ｌｅｖｌ（ｓｇＵｅｓ） 巧煤营养茲对巧孔环腹巧生长及产巧水平的巧咱指数生长期１５圆．ａ３－ｌｉ．ｏｉｐｉ＾－ｎｉｉｉｉ０３．６Ｏ＇ｌｘ３６＾（１０９３ｘ）（）（）巧化巧巧法巧Ｓ（ｍＭ）Ｍ稳定生长期２５２－；．〇ａ＼｝ｍｗＭＨ０３．６．ｌｘｘ（Ｏ）３６ｌ１０９３Ｘ（）（）添加巧酸益巧度（ｐＭ）２－图１０巧昔养盐浓度对腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６单位细胞毒素含蛋的影响（不同小写字母表示差异达５％显著水平）Ｆｉ－１ｔｆ．２０ＥｆｅｃｏｈｏｓｈａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｎｇｉｓｏｎＵ）ｘｉｔｔｐｐｎｃｏｎｅｎｐｅｒｃｅｌｌｏｆ乂ｏｏ／Ｔ＾ｍＡＺＤＹ０６ｆｐ（ｄｉｆｅｒｅｎｔｌｅ打ｅｒｓｍｅａｎｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ出ｆｅ忙ｎｅｅａｔ０．０５ｌｅｖｅｌｓ）硝度盐和辩酸盐浓度变化对腹孔环胺巧ＡＺＦＣ２２单位细胞毒素含里的影响如图２－２－１１、１２所示，从图中可Ｗ看出该藻株在稳定生长期的单位细胞毒素含量也高于指数生长期的单位细胞毒素含量，这与藻株ＡＺＤＹ０６的产毒特征相同。巧株ＡＺＦＣ２２在指数生长期不同硝酸盐浓度下单位细胞毒素含里分别是１．１３８ 巧巧管巧茲对巧孔环胺藻如ｍｗｍｐｏｐｏｒＭｍ）生长及产毒水平的影响ｆｇ／ｃｅｌｌ（０）、１．６ｆｇ／ｃｅｌｌ（ＯＪｘＮ）、０．７ｆｇ／ｃｄｌ（ＩｘＮ）和０．９ｆｇ／ｃｅｌｌ（３ｘＮ）；稳ｌｌ０）／ｌｌ１ｘＮ）、１．Ｕ定生长期单位细胞毒素含星分别是１．５ｆｇ／ｃｅ（、２．６ｆｇｃｅ（０．５ｆｇ／ｃｅ（ＩｘＮ）和１．５ｆ／ｃｅｌｌ（３ｘＮ）。比较发现在指数生长期和稳定生长期两个细胞生ｇ长阶段Ｘ，添加化１Ｎ时单位细胞毒素含量均高于相同生长阶段其它３组的单位细胞毒素含量，不过四组之间单位细胞毒素含量差异性不明显。國指数生长期２．５１ａＡ－２．０〇二－１．５戸豕ｉａｂ参Ｉａｂ－’．Ｏｈｇ扇垂ｉＨｉＩｉｉ０Ｏｌｘｌｘ２６４７３ｘ８８（．）８口（）（）巧如【ｍＭ）３．５Ｍ稳定生长期ａ一－２．８ＩＰ鬥，二２－ｒｒａ．１ｉｆｍＩｉｉ０８８Ｏ．Ｉｘ８２ｌｘ２６４７ｘ（）８（）（３）巧如巧政泣巧度（口Ｍ）困２－Ｈ巧营养盐浓度对腹孔环胺藻ＡＺＦＣ２２单位细胞巧素含量的化巧（不同小写字母表示差异达５％显著水平）．－１ｆｆｔｆ．ＡＦｎｉｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎｔｏｘｉｎｃｏｎｔｅｎｔｅｒｃｅｌｌｏｆＡｏｏｒｕｍＺＦＣ２２ｉ．２１Ｅｅｃｏｔｒａｔｅｃｇｐｐｐｄｉ鞭ｒｅ打ｔｌｅ打ｅｒｓｍｅａｎｔｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０．０５ｌｅｖｅｌｓ（ｇ）ｍ 巧路营养盐对巧孔环胺巧山生长巧产毒水平的影响５．医空］指数生长期ｉｂｉ＼ｒ－ｍ＾Ｐ－Ｉｐｐ。０３．６．ｌｘ３６ｘｘ（Ｏ）ｌ１０９（）（３）測Ｏ巧废益巧度（ｐＭ）圓稳定生长期。８１ａＩ？圖■ｉＩ瞧ｂｆｃ■ＢＩ＼ｌ■覇幽咖０３．６ｘ％（ｘｘ（０．１）ｉ）１０９３（）就？喊離巧度（ｉＭｆ）２－围１２巧营养盐浓度对席孔环胺藻ＡＺＦＣ２２单位细胞毒素含里的影响（不同小写字母表示差异达５％显著水平）－Ｆ．２１２Ｅｉｆｅｃｔｏｆｈｏｓｔｅｃｏｎｅ抑ｔｒａｔｏｎｇｉｓｏｎｔｏｘｉｎｃｏｎｔｅｎｔｐｐｈａｐｅｒｃｅｌｌｏｆＡｏ／；口ｒｗｗＡＺＦＣ２２ｐｄｉｆｅｔｌｔｔ（ｒｅｎｅｅｒｓｍｅａｎｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ出ｆｅｒｅｎｃｅａｔ０．０５ｌｅｖｅｌｓ）研巧憐酸盐浓度变化对藻株ＡＺＦＣ２２细胞产韋的影响实验发现，在指数生长期随着憐酸盐浓度的增加，该藻株单位细胞毒素含量逐渐减少，单位细胞的最高寒素含里是最低毒素含量的８倍左右，具体情况如下：４ｆｇ／ｃｅｌｌ（０）＞２．２ｆｇ／ｃｅｌｌｘ（Ｏ．ｌｐ）＞〇．５ｆ／ｃｅｌ（ｘ）ｇｌ３Ｐ。在稳定生长期，不同踩酸盐浓度下单位细胞毒素含里的变化趋势与指数生长期的变化趋势基本相同，当添加憐酸盐浓度超过３．６４０ 氣憐菅养盐对巧孔环胺藻油ｎ山ｍｐ巧ｗｒｗｍ）生长及产巧水平的影响ｘＷｌｌ０８（／〇州。．ｌｐ）时，单位细胞毒素含量极速减少，从５．８ｆｇ／ｃｅ降低到．§总体上，在低碟酸盐浓度下单位细胞产毒水平远远大于高碟酸盐浓度下的单位细（ＡＮ胞产毒水平，两种极端浓度下单位细胞产奉水平具有显著性差异ＯＶＡ，Ｐ＜０．０５）。比较藻株ＡＺＦＣ２２和ＡＺＤＹ０６在硝酸盐和碟酸盐浓度变化下的单位细胞毒素含量发现，藻株ＡＺＦＣ２２的单位细胞产奉水平相对髙于藻株ＡＺＤＹ０６。总体来看，两株腹孔环胺藻在不同氮浓度条件下的产毒水平差异不显著，低的巧浓度未表现出对产毒水平的刺激作用；但在低的憐浓度条件下两株藻的单位细胞产毒水平明显高于离憐浓度条件下的细胞产奉水平，说明磯限制条件能刺激腹孔环胺藻的产毒水平升高。２．４讨论２４１．．硝酸盐和踞酸盐浓度变化对两株腹孔环胺藻生长的影响。Ｗ往的研巧表明，硝酸盐浓度的变化会对甲藻生长产生明显的於响通常条一，藻细胞生件下，在定范围内硝酸盐浓度越商，甲藻具有适应高氮环境的能力长越快，甲藻的生长又产生抑制作用，指数生长期越长但是过离的硝酸盐浓度对ｔａｎｅｔａ，（ａｒｓｏｎ１９Ｌｅｏｎｅａｌ．）。硝Ｈｒｉ．２００４Ｗｌ２００２本论文的研巧发现，７３，；，；ｇｇ一酸盐浓度变化湿著影响两株腹孔环胺藻的比増长率和最大藻细胞密度。在定浓度范围内，保持其他培养条件相同的情况下，两株藻的比增长率和藻细胞密度将一随着硝酸盐浓度的增加而増加，当硝酸盐浓度增加到定水平时比増长率和藻细。黄晓航等也发现在胞密度达到最大，硝酸盐浓度继续增加反而抑制藻株的生长，指数生长期持续时适宜的条件下氮巧养盐浓度越高，海洋原甲藻生长速度越快间也越长１９９７）。在用硝酸巧培养塔玛亚历山大巧时，当硝酸钢浓（黄晓航等，１度小于５１１＾，在１〇〇＾＼１下１７６＾时，藻株的生长速率随着硝酸钥浓度巧加而堆大ｉ０，山大巧种达到最大生长速率的获得巧大生长速率．５１ｄａ）但是不同的亚历（ｙ（Ｌｅｎｅｔａ２００４１Ｓｈｉ２００５）。其中链状亚历山ｌ．Ｓｉｕ，９９７硝酸盐浓度却有差别ｇ，；；，大巧ＡＣＤＨ巧株在大于２８Ｍ硝酸盐浓度下即可Ｗ获得较大的増长速率（李天ｉｊ。＾＾￥０６在添加８８２１＼１本研巧结果也发现，巧株硝酸盐条件下的深，２００７）＾生长狀态巧佳，但巧株ＡＺＦＣ２２在添加８８ｎＭ稍酸盐条件下的生态期最长，这出一定的差异两株腹孔环胺巧对巧巧浓度的巧求也表现。４１ 巧媒营养盐对巧孔环腺巧Ｍｒ化机ｉｍｍｊｆｌｊｏｒｕｗ）生长及产奉水平的影响／／虽然不同的甲藻对憐营养盐的需求不同，但过高或过低的稱营养盐浓度都会抑制甲藻的生长（王正方等，１９９６；张宜辉等，１９９９）。在本实验中不同憐酸盐浓度下两株腹孔环巧藻的生长趋势也验证了该观点。在用自然海水培养时，自然海水中憐酸盐本底浓度很低，此时藻株ＡＺＤＹ０６的生长明显受到抑制，随着外加碟酸盐浓度的增加，其比增长率和藻细胞密度逐渐增高，当稱酸盐浓度达到，时获得最大藻细胞密度，超过３６ｌＭ时藻细胞密度明显降低＾，藻株生长也受到一定的抑制。同样，藻株ＡＺＦＣ２２在自然海水培养时生长也极其缓慢，３５＞＜州最大藻密度甚至不超过１〇〇５／〇山，在３６１＼４浓＾度下获得最大藻细胞密度，浓度继续增加后藻株生长有所减弱，最大藻细胞密度也有所降低，这可能因为商憐酸盐浓度影响藻细胞内碱性碟酸酶的活性，从而间接影响藻细胞对縣酸盐的吸收，影响藻株的生长。Ｇａｍｂｉｎ等也研巧认为溶解于水中的正憐酸盐会与底物竞一争，抑制碱性碟酸酶的活性（Ｇａｍｂｉｎｅｔａｌ．１９９９）。，般情况下，大部分海洋藻类体内都含有碱性碟酸酶，碟限制状态和憐酸盐屋乏时会促进藻细胞内碱性碟酸，而喊性機酸酶将促进藻细胞对憐酸盐的吸收酶的合成，促进藻株生长（ＫｏｂｏｒｉａｎｄＴａｇａ１９８０ＢｅｎｔｚｅｎａｎｄＴａｏｒ１９９１）。，；ｙｌ，研究还发现在相同的硝酸盐和碟酸盐浓度下藻株ＡＺＦＣ２２的生长状况与藻株ＡＺＤＹ０６明显不同。藻株ＡＺＦＣ２２的藻细胞生长期明显短于藻株ＡＺＤＹ０６，只有１６ｄ左右，但其比増长率却离于藻ＺＤＹ０６株Ａ，相对更早进入指数生长期。这种生长曲线的差异，可能是因为巧株ＡＺＦＣ２２在接种到新的培养液中，能够很快适应新的营养盐环境，实现藻细胞的快速分裂增殖，对培养基中营养盐的吸收速率也快，在藻株的迅速生长过程中大里消耗营养盐，使培养液中营养盐浓度迅速巧低。这种快速增殖过程使得培养液中剩余的营养盐浓度不足Ｗ维持长时间的亩密度藻细胞的分裂増殖，因为营养盐供给不足，藻细胞生长速率不断减小，当藻细胞密度达到最大时生长竞争最激烈，细胞停止増殖，然后迅速调亡。比较不同巧酸盐和硝酸盐浓度下两株腹孔环胺巧的生长趋势发现，两株巧对昔养盐的变化都表现出积极的咱应，巧酸盐和硝酸盐是藻株生长必不可少的营养成分。当硝酸盐供给不足时两株巧的巧细胞巧度和生长速率都很低，稍酸盐充足时，两株誤生长状况较好，其中藻株ＡＺＤＹ０６的最大藻细胞密度维持在ｘ８１护４ｃｅｌｌｓ／ｍＬＷ上，藻株ＡＺＦＣ２２的最大藻细胞巧度维持在６ｘｌ〇ｃｅｌｌｓ／ｍＬ左右。但４２ 恕煤芭养盐对胜化环巧巧（ｖ４：：ｏ讯ｕｍｐｏ／ｗｒｕｗ）生长及产毒水平的影响ｘ这两株藻对碟酸盐浓度的适应范围较窄，，当稱酸盐的浓度升高至３Ｐ时其生长＜１１＾４１＞口速率和藻细胞密度明显降低，生长受到抑制３６。外加碟酸盐的浓度在＾（）时，两株藻的生长状态最好。２．４２．不同氮源对两株腹孔环胺藻生长的影响海洋中的氮源主要包括氨氮。海洋藻、硝酸盐、亚硝酸盐、尿素和氯基酸等一，类可Ｗ不同程度的利用这些氮源，些海洋甲藻惶向于利用氧化态的含氮化合物ＮＯＮＯＬｏｍ２０００一），如、（ａｓａｎｄＧｌ化ｅｒｔ，，些趋向于利用还原态的含巧化合物ＪＪＮＨ、尿（Ｂｅｒｅｔａ．１Ｍｕｌｈｏａｎｄｅｔａｌ２００４）。如素等ｌ９９７ｌｌ．不过大部分的甲藻ｊｇ，，；更趋向于利用环境中的无机氮源，当无机氮缺乏时才选择性的利用有机氛源。本＾，，论文研究发现，外加氮源分别心硝酸钢和尿素为主时两株甲藻均能有效生长经历指数生长期和稳定生长期，达到较髙的细胞密度，但有化氛源培养时藻株的生长周期和最大藻细胞密度均低于无机氮源培养条件，这与大部分海洋甲藻的生长状况相同，海洋中的甲藻会优先利用海水中的无机氮，当无机氮缺乏时才选择一性利用部分有机氮（尿素等）。在Ｗ无机恕（硝酸盐）和有机氣（尿素）为唯巧源分别培养链状亚历山大藻和微小亚历山大藻时，无机巧（硝酸盐）充足条件，２００６深，２００７）。下藻株的最大藻细胞密度要髙于有机巧（尿素Ｘ张清春等；李夭表现出相对咯商的比巧长率，说但在外加尿素的培养条件下，两株腹孔环胺藻均明在有机氮源为主的培养基中腹孔环胺藻具有较快的分裂増殖能力。这种现象也。Ｊａｕｆｉｆｒａｉｓ等提示我们，腹孔环胺巧能够很好地利用有机巧源尿素进行分裂増殖（５〇Ｍ）、尿轰与硝酸盐的混合培研巧发现，当用硝酸盐培养基硝酸盐浓度为ｍ１〇〇＾＼１１１＾），添养基（尿素浓度为，硝酸钢浓度为５０＾同时培养具削环胺藻时加尿素的混合培养基中藻株的生长速率和巧细胞密度同硝酸盐培养基相比几乎Ｊａｕｆｌｆｒａｔａ１其生长没有明显的刺澈作用，没有变化（ｉｓｅｌ．２０３），说明尿亲的存在对，一可见具刺环胺藻主要利用环巧中的无坑巧（硝酸盐）作为巧源。在Ｗ尿素为唯，可推断其巧细胞的外加巧源时，两株巧孔环胺巧都能巧利用尿素很好地生长，内可能存在尿素酶，因为尿素巧是浮游植物体内尿素去氮基的关键决定巧某种山大藻因为缺乏尿《庚，当浮游植物能否利用尿素作为巧源。据巧道，微小亚历一一２００６）。巧巧况下，尿案被巧尿素作为唯巧源培养时很难生长（张巧春，■作用下分解生成ＮＨ和Ｃ〇２，部分ＮＨ吸收后，在巧巧酶的ｉ；，首先在巧细胞内积累４３ 巧谈巧养盐巧腹孔环胺藻讯ｗｍｍｐｏｏｒｗｗ）生长巧产毒水平的形响ｐ被排出细胞外。当ＮＨ丈和尿素同时存在时，藻会优先吸收按，尿素的吸收必然受＋到限制。正常的ＮＨ浓度能促进甲藻的生长，ＮＨ４｜浓度过离则抑制甲藻的生长（Ｕｃｈｉｄａ１９７６）。，由此推断，培养液中ＮＨ才浓度的存在既可＾式抑制腹孔环胺藻对尿素的吸收，高浓度的ＮＨ王本身也可能会抑制藻株的生长。２４．．３硝酸盐和憐酸盐浓度变化对两株腹孔环胺藻产毒的影响氮碟营养盐的变化不仅影响藻类的生长，还将影响藻细胞的合成，间接影响藻类的产毒水平一。在不同的环境条件下，同株藻的毒素姐成相对稳定，但细胞产毒水平却经常变化：在相同环境条件下，不同藻株的细胞产毒水平也会有所差异一。般研究认为氮营养盐充足条件下．藻细胞产毒水平商于氮营养盐缺乏时细胞产奉水平，氮营养盐浓度过高时细胞产毒水平有所下降（Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ１９９０．；，Ｆｌｙｎｎｅｔａｌ．，１９９４；Ｆｒａｎｇ６ｐｕｌｏｓ，２００４；Ｌｉｐｐｅｍｅｉｅｒｅｔａｌ．，２００３）。但本研究结果表明，不同浓度的氮营养盐对两株腹孔环胺藻在稳定生长期的产毒水平的影响不明显一。考察氮营养盐浓度对其它藻类产毒影响时也发现，在定浓度范围内塔玛亚历山大藻的毒素含量随着硝酸钢浓度增加而增加；当按氮浓度为１．８３ｍｇ／Ｌ时铜绿微囊藻的细胞毒素含量达到最大一，氨氮浓度超过Ｌ８３ｍｇ／Ｌ时对其产毒有定的抑制作用（Ｌｅｏｎｇｅｔａｌ．，２００４；ＷａｎｇａｎｄＨｓｉｅｈ，２００２，２００５；张巧等，２００６）。憐酸盐在甲藻的生长代谢中也发挥着重要的作用，氮营养盐充足的巧况下，巧限制或低巧浓度下甲藻的产奉水平会大幅提高（Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，１９９０Ｆｌｎｎｅｔ；ｙａｌ．１９９４Ｌｉｅｍｅｉｅｒｅｔａｌ．２００３ｏｈｎａｎｄ，ＪＦｌｎｎ２０００１，；ｐｐ，；Ｙｕ２００）ｙ，；较离的憐营养，盐浓度虽然能促进甲藻细胞的分裂増殖，但却不利于毒素的巧累（Ｆｒａｎｇ６ｐｕｌｏｓ，２００４）。在巧限制或稱缺乏条件下，藻细胞因巧养盐供给不足，细胞分裂増殖缓巧，细胞体积会逐渐巧大，但是巧素的合成并没有停止，从而使细胞产毒水平増。研巧发现在巧限制条件下亚历山大藻的生长会受抑制加，但细胞产奉能力将会巧商（Ｍｕｒａｔａｅｔａｌ．２００６ＷａｎａｎｄＨｉｅｈ。；ｓ２００２）本研巧也发现，ｇ，，保持寐昧正常生长的氮营养盐浓度不变，两株腹孔环胺藻在低巧浓度下单位细胞奉素含量也会巧加，其中藻株ＡＺＦＣ２２表现得更加突出，在指数生长期低路浓度下的单位细胞奉袁含量巧达４ｆｇ／ｃｅＵ，商巧浓度下单位细胞毒素含量仅为化５ｆｇ／ｃｅｌｌ，在稳定生长期低巧浓度下的单位细胞毒素含童巧达５．８ｆｇ／ｃｅｌｌ，在高礙浓度下单位细胞毒素含量仅为化８ｆｇ／ｃｅｌｌ。在用巧酸盐培养微小亚历山大藻和塔玛亚历山大藻时，４４ 氣贼营养盐对巧化环胺巧讯Ｈ／ｕｍｏＨｉ／Ｍ）生杉及产毒水平的影响ｐ所４／ｃｅｌ，低憐浓度下（０．１６ｍｇ／Ｌ）微小亚历山大藻的细胞毒素含量高达１ｐｇｌ高縣１．８６ｍ／〇州ｌＭ浓度下（ｇ＾）细胞毒素含量仅为２９３；当憐酸盐浓度为５＾时塔玛亚历山大藻细胞毒素含量最高］４０，機酸盐浓度为２０１＾１、３０ｉＭ和ｔＭ时塔玛亚＾＾＾历山大藻的细胞毒素含量基本没有变化（Ｔｏｕｚｅｔａｅｔａｌ．，２００７；Ｗａｎｇｅｔａｌ．，２００２）。本论文研巧认为，低碟条件能显著提高两株腹孔环胺藻的单位细胞产毒水平，高，踞条件虽然能显著促进藻株的生长，获得较高的藻细胞密度但对细胞产奉的刺激作用较小，单位细胞产毒水平很低。－般研巧认为藻类在稳定生长期的细胞的奉素含量高于指数生长期细胞的毒素含至（Ａｎｄｅｒｓｏｎｅｔａｌ．，１９９４Ｈａｍａｓａｋｉｅｔａｌ．，２００１；ＬｉｍａｎｄＯａｔａ．２００５）。比ｇ，；较稳定生长期和指数生长期两株腹孔环胺藻的细胞奉素含量变化也基本符合Ｗ，上观点。在指数生长期，培养液中氮稱营养盐浓度商，细胞生长压力小生长竞争也很弱，藻细胞处于快速增殖分裂阶段，细胞吸收氮憐营养盐主要用于细胞的生长和蛋白质、ＡＴＰ、ＡＤＰ等生命物质的合成，用于奉素合成的营养盐不足，体和单位体积毒素含里低，；到了稳定生长期后内奉素不能有效的累积，单位细胞，营养盐供给不藻细胞密度达到最大，而此时培养液中巧巧营养盐的浓度却很低：，，主足，细胞么间生长竞争激烈部分细胞停止分裂生长要吸收营养盐进行奉素，，稳定生长期的单位细的合成，细胞内毒素迅速累积细胞产毒能力也迅速升商胞和单位体积巧素含量要高于指数生长巧。对不同氮巧营养盐条件下两株腹孔环胺藻培养基的单位体积奉素含量分析发现：指数生长期巧化环胺藻ＡＺＤＹ０６在化ＩｘＰ、ＩｘＰ和３冲培养条件下单位体１２比具有显著性差异（ＡＮＯＶＡ，积寒素含量基本维持在ｐｇ／ｍＬ左右，与自然海水相Ｐ＜０．０５），巧株在自然海水、化ＩｘＮ、ＩｘＮ和３ｘＮ四组培养条件下单位体积巧素＞．０５）生长期巧株ＡＺＤＹ０６在Ｏ．ｌｘＰ含量没有显著性差异（ＡＮＯＶＡ，Ｐ０！稳定和ｘ和３ｘＰ，巧株在ＩｘＮ和ＩＰ培养条件下的单位体积毒素含量均髙于自然海水ｘｘ水和化ＩＮ培养条件，单位３Ｎ培养条件下单位体积毒巧含量远远巧于自然海体积毒素含Ｓ巧髙可达１６０ｐｇ／ｍＬ－ｘ巧孔环胺藻ＡＺＦＣ２２在０．１Ｐ培养条件下的单位体积毒袁含量均高于其它Ｈ组，而且在稳定生长期该条件下的单位体积巧案含量与其它Ｈ组相比均具有显著性差异（ＡＮＯＶＡ，Ｐ＜０．０５）。考察不同巧酸盐浓度对藻株ＡＺＦＣ２２单位体积４５ ＳＩ巧替养益对度孔环胺巧化扣１山ｍｐｏ／ｗｒｕｗ）生长及产毒水平的彩响奉素含星影响时，在指数生长期自然海水培养条件下的单位体积毒素含里低于其＜０２２它兰姐，（ＡＮＯＶＡ，Ｐ５）。而且藻株Ａ巧Ｃ而且与其它Ｈ组均具有显著性差异．０３＞＜？下的单位体巧毒素含里没有显著性差异（ＡＮＯＶＡ＞），在＾？和，Ｐ０．０５在ＩｘＮ和３ｘＮ下的单位体积毒素含量也没有显著性差异（ＡＮＯＶＡ，Ｐ＞０．０５）。总体上，藻株ＡＺＦＣ２２在０．】ｘｐ和化ＩｘＮ下单位体积毒素含量最寓，最高可达１６０／ｃｅｌｌ左右。ｐｇ固指数生长期ｉｌｉｉｌ０３．６Ｏ．ｘｘ０９３ｘ｛ｌ３６ｌ１）（）（）巧如巧巧笠巧度（ｉＭ》ｆ圓臟长期ａ４。－二刚？ｔＩＩｉ．６Ｏｘｘｘ０３（．ｌ）３６（ｌ）１０９（３）測Ｗ巡巧Ｓ（ｉＭ）ｆ图２－ＡＺＤＹ０１３不同巧酸盐浓巧下巧孔环胺藻６的单位体积韋素含量（不同小写字母表示差异达５％显著水平）－Ｆ．ｒｓｉｇ２１３ＴｏｘｉｎｃｏＭｅｎｔｅｒｍＬｏｆｏｏｒｗｍＡＺＤＹ０６ｕｎｄｅｒｄｉｆｅｅｎｔｐｈｏｈａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｐｐｐｐｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｓｍｅａｎｓｉｎｉｆｉｃａｎｉｆｅｒｅｎｃｅｔ．ｌｓ（ｔｅｒｔｇｉｄａ００５ｌｅｖｅ）４６ 慰煤营养盐对腹孔环胺藻（Ａ：ｇ说生长畢水平的於响圆隱长期ｉｉｉｉ０８８Ｏ．ｌｘ８８２ｌｘ２６４７３ｘ（）（）（）巧扣Ｍ度盐巧度（卢Ｍ）圓稳定生长期ｗｏ２ＵＵ１，ｂ１ｈ－１５０Ｉ幽ｒ。－ｕ国－５。｜。■Ｉ蓋１＾。ｐ圍圓ｘ２ｘｘ０８８Ｏ＇ｌｌ４７（）８８（）２６（３）巧加拥船巧度（ｉＭ，ｆ２－４图１不同巧巧盐浓度下苗孔环胺藻ＡＺＤＹ０６的单位体积毒素含量（不同小写字巧表示差异达５％畳著水平）Ｆ－ＭＡｒｅｎ１４ｘｔｏｐｏｒｕｍＡｔｔｔｉｇ．２ＴｏｉｎｃｏｅｎｐｅｒｍＬｏｆｐＺＤＹ０６ｕｎｄｅｒ出ｆｅｌｎｉｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｒａｉｏｎｓ（出ｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｎｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｔ０．０５ｌｅｖｅｌｓ）ｋＩｋｌ—ｌｂ －化ｏ反巧昔养盆对苗孔环按巧（人扣！山ｍｐｐｏｒｗｎ）生长及产巧水平的於响酬謹期ａｔｉＩ；。？Ｉｉ扇＾圍ｉ．ｌｉＩｉＩ０ｘｘ９３．６０」３６１０３ｘ（）〇）（）巧如篇脚巧度（）圓稳體长期ａ５。－１ｉ咖Ｈｈ８Ｈｈ｜…０－Ｓ■巧国ＩＨ５。－顆巧。国圓咖圍國■Ｊ申０３乂０．１Ｘ３６ｌｘ０９３ｘ１（）（）（）測供度（ｍＭ）图－量２１５不同巧酸盐浓度下巧孔环胺藻ＡＺＦＣ２２的单位体积韋東含（不同小写字母表示差异达５％显著水平）Ｆ－ｉ．２５ＴｏｘｉｎｔｅｔｒｆＡ．ｏｏｒｕｍＡＺＦｎｄｅｒｆｆｅｒｅｎｈｏｔｔｒｉｇ１ｃｏｎｎｅｍＬｏｐＣ２２ｕｄｉｔｓｈａｅｃｏｎｃｅｎａｔｏｎｓｐｐｐｐｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｅｒｓｍｅａｎｔｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅａｔ０．０５ｌｅｖｅｌｓ（ｇ）－林古：：冷 热贼营养盐对巧化环胺揀化加山生长展产巧水平的形巧圓指数生长期４０ｒ＾１１１眶ｋｉｌｌ０８８Ｏｘｘ２６４７ｘ（．ｌ）８口（ｌ）（３）巧如巧酸盛巧度（ｐＭ）ＨＩ稳定生长期ａｌ：Ｌｌｉｉ０ｘｘｘ８８Ｏ．ｌ８８２ｌ２６４７（）（）（３）巧加班巧盐巧Ｓ（ｐＭ）－ＡＺＦＣ２２的单位体积寒素含童图２１６不同硝酸盐下腹孔环胺藻（不同小写字母表示差异込５％显著水平）－ｔｅｎＡＦｉ．２１６ＴｏｘｉｎｃｏｎｔｅｒｍＬｏｆｏｏｎｍｉＡＺＦＣ２２ｕｎｄｅｒ出ｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｇｐｆｐｍｎ．ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｅｒｓｅａｎｔｓｉｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｔ００５ｌｅｖｅｌｓ（ｇ）比较不同巧巧营养盐下两株巧扎环胺巧的生长状况（藻细胞密度）、单位细一胞毒亲含量和单位体积毒巧含量之间的关系巧发现：在某昔养盐条件下藻株的巧细胞密度和单位细胞毒素含量都很巧，则该条件下巧株的单位体积毒亲的含量一也较商；在某营养盐条件下藻株生长状况较好，但单位细胞，藻细胞密度很巧一一奉素含量很低，则该条件下单位体积奉素含量不定很高在某巧养盐条件下；，，藻株生长状况很差，巧细胞密度很低但该条件下单位细胞毒素含量非常商则供 巧路营养盐对腹孔环胺藻化柏加ｍｐｏ／＞ｏｒｗｗ）生长巧产毒水平的杉响一该条件下单位体积毒素含量也会很离．，；在某营养盐条件下藻株生长状况很差藻细胞密度和单位细胞毒素含量都很低，则该条件下单位体积毒素含量也非常低。也就是说，即使在很高的藻细胞密度下，单位细胞产毒能力很低，单位体积毒素，含量也可能不高；在很低的藻细胞密度下单位细胞产毒能力很商，则单位体积ｘＸ毒素含量也可能较离，藻株ＡＺＤＹ０６在ＩＮ和３Ｎ营养，。总体来说盐条件下稳定生长期的单位体积毒素含量较高，其中在３ＸＮ营养驻条件下单位体积毒素ｘｘ含量最高２．ｐ和Ｏ．ｌＮ营养盐条件下，稳定生长期的单位；藻株ＡＺＦＣ２在Ｏｌｘ体积毒素含量较高，其中在化ｉｐ营养盐条件下单位体积辜素含量最高。因此，为了获取大量的氮杂螺环酸藻毒素，在优化廣孔环胺藻的室内培养条件时需要综合考虑甲藻的生长状况与单位细胞奉素含量。５０ 氮诞巧养盐对胜；Ｌ环睛巧山ｍｐｏｐｏｒｕ…）生长及产巧水平的影响３结论、创新及展望３．１结论本论文通过考察不同浓度的氮憐营养盐条件下，两株腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２的生长及产毒水平，获得的主要结论如下：一（１）两株腹孔环胺藻的生长均需要定浓度的氮憐营养盐供给，对氛憐营一养盐浓度的变化都表现出积极的响应，在定浓度范围内随着氮碟营养盐浓度的增加，藻株的比增长率和最大藻细胞密度都会増大。在批次培养过程中藻株ＡＺＦＣ２２的生长周期比藻株ＡＺＤＹ０６的生长周期短，两株腹孔环胺藻对氮碟营一ｘ养盐的需求表现出定的差异。藻株ＡＺＤＹ０６在添加８８２（ＩＮ）和２６４７（３ｘＮ）的硝酸盐的培养条件下具有相似的生长趋势，且明显好于添加８８ｌＭ（０．１ｘＮ的硝酸盐的实验组；藻株ＡＺＦＣ２２在＾组添加硝酸盐的培养基中具有＾）相似的生长庭势，且在添加８８＾ＭＷ．ｌｘＮ）的硝酸盐的条件下具有更长的生长＾周期。尽管两株腹孔环胺藻在添加％＾ｌＭ（ＩｘＰ）的碟酸盐培养条件下具有最好的生长态势，但藻株八２〇丫０６在添加１０９Ｍ（３ｘＰ）和３．６＾＼１（Ｏ．ｌｘＰ）的憐酸＾，且明显差于添加３６ｌＭｌｘ盐的培养基中具有相似的生长趋势＾（巧的巧酸盐的实验组；藻株ＡＺＦＣ２２在添加（３ｘＰ）的高踩实验组中的生长态势明显好于添加３．６ｉＭ（０．１ｘｐ）的碟酸盐的实验组。由此看来，藻株ＡＺＤＹ０６相对于ＡＺＦＣ２２＾。而言，对髙浓度硝酸盐的适应能力更强，而对髙浓度憐酸盐的适应性较差（）（２）两株腹孔环胺藻在添加无机巧硝酸钢）和有机巧（尿巧的培养基，但其生长中均能正常生长，且在添加有机氛的培养基中具有相对巧的比增长率周期明显化添加无机巧的实验组短。该结果表明这两株腹孔环胺巧既可Ｗ利用无机巧也可Ｗ利用有机巧作为氮源进行分裂巧殖，且有机巧尿素更利于甲藻的快速生长，在后期对藻细胞的分，但可能由于利用尿素的过程中产生离浓度的锭离子裂生长产生毒性作用。（３）不同的巧巧菅养盐浓度下，两株腹化环胺巧在稳定生长期的单位细胞ＺＡ－奉素含＊均巧于指数生长期，且巧株ＡＺＦＣ２２产生Ａ２奉素的水平均高于巧株ＡＺＤＹ０６。在指数生长期两株巧化环胺藻主要利用营养盐进行快速的分裂巧。殖，导致其单位细胞内的毒素含＊较低在稳定生长期藻细，毒巧合成代谢较巧胞基本巧止了分裂增殖，巧酸盐浓度的变化未见对单位细胞毒素含量产生显著的５１／ 子Ｗ、热路营养紐对巧Ｌ腺藻二口讯。ｍｗｐｏｐｏｒｕ＇Ｈ）生长及产韋水平的巧言响影响，但磯酸盐浓度的变化明显影响单位细胞毒素含量，两株腹孔环胺藻均表现为在不添加和添加３．６山ＶＩ（化ｉｘｐ）的低浓度稱酸盐条件下的产毒水平相似，且ｘ明显高于添加３６叫ＶＩ（Ｉｐ）和１０９山ＶＩ（３ｘＰ）的离浓度踞酸盐的培养姐。该研巧结果表明，稱限制条件能刺激这两株腹孔环胺藻的产毒能力升高。通过比较不同浓度的氮憐营养盐条件下两株腹孔环胺藻培养基的单位体积毒素含量发现，在Ｗ获取最大量的藻毒素为目的的藻类培养过程中，应综合考虑甲藻的生长状况与产毒水平。３．２本文创新之处随着对氮杂螺环酸研究的深入，国际上对氮杂螺环酸及其衍生物和相关产毒藻种的鉴别分类的研究己有诸多报道。但关于海水营养盐变化对氛杂螺环酸产毒藻种生长及产毒水平的影响的研巧报道很少，尤其在我国对氮杂螺环酸藻毒素的研巧报道更少。为了弥补国内对营养盐变化下腹孔环胺藻生长及产毒影响研巧的空白，，通过本论文的研巧获得的主要创新突破点如下：①分离自我国南海海域的两株腹孔环胺藻ＡＺＤＹ０６和ＡＺＦＣ２２为研究对象，在实验室环境下模拟藻株的自然生长条件，在国内外首次探诗了海水中氛憐营养盐变化对腹孔环胺藻生长及产奉水平的影贿；②本研究优化了实验室环境下腹孔环胺藻的培养条件，为获得更多的巧杂螺环酸藻毒素确立了重要的技术和方法为进一；⑤步分析氮杂螺环酸的产生机制提供了基础资料。３．３展望在现有的研究基础上，期望在将来开展如下研巧：一１进步研巧探讨不同培养基培养条件下，金属离子变化对腹孔环胺（）藻生长及产毒的影巧规律和机制。（２）模拟贝类滤食腹孔环胺藻过程的培养实验，探讨贝类体内氮杂燥环酸的转化过程及贝类累积氣杂揉环酸过程中体内酶活性的响应规律。（３鉴别新的巧杂巧环酸毒素成分，建立巧效的毒素分离纯化方法，并进）一步分析新型氮杂炼环酸巧素的结构和致毒机理。５２ ＇额煤昔养盐对化孔环胺藻讯Ｈｔｗｍｐｏｐｏｒｕｍ）生长原卢巧水平的影响参考文巧ｋｌ１ＡｓｅｍａｎＲＮ巧ｒｉＲＭ［］，．Ｂｌｏｓｏｆ／）之化／／ｎ．．．ｗｃｈｔｅｒｅｉｌｌｍｏｍ／ｗｗｃｆｖ）ｍｏｖ＂Ｅ化巧ｔＴａｎｎＤｉｎｎｎｏｒｔｈｅｎｈｅｉｆｗ（ｏｐｈｙｃｃａｅ）ｉｒｓｔｒｏｆＡｒｅｎｔｉｎａｕｔｈｗｅｓｅｒｎＡｔＩａｎｔＪ．ｒｅａｅｓｇ．ＳｏｔｉｃＨａｍｆｕｌＡｌｇａ，［］２０－１２１９：３３８．、０２ＡｌｖａｒｅｚＧ．ＵｒｉｂｅＥ，入ｖａｌｏｓＰｅｔａｌ．Ｆｉｒｓｔｉｄｅｔｉｓｒａｃａｎｄｒｉ［］，ｎｔｉｆｉｃａｏｎｏｆａｚａｐｉｉｄｓｐｉｏｌｄ巧ｉｎ？瓜州ｊ口加＂。如ａｎｄ如ｆ巧－／／Ｍ口＂／，‘？ｒｏｍＮｏｒｔｈｅｒｎＣｈｉｌｅＪ．Ｔｏｘｉｃｏｎ２０１０２：６３８？［］，（）６４１．３ＡｎｄｅｒｓｏｎＤＭ，ＫｕｌｉｓＤＭＤｏｕｃｅｔｅｌ．ＢｉｅｏｒａｈｏｆＵ）ｘｄｆｌａｌ［］．ＧＪ，巧ａｏｇｇｐｙｉｃｉｎｏｅｌａｔｅｓｉｎｔｈｅｇ－ｅｎｕｓ．４／灼幻／，／鬥！／所ｆｒｏｍｔｈｅｎｏｒｔｈｅａｓｔｅｒｎｎｉｔｅｄＳａｅｓｎｄｎａｄａＪ．ＭｉｎＢ１９９４ｇ＾ＵｔｔａＣａａｒｅｉｏｌｏ，，［］ｇｙ４６７－７８１２０３：４．）（４ＡｒｚｕｉＧ．ＳｅｕｅｌＭｌｔＡ．ｆｅｃｔｏｆｍａｒｎｅａｎｉｍａｌｅｘｃｒｅｔｉｏｎｓｎｉｅｒｅｎａｌｒｔ，ＣｅｍｅｎＥｉｏｄｆｆｔｉｏｗｈｏｆ［］ｇｇｈ－ｔｎｋｏｎｓｅｃｉｅｓＩｒｎａｆｎｅｐｙｏｌａｔｐＪ．ＣＥＳＪｏｕｌｏＭａｒｉＳｃｉｅｎｃｅ２００］：８６，ｐ，５８３３９０［］，口）ＢｅｒＧＭＧ＊ｌｉｂｅｎＰＭＬｏｍＭＷｌＯｉｉｇ，．ａｓｅｔａ．ｉａｎｃｎｔｒｏｅｎｕｔａｋｅａｎｄｒｏｗｔｈｂｔｈｅ口，］ｇｇｐｇｙｃｈｒｙｓｏｐｈｙｔｅ如口ＨｏｐＡ幻拼辦ｒｅ＂五ｄｕｒｉｎｇａｂｒｏｗｎｔｉｄｅｅｖｅｎｔ［Ｊ］．ＭａｒｉｎｅＢｉｏｌｏｇｙ，１９９７，－１２９２：３７７３８７．（）ＷＤ３２６Ｂｅｍｚｅｎｒ．ｉｍｉｉｗａＥａｎｄＴａｌｏＥｓｔａｔｉｎｏｒｇａｎｉｃＰ山ｌ之ａｔｉｏｎｂｆｒｅｓｈｔｅｒｌａｎｋｔｏｎｕｓｉｎ「ｐ］［］ｙｇｙｐｇ－ＡＴＰ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆｎｒｃｈ１１：１１８Ｐｌａｎｋｔｏ民ｅｓｅａ９９ｎ（６）２２３巧．，，口］７ＢｅｒｍａｎＴ．Ｄｉｓｓｏｌｖｅｄｏｒｇａｎｉｃｎｉｔｒｏｇｅｎｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｂａｎｉ４？／ｉａ／ｉｂ０ｗｅ？０ｎｂｌｏｏｍｉｎＬａｋｅ［］ｙ／ｎｎｅ－ＫｉｒｅｔＪ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｌａｎｋｔｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ１９９７１９５：巧７５８６．，，（）［］８ＢｅｒｍａｎＴＣｈａｖａＳ．ＡｌａｌｒｏｗｔｈｏｎｏｒａｎｉｃｃｏｍｏｕｎｄｓａｓｎｉｔｒｏｅｎｓｏｕｒｃｅｓＪ．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ［］，ｇｇｇｐｇ［］９９９－Ｐ：１４７．ｌａｎｋｔｏ凸民ｅｓｅａｒｃｈ１．２１８２３１４３、（）ＢｒａｖｅｎＪ，ＥｖｅｎｓＢｕｔｌｅｒＥＩ．ＡｍｉｎｏａｃｉｄｓｉｎｓｅａｗａｔｅｒＪ．ＣｈｅｍｉｓｔｒｙｉｎＥｃｏｌｏ，１９８４，２１）：口］［］ｇｙ（ｎ－２１．．１０ＣｈａｎＦＨＭｃＣｌＭ．Ｇｒｏｗｔｈｒｅｓｏｎｓｅｓｏｆ人ｅｘ幻ｒｔ如！ｗｗ／ｍｎｕｒｔｉ／ｗＤｉｎｏｈｃｅａｓｅａｓ泣［］ｇ，ｅａｎｐ（ｐｙ）ｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｓａｎｄｉｔｒｉａｄｉａｎｃｅＪ．ＭａｒｉｎｅＦｒｅｓｈｗａｔｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ［］，－１９９７３１１７．，：ｒｎｉｔｏｆｕｍｉｃｂｏｕｎｄｎｉｔｒｏｅｎｆｏｒｃｏａｓｔａｌａｎｋｔｏｎ．１１ＣａｒｌｓｓｏｎＧａ巧Ｅ．ＡｖａｉｌａＷｌｉｙｈｇｌｈｙｔｏｐ［］巧ｐ口］Ｅｓｎｅｎｄ４？４４７ｔｕａｒｉＣｏａｓｔａｌａＳｈｅｌｆＳｄｅｎｃｅ，１９９３，３６（５：３３．，）。巧ＣｏｔｎｅｒＪＢ，ＷｅｔｚｅｌＲＧ．Ｕｐｔａｋｅｏｆ出ｓｓｏｌｖｅｄｉｎｏｒｇａｎｉｃａｎｄｏｒｇａｎｉｃｂｐｈｏｓｐｈｏｍｓｃｏｍｐｏｕｎｄｓｋＬ－ｂｈｔｏｌａｎｋｔｏｎ抑ｄｂａｃｔｃｒｉｏｐｌａｎｔｏｎ…？ｉｍｎｏｌｏ如ｄＯｃｅａｎｏｒｈ１９９２３７：２３２ｙｇｙｇ＾乂，。）ｐｙｐ５３ 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孰採营养組对巧孔环胺藻化／／ｎ山ｍｐｗｏｗｍ）生长及产毒水平的影响１０２．ｆｕ－５９ｉＫＳａｌａｋｅＭｅＯＭｃＭａｈｏｎＴｔａｌ．Ｓｒｕｃｕｒｅｓｒａｃｉｌｏｓａ７ａｉｒａｉｄ４ａｎｄ，．．ｔｔｏｆａｚａｓｉｄａｎａ，ｓｃ［］ｊｐｇｐ－ａｚａｓｉｒａｃｉｄ５ｉｉｉｐ．ｃａｕｓａｔｖｅｔｏｘｉｎｓｏｆａｚａｓｐｉｒａｃｉｄｐｏｉｓｏｎｉｎｇｉｎＥｕｒｏｐｅＪ．Ｂｏｓｃｃｎｃｅ．［］Ｂ－ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏａｎｄＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ２００１６５３：７４０７４２．，）ｇｙｙ，（［６０］ＯｈＳＪ、ＹａｍａｍｏｔｏＴ，ＫａｔａｏｋａＹ，ｅｔａｌ．Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｄｉｓｓｏｌｖｅｄｏｒｇａｎｉｃｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｂｙ化ｅｔｗｏＵｉｆｌｌｉｈ）ｘｃｄｉｎｏａｅｌａｔｅｓａｍｃｒｅｗｓｅａｎｄｃｕｗｗｆｗｗＤｎｏｃｅａｅＪ．ｇ／），（ｐｙ［］Ｆ－ｉｓｈｅｒｉｅｓＳｃｉｅｎｃｅ２００２６８２４１６４２４：．，，（）６１ＯｋｏｌｏｄｋｏｖＹＢ．Ｔｈｅｌｏｂａｌｄｉｓｔｒ化ｕｔｉｏｎａｌ打ｅｍｓｏｆｔｏｘｉｃ，ｂｌｏｏｍｄｉｎｏｆｌａｅｌｌａｔｅｓｒｅｃｏｒｄｅｄ［］ｇｐａｇｏｍｔｈｅｕｒＡｒｃ－ｆｒｉｃＪ．Ｈｒｍｆｌｌ２００５４２５１．ＥａｓｉａｎｔａｕＡａｅ．（：３３６９，）［］ｇ６２ＰａｒｋｈＪＰＣｅｍＡＤ．Ｅｅｃｔｓｏｆｎｔｔａｎｒａｎｃｎｒｏｎｏｎｏｗｈａｎｄｉｌｌｂｅｌｌａｆｓａｌｉｉ，ｌｉｈｄｉｎｏｉｉｔｔ、ｙｇｇｅｇｒ［］ｇ－ｔｏｘｅｎｃｔｏｆｅｍａｒｉｎｅｎｏｆｌａｅｌｌａｔｅ４／ｅｔａｎｏｈｅａｓｔｅｒｎａＪ．ｉｇｉｉｙ也ｄｉ，口如山，打ｆ幻巧！口，ｅｗｓｅｆｒｏｍｒｔＣａｎａｄｇ［］ｕｒｎａ－ＪｏｌｏｆＰｌａｎｋ化ｎＲｅｓｅａｒｃｈ１９９９２１５：９３９９５５．，，）（６３ＰｅｒｃｏｐｏＩｉａｎＲＲｔ．ＡｎｅｗｎｌＫ）ｘｉｌｓｅｃｅＤｎｏａｅ，Ｓｏ，ｏｓｓｉ民ｅａｌｃｎｅｔｉａｌｃｚｚｃｒｆ／ｎ／ｗｗｉｓｉ】，ｐｙｐ（ｐｈｙｃｅ）［ｈＭ＊ｆｒｅｄｉｔｅｒｒＳｅａｏ／ｗｍｎｏｖｏｕｒｎａｏｍ乂ｄｅｘ化ｎ９ｌｏｆＰｈｃｏｏ２０１３４９：ｔｅａｎｅａｎ．？Ｊｌ５，ｐ巧口ｙｇｙ，，（）］－＜９５０？６６．［６４］ＰｏｔｖｉｎＥ，ＪｅｏｎｇＨＪＫａｎＮＳｅｔａｌ．ＦｉｒｓｔｒｅｒｔｏｆｔｈｅｈｏＵ）ｓｍｈｅｔｉｃｄｉｎｏｆｌａｅｌｌａｔｅｅｎｕｓ，ｇ，ｐｏｐｙｇｇ／ｆｓａｔＺ／ｎ／ｗ打ＩｉｎＡｅＰａｃｉｆｉｃＯｃｅａｎ：ｍｏｒｈｏｌｏａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｈｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ心。況巧山巧，ｃｆ．ｐｇｙｃａＪ－ｏｕｒｎａｌｏｆＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ２０１２，巧２：１４５１５６．，（）［６５］ＲｅｈｍａｎｎＮ，ＨｅｓｓＰ，ＱｕｉｌｌｉａｍＭＡ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆｎｅｗａｎａｌｏｇｓｏｆｔｈｅｍａｒｉｎｅｂｉｏｔｏｘｉｎａｚａ－ｓｉｒａｃｉｄｉｎｂｌｕｅｍｕｓ化ＩｓＭｔｉｌｕｓｅｄｕｌｉｓｂｙｕｔｒａｒｆｒｍａｕｐ｛ｙｌｅｏｎｃｅｌｉｉｄ）ｐｑｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈ／ｔａｎｄｅｍｍａｓｓｔｔｒＪＲｉｄＣｉｔｉｉｔｇｐｙｓｐｅｃｒｏｍｅｙ［］．ａｐｏｍｍｕｎｃａｏｎｓｎＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｒｙ，２００８２２４４９－５５８：５．，（）［６６］ＳａｌａｓＲ，ＴｉｌｌｍａｎｎＵ，ＪｏｈｎＵ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆ＾之口成ｎｉｗｍ（Ｄｉｎｏｈｃｅａｅｉｎｒｔｉｅｐｙ）ｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｚａｓｉｒａｃｉｄｓｈｅｌｌｆｉｓｈｏｉｓｏｎｉｎｉｎｌｆｕＡｌａｅ１１：４－ｐｐｐｇｍｕｓｓｅｓ［Ｊ］．Ｈａｒｍｌｇ，２０１，０（６）７７７８３．６７ＳａｔａｋｅＭ，ＩｔｏＥ，Ｏｆｉｉｉ氏ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｅｆｅｃｔｓｉｎｍｉｃｅｃａｕｓｅｄｂｙｏｒａｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆ［］ｊｓｕｂｌｅｔｈａｌｄｏｓｅｏｆａｚａｓｐｉｒａｃｉｄａｎｅｗｍａｒｉｎｅｔｏｘｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｍｕｓｓｅｌｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｎ，２００２，４０－：１９３２０３，［６８］ＳａｔａｋｅＭ，ＯｆｕｊｉＫ，ＮａｏｋｉＨ，ｅｔａｌ．Ａｚａｓｐｉｒａｃｉｄ，ａｎｅｗｍａｒｉｎｅｔｏｘｉｎｈａｖｉｎｇｕｎｉｑｕｅｓｐｉｒｏｒｉｎｇａｓｓｅｍｂｌｉｅｓ，ｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＩｒｉｓｈｍｕｓｓｅｌｓ，Ｍｙｔｉｌｉｉｓｅｄｕｌｉｓｉ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌ［］５８ 热贼菅养盐对巧化环胺巧成＞ｉ山ｍｗｗｒｕｍ／／）生长及产毒水平的影响Ｓｏｃ－ｉｅ９９８：．ｔｙ．１，１２０（３８）９９６７９９６８［６９Ｓｈｉｍｉｚｕ乂ＷａｔａｎａｂｅＮＷｒｅｎｓｆｏｒｄＧ．Ｂｉｏｓｍｈｅｓｉｓｏｆｂｒｅｖｄｏｘｉｎｓａｎｄｈｅｔｅｒｏｔｒｏｈｉｃ，ｐ］ｙ＂－－ｍｅ化ｈｏｍｍｎｏｄ．ａｎｄｉｎｉｎｉＪ．Ｐ．Ｌａｓｓｓ．Ａｒｚｕ．ｉｒｄＬｅＤｎｎ．ＰＧｅｎｔｉｅｎｌｓｉＧｕｍｂｒｅｖｅｕ，ＧｌＥＥａｅ，ｙ，［］－１Ｃ．ＭａｒｃａｉＭｏｕ巧ｄｓ．ＨｌＭｉＡｉａｌＢｌｏｏｍｓＬａｖｏｉｓｉｅｒ化ｂｌｉｓｈｉｎＰａｒｉｓ１９９３：３５，ａｒｍｆｕａｒｎｅ、，，）ｇｇ３５７．７０ＳｈｌｌｈａｎｄｉＹＨｕＨＣｏｎＷ．Ｐｏｓｉｔｉｖｅｅｆｅｃｔｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｏｗｎｉｔｒａ化ｅｖｅｓｏｎｒｏｗｔ．［］，ｇｇ－ｈｏｏｓｎｈｅｓ民、ｌｌｈ．Ｐｈｃｏｌｏｃａｌｉｓｏｆ＾口＂如／＂打／口巧！。／它＂‘作ｏｎａｕａｃａｅｓ．ｉｎｏｃｅａｅ）Ｊｉｐｔｙｔ／／／（ＧｙＤｐｙ［］ｙｇ民ｒｃｈ２００５５３￣ｅｓｅａ１：４３４８．，，（）ｌ７ＳｈｕｍｗｌｌｂｎｓｈｅｌｓｈａｎｄａｕａｃｕｋｕｒｅＪ．ＪｏｕｒｎＳＥ．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆａａｌｏｏｍｓｏｌｆｉｑａ巧ｇ［］［。２５－０４ＷｒｌＡｕａｅ山ｔｕｒｅｉｅｔ１９９０．ｏｆ，１２：６１也ｅｏｄｑＳｏｃｙ．）（７２ＳｉｕＧＫＹ．ＹｏｕｎｇＭＬＣ．ＣｈａｎＤＫ０？Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌａｎｄｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ拉ｃｔｏｒｓｗｈｉｃｈｒｅｇｕｌａｔｅ［］ｌｌｌＡｌｕｉｄｏｘｎｒｏｉｏｎｎｔｈｅｄｉｎｏｆａｃａｔｅｅｘａｎｄｒｉｕｍｏｌａｔｏｎｄｎａｍｃｓａｎｔｉｐｄｕｃｔｉｐｐｉｙｇ／－Ｃｉｒｔ．ｃａｅｎｅｌｌａＣＡｓｉｓｉＣｏｎＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＭａｎａｅｍｅｎｔｏｆｏａｓｔａｌＥｎｖｏｎｍｅｎｒｉＰｓｉｃｆｉｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅｇ［ｙ－ｒｌ１７：１１７１４．ＳｐｉｎｒＮｅｔｈｅｒａｎｄｓ９９０ｇｅ，ｈａｔｒｔｈｏｆ７．ｌｉｌｔｒｒｅｎｔｒｔｅｓｔｅａｎｄｂａｃｅｒｉａｏｎｏｗＳｉｖｏｎｅｎＫＥｆｅｃｔｓｏｆｕｅｍｅａｔｕｉａ，ｏｒｔｈｏｐｈｏｐ，ｇ，ｐ，ｇ［引？ｆｌｆｏｎ幻２ｒ奶ｎｓｔｒ？ｖｒｔｌｔｔｉｎｒｏｄｕｃｔ化ｅＷ口ａｉｎｓＡｌｉｅｄａｎｄＥｎｉｏｎｍｅｎａａｎｄｈａｏｏｘｉｏｎｂ梦…ｐｐ巧ｐｙ－ｃ１：．ｒｏｂｉｏｌｏ９９０，５６９２６５８２６６６Ｍｉｇｙ，（）－ｒｆｒｖｔｍｈｔ７ｔｒｆｓｏｎＤＥｌｔｉｃａｃｔｉｉｔｏｆｏｓｅｉｃＳｏ说ｋｅＤＧｕｓ化．ＣｅＵｓｕａｃｅｐｏｔｅｏｙｙｐｈｏｙ［叫７５－ｆｉＭｒ２００３３０２：１１８３．ｄｉｎｏｌａｅｌｌａｔｅｓＪ．ＡａｔｃｉｃｏｂｉａｌＥｃｏｌｏ，，（）ｇ［］ｑｕｇｙ７５ＴａｋｂＨ、ＶａｌｅＰＡｍａｎｈｉｒＲ幻ａｌ．巧ｒｅｔｄｅ化ｃｔｉｏｎｏｆａｚａｓｉｒａｃｉｄｓｉｎｍｕｓｓｅｌｓｉｎｎｏｒｔｈｗｅ巧，，ｐ［］－Ｒ．：１１０７０Ａｆｒ？ａｌｏｆＳｈｅｌｌｆｉｓｈｅｓｅａｒｃｈ２００６２５３）０６７ｉｃａ口Ｊｏｕｒｎ，，（］ｗｔｈｏｆｌｄＰｒａｎｖｅｒａｎＺｅｉｕａｎＥｆｎｉｔｒｏｅｎｓｕｂｓｔｔｅｓｏｒｏｓｅａｒｅ．ｅｃｔｓｏｆｆｏｕｒｇ７ＴｉａｎＹＭｉｎｇｇ，Ｑｇ，ｙ［巧ｊ？ｎ２４６１４６７．ｔｉＡｃａＯｃｅａｎｏｌｏｉｃａＳｉｉｃａ２００２１３：ｉｄｅｓｐｅｃｅｓＪ．ｔｇ＾，（）［］－ｔｄｗｘｉｃｓｅｃｉｌｌｔｅｍｉｓ幻ａｌｉｅｓｉｎｈｅｎｏｆｌａｃａｅ７７Ｔｉ巧ｂａｃｈｔｅｒＭＪｏｈｎＵ．ＡｎｅｎｏｎｔｏｌｌｍａｎｎＵｒ，，ｐｇｇ［］，－ｒｎ１１１：７４８７．ｌｌｏ２０４６ｉ：乂？．ｎｏｖ．ＥｕｒｏｅａｎＪｏｕａｏｆＰｈｃｏ，，）＞４放況ｍ俯／ｏｒｗｍｓｐＵｇｙ（ｌｐｙ邱ＴｉｌｌｍａｎｎＵ，ＥｌｂｒＳｃｈｔｃｒＭ，ＪｏｈｎＵ，ｅｔａｌ．＾之化化７山所ｏＡｅｓｗｗ（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ），ａｎｅｗｎｏｎｔｏｘｉｃ１７巧２０１０４９－：８２．ｔｈｒｏｃｅａｚａｓｒａｃｉｉＰｈｃｏｌｏｇｉａ２１６９１ｓｃｉｅｓｔｅｎｕｓａｔｃ抑ｄｕｉｄｔｏｘｈｓＪ］．，，（）ｐｅｉｎｈｅｐｙｇｐ［ＴｉｌｌｍａｎｎＵＲｂｒａｃｈｔｅｒＭ，ＫｒｏｃｋＢｃｔａｌ．＾之化化《ｗｗｎｎｏｊｗｗｅｎ．ｅｔ？ｎｏｖ．Ｄｉｎｏｈｙｃｅａｅ），巧ｇ巧（ｐ，１７別ｌｆＰｈｌｏ２００９，ｆｉ．ＥｒｏｅａｎＪｏｕｒｎａｏｃｏ，ａｓａｒｉｍａｒｒｏｄｕｃｅｒｏｆａｚａｓｉｒａｃｉｄｔｏｘｉｎｓ阴ｕｉｄｅｎｔｉｅｄｐｙｇｙｐｙｐｐ－．４４０：６３巧（５９ 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＇巧採巧巧站对胜孔环胺巧（Ａ。讯ｍｕｍｐｏｐｏｎ／…）生长及产奉水平的８；响：中国巧学院研巧生院３．岛海洋研巧所．２０１（）９３—晓航冬梅．海洋原甲藻的氮营养生理特征Ｊ．海洋与湖［］黄，史赤潮发生机理研巧［］－沼１９９７２８１：３３３８．，，（）＞９４，．Ｊ．．２０４：４７２４７６，徐铁肖塔玛亚历山大藻的生长研巧水生生物学报０６３０江天久［，（）［］］９５１５１李爱峰韩剛于仁成．原多甲藻酸贝类毒素的研巧进展川，中国水产科学２００８：．，），，（［］－１８３１８７．９６）Ｄ．；李天深．讀、巧营养盐对巧状亚历山大藻（东海株生长和产毒的影响研充青岛［］［］．中国科学研巧生院，２００７（海洋研充所）－一９７．马景刚．ＬＣＭＳ／ＭＳ液相色谱质谱联用同步分析多种脂洛性贝奉的方法及应用［Ｄ］（）［］青岛：中国海洋大学２０１２．，９８巧志军，吴海燕，郭萌萌等．脂洛性贝类奉索安全评价与检测巧术研巧进展ｍ．中国水［］４６７￣４７９产科学２０，１３２：，（）Ｊ９９王朝巧芳徐宁等．大亚湾裸甲巧种群的季节变化与环境条件的关系［．生态学．陈菊，］［］－报２００１２１１１：１８２５１８３２．，，（）．１００王正方张庆卢巧等巧、採、维生素和微＊金属对赤潮生物海洋原甲巧的增宙效应［，，］－１４．东海海洋１９９６３：３３３８，，（）［订王海黎．口大学学报１０１洪华生钦，，黄邦海详环境中溶解有机巧的生物活性初探［化１［］自然科学版）．１９９５，３４（３）：４１６心０．（．甲巧生长和产奉的影巧研究［订１０２杨维东，钟巧，刘洁生等不同路源及浓度对利玛原［］－环巧科学２００８２９１０：２７６０２７６５．，，（）－姚建华．１０３，巧志军，周锥庆，等液相色谱串联质谱法检測贝类产品中的原多甲巧酸贝类［］２０４３－１０２８：６３３６７．巧袁机．色诸，，（）’学ｅｘａｎ加ＭｍＭｍａ／ｍｓｅ）产巧生理学研巧间．巧岛：中国科１０４于仁化塔玛亚历山大巧（人［］院研巧生院（海洋研巧所），１９９８．（如ｍ／ｆｔ／ｍ）生长和巧、ａａｎｃＷｗｍＭ１０５张巧春．巧巧昔巧物质与微生物对谢小亚历山大巧［］２００４．巧产生的影咱［Ｄ］．靑岛：中国科学院研巧生院（海洋研巧巧），．巧１０６张巧春于仁成周名江等．不同巧巧对微小亚历山大藻生长和毒亲产生的Ｒ响ｍ［］，，－洋学化２００６２７６：１３８１４５．，（）一巧浓度对巧绿化襄巧生长１０７张巧林群巧定芳等．不同巧，光合及产巧的影巧［化，［］，，３８＊３。２００６３０３．水生生物学报（）：１，，６１ ＇巧巧营养盐对拍孔环胺汲Ｕａ？況ｍｕｍｐｏｐｏｒｕｍ）生长及户璋水平的响．．１９９１０８张宜辉连玉武巧对赤潮生物塔马亚历山大藻的增殖效应内海洋环境科学９，，，［］２４－２７．１８４：（）［１０９］起冬至．中国典型海域赤潮灾害发生规律［Ｍ］．北京；海洋出版社，２０１０．．Ｄ．１１０钟娜不同氮源和踞源对利玛原甲藻戶ｒａｒｏｃｅＷＭ／ｎ細Ｉ口）生长和产毒影响的研究（［］［］２００７．广州：皆南大学，＊１．戶／１０＾：〇１７？／？心生长和产毒的影１１钟娜．杨维东刘洁生等不同氛源对利玛原甲藻０￡？似，（＞［］２８－响肌环境科学学报２００８６１１８６１１９１．：，，（）６２ ａｎ山ｍｏｒｗｉ的Ｒ响巧煤昔养盐对巧孔环胺巧Ｍｚ況ｐｏｐ）生长及产巧水平致谢、衷屯的感谢我的导师李爱峰副教授在实验指导、论文修改和生活中给予的无私帮助和关怀。李老师求真务实、严谨治学的工作态度和宽厚待人的品格感染着屯、血的李老师致Ｗ崇高的敬，是我工作和学习的榜样我。在此谨向对我付出无数、意和衷屯的感谢！感谢中科院青岛生物能源与过程研究所的白罚利老师在使用分析仪器过程也离冬梅老师Ｌ义及其他老师对我中对我的指导：感谢环境科学与工程学院实验中、：邱江兵孙庚、陈会丹、李美慧和的帮助；感谢本实验室所有兄弟姐妹、范琳一、、张Ｔ玲直Ｗ来的帮助和支持：石超霍梅清、李志伟；感谢其他实验室同学健、黄潇、俞惹博、王朋涛、崔鸿武、夏浩峰和崔开付等的帮助：感谢２０１３级环境工程专业硕±班全体同学两年来对我的陪伴与关怀。，是他们无微不至的关最后，要特别感谢我的家人和朋友对我的支持和鼓励爱帮助我顺利毕业、激励我不断前进！蒋保周２０１５年６月２日６３ 热贼营养盐对腹孔环胺誤Ｍｒａ讯Ｈ山ｍｐｏｐｏｒｕｗ）生长及产毒水平的影响个人简历１９８９年５月６日出生于山东省巨野县。２００９年９月考入华侨大学环境工程专业，２０１３年６月本科毕业并获得工学学±学位。２０１３年９月考入中国海洋大学环境科学与工程学院环境工程专业攻读硕±学位至今。在学期间发表的学术论文及硏究成果１ＡｉＨｕｉｄａｎＣｈＨｉｆ．ＥｆｉｉｉｆｅｎＬＢａｏｚｈｏｕＪｉａｎｅｎａｅ打Ｇｕｅｃｔｏｆｍｅｄｉｕｍｎｕｔｒｔｏｎ［］ｇ，ｇ，，ｇｏ打ｒｏｗｔｈａｎｄａｚａｓｉｒａｃｉｄｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔｗｏ口ｗ／ｗ饥ｏｒｗｍｓｔｒａｉｎｓｉｓｏａｔｅｄｇｐｐ决戶邸ｌｆｒｏｍＣｈｉｎａＳｅａ（撰写中）６４
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