嵌合scfvegfrvⅲ-cd28-cd3ζ受体修饰t细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应

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1、；‘―，ｐ单位代码１０４７５＇学夸１０＂５３１２１０４７分类号Ｒ７３０．５１皆為乂聲硕±学位论文ｓｃＦｖＥＧＦＶＩＩＩ－ＣＤ２８－ＣＤ３民嵌合Ｃ受体修饰Ｔ细胞对胶质瘤细胞的杀伤效应Ｗ学科、专业；临床医学、内科学研究方向：消化系统疾病的基础与临床申请学位类别：医学硕±申请人：李贵珍指导教师：韩双印主任医师二〇—五年五月关于学位论文独创声巧和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕去学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导＂＾又说明、师的指导下独立完成的，除文，对所

2、研究的课题有新的见解。据我所知中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人色经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育一工、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我巧作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。此本人部重７豕诺。在：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负学位申请人（学位论文作者）签名：２０１兵年５月／么曰？关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审板批准授予硕击学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同机意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向

3、国家图书馆、科研信息构、数据收人集机授权构和河本校图书馆等提供学位论文（纸质文本和电子文本）切、供公么检索林、查阅。本描南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可采取影印、缩印、担和採贝等复制手段保存、汇编学位论文（纸质文本和电子文本）。（涉及保密内容的学位论文论在解密后适用本授权书）学位获得者（学位文作者）签矣：是本考２０１５年５月曰＂＾学位论文指导教师签名：马２０１反年５月片曰ThekillingeffectofchimericscFvEGFRvIII-CD28-CD3ζmodifiedTlymphoc

4、ytesagainstgliomacellsADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolOfHenanUniversityinPartialFulfillmentOftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByGuiZhenLiSupervisor:Prof.ShuangyinHanMay,2015摘要背景：脑胶质瘤是成人最常见的原发性恶性脑瘤，尽管其治疗方式有多种，但最大范围的手术切除、放疗和化疗都未能达到满意疗效。这些治疗方式因对正常脑组织和其他组织具有非特异性损伤而

5、受到了限制。传统治疗方式的缺点刺激了新疗法的发展，相比较而言，免疫治疗是一个精确的疗法，能够有效的靶向神经系统肿瘤，减少脱靶效应对正常脑组织导致的间接损伤。大量临床证据已展示免疫治疗在B细胞恶性肿瘤和实体肿瘤等治疗上所具有的潜力。嵌合抗原受体（chimericantigenreceptor，CAR）是一种久经考验的方法，它将特异性抗体的可变区与T细胞的功能结合，表达于T淋巴细胞表面介导其抗原特异性激活，CAR在肾细胞癌、神经母细胞瘤、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病等恶性疾病的治疗中表现出了非凡的潜能，在过去的20多年里，有关CAR的技术发展极其迅速，

6、CAR也已经从实验室转化到胶质瘤的临床治疗中。表皮生长因子受体III型突变体（epidermalgrowthfactorrecepervariantIII，EGFRvIII）表达于脑胶质瘤和其他恶性肿瘤的表面而在正常组织不表达，是靶向治疗的最佳靶点。本实验构建嵌合抗原受体scFvEGFRvIII-CD28-CD3ζ，利用scFvEGFRvIII实现靶向免疫治疗胶质瘤细胞，共刺激分子CD28促进T细胞的扩增，延长T细胞寿命，CD3ζ激活T细胞毒性反应。以慢病毒为载体介导EGFRvIII/CD28-CAR重定向T细胞，+使T细胞特异性识别并杀伤EGFRvIII阳

7、性脑胶质瘤细胞（EGFRvIIIU87MG），是胶质瘤免疫治疗的新思路。+目的：构建第二代慢病毒表达载体pCDH-CD28-CAR；探讨EGFRvIII/CD28-CART细+胞对EGFRvIIIU87MG细胞的体外生物学效应。方法：第一部分①委托公司合成基因片段Hinge-TM-CD28-CD3ζ；将Hinge-TM-CD28-CD3ζ克隆至慢病毒表达载体pCDH-EF1-MCS-T2A-copGFP的BamHI和EcoRI位点，获得的载体被命名为pCDH-CD28-CD3ζ；PCR扩增pCR2.1TOPO中的scFvEGFRvIII基因序列；将scFvE

8、GFRvIII克隆至pCDH-CD28-CD3ζ的E