山羊朊蛋白基因（prnp）调控区转录因子结合位点的筛选

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文山羊朊蛋白基因�PRNP)调控区转录因子结合位点的筛选学位申请人••马梦云指导教师：李祥龙教授周荣艳副教授学科专业：遗传学学位类别：理学授予单位：河北农业大学答辩日期：二•一五年五月三十日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得、河：！匕农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并

2、表示谢意。学位论文作者签名签字R期：>夕"年<月>R学位论文版权使用授权书太孽仿论玄作者完全了解、河d匕农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：%签字曰期：…年《月>闩签字曰期：y•广年r月s闩学位论文作者毕业后去向：电邮is:si工作单位：通讯地址：分类号：Q38单位代码：10086密级：公开学号：2012327

3、山羊朊蛋白基因（PRNP）调控区转录因子结合位点的筛选ScreeningofTranscriptionalReμlationfactorinGoatPriongene(PRNP)学位申请人：马梦云指导教师：李祥龙教授周荣艳副教授学科专业：遗传学学位类别：理学授予单位：河北农业大学答辩日期：二○一五年五月三十日本研究得到国家自然科学基金“山羊朊蛋白基因（PRNP）转录调控因子的筛选与鉴定（31201775）和河北省首批青年拔尖人才支持计划（2013-2015）”资助摘要羊痒病是一种传染性海绵状脑病(TSEs)，是由正常的宿主细胞型朊蛋白构象改变且在中枢神经系统中积累引起的。山羊痒

4、病是由以α螺旋为主的细胞型朊蛋白PrPc转变为富含β折叠的致病型朊蛋白PrPsc引起的。PrPc基因(PRNP)的表达水平是痒病起始、发展和传染的必要条件。关于山羊PrPc表达的转录调控研究尚不够深入。本实验利用生物信息学和比较基因组学对山羊PRNP基因的非翻译区调控序列进行分析；并结合荧光素酶报告基因系统探究山羊PRNP基因的启动子区域。结果将为防控山羊痒病的发生提供重要的理论依据。本实验中，对山羊PRNP基因（GenBank登陆号为EF870890.1）5’侧翼序列和内含子1序列特征进行分析，并对这两个区域进行克隆与鉴定。利用分子克隆和亚克隆策略，构建了山羊PRNP基因包含

5、5’侧翼区和外显子1区域（3776-6107bp）的7个不同长度的缺失重组载体，同时构建了包含内含子1区域（5129-6891bp）的5个不同长度的缺失重组载体，利用双荧光素酶报告系统在SH-SY5Y细胞中检测其活性。结果表明山羊PRNP基因核心启动子区域定位在4570-5171bp（包含外显子1）。对该区域进行转录因子结合位点预测，发现该区域有多个潜在转录因子结合位点，为山羊PRNP基因的关键启动子区。在内含子1区未发现具有启动子活性的区域。对山羊PRNP基因核心启动子区(4570-5171bp)进一步进行缺失，构建了4个pGL3-缺失片段重组载体，利用双荧光素酶报告系统在S

6、H-SY5Y细胞中检测其活性。结果表明核心启动子区存在的4个motif不影响基因启动子的活性。对内含子1进行缺失突变，表明在6002-7220bp内存在抑制基因转录的转录因子结合位点。关键词：PRNP基因；朊蛋白；启动子；转录因子结合位点ScreeningofTranscriptionalReμlationfactorinGoatPriongene(PRNP)Author:MengyunMaSpecializedfield:GeneticsTutor:XianglongLiRongyanZHouAbstractScrapiewasatransmissiblespongiform

7、Encephalopathy,whichwascausedbyconformationconversionofnormalhostcellμlarprionproteinandaggregationincentralnervoussystem.ThegoatscrapiewascausedbytheconformationcoversionofcellarprionproteinPrPc(α-helicalform)topathogenicPrPsc(β-sheet-richisoform)