小反刍兽疫病毒v蛋白拮抗干扰素介导的先天性免疫系统功能位点的确定

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1、Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIdentificationofAmino-acidResiduesintheVProteinofPeste-Des-Petits-RuminantsEssentialforInterferenceandSuppressionofIFN-mediatedInnateImmuneSystemPh.D.Candidate：MaXushengSupervisor：ProfessorCaiXuepengMajor：PreventiveVe

2、terinaryMedicineSpecialty:Animalvaccine&molecularimmunologyMay2015摘要小反刍兽疫（PesteDesPetitsRuminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（PesteDesPetitsRuminantsVirus，PPRV）感染引起的一种高感染性、高致死率疾病。PPRV感染严重损伤宿主动物靶器官，导致巨大的经济损失。目前对于PPRV的发病机制、感染损伤机制以及免疫抑制机制研究不多。本文利用荧光素酶检测发现,过表达西藏毒株PPRVV蛋白能够抑制干扰素的产生和干扰素的信号转导。通过缺

3、失突变技术发现，V蛋白C端对于干扰素的产生起到关键作用。为探明V蛋白的C端抑制干扰素产生的分子机理，进一步采用PPRVV蛋白、V蛋白缺失和单位点突变体共沉淀RLRs通路中的MDA5、RIG-I模式识别受体。结果表明，PPRVV蛋白能够通过其C端的半胱氨酸残基结合MDA5，但对于RIG-I介导的IFN的产生没有影响，同时利用荧光素酶检测发现，V蛋白的C端可利用LGP2模式识别受体的协助，抑制RIG-I介导的IFN的产生。实验研究发现，PPRVV蛋白能够抑制IFN介导的信号转导，利用V蛋白及其突变体，通过荧光素酶检测、免疫共沉淀、pull-down、

4、VSV-GFP感染复制等实验手段，证实PPRVV蛋白的C端抑制STAT2介导的干扰素的信号转导，而PPRVV蛋白的N端却抑制STAT1介导的干扰素的信号转导。深入研究还发现，PPRVV蛋白的C端利用其Cys残基和Trp残基结合STAT2，进而改变STAT2的亚细胞分布；PPRVV蛋白的N端利用Y110位氨基酸残基结合STAT1进而改变STAT1的亚细胞分布。本文深入研究了PPRVV蛋白引起宿主细胞先天性免疫抑制的分子机制，阐明了V蛋白在PPRV抑制RLRs介导的干扰素产生和干扰素介导的信号转导中的作用，为深入了解PPRV感染引起的免疫抑制提供重要

5、的研究基础。关键词：小反刍兽疫病毒V蛋白，黑色素瘤分化分化相关抗原5，干扰素，信号转导和转录因子IAbstractPestedespetitsruminantsdisease(PPRV)isanhighlycontagious,andimmunosuppressivesmallruminantsdiseasecausedbyPPRvirus(PPRV).PPRVinfectioncausesseveredamagesinhostorgans.leadingcauseofdeathamongSmallruminantsincludingbothdo

6、mesticandwild,especiallyingoatsandsheep,alwayscauseseriouseconomicloss.AlthoughPPRV-inducedseveredamagesinhostorganshasbeenestablished,theunderlyingmolecularmechanismofimmunosuppressiveisstillunclear.ByluciferaseassaytheeffectofVproteinofPPRVplaysapivotalroleininterferingwith

7、hostinnateimmunitybyblockingtheproductionofIFNsandIFNssignaling.WerevealedthecriticalroleofPPRVVinhibitsdsRNA-inducedIFNproduction.First,weconfirmedthatPPRVVanditsVCTdeletionmutationscanblockMDA5,notRIG-I,-mediatedIFNproduction.Second,wefoundthatLGP2asapositiveregulatortoinhi

8、bitRLRs-mediatedIFNproductionwhenover-expressionPPRVVprotein.Finally