大豆磷脂酶c家族基因的表达分析、亚细胞定位及转化的研究

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1、分类号：Q5单位代码：10193密级：公开学号：2012204硕士学位论文大豆磷脂酶C家族基因的表达分析、亚细胞定位及转化的研究ExpressionAnalysis，SubcellularLocalizationandTransformationofGmPLCGenesfromGlycineMax作者姓名：邓宇学位类别：理学硕士专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：植物分子生物学与基因工程指导教师：李海燕教授所在学院：生命科学学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢

2、所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和

3、借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要植物的生长发育和新陈代谢受到多种因素的调节和控制，其中最重要的两个因素为遗传因素和环境因素。土壤盐渍化严重影响了农业的发展，因此，探究作物耐盐害的作用机制具有重要意义。磷

4、脂酶C(PhospholipaseC，PLC)能够水解PIP2生成IP3和DAG，IP3和DAG是重要的第二信使分子，IP2+2+3可以促使Ca释放，Ca对植物盐害胁迫后造成细胞内离子毒害的主要因子Na+，K+，Cl-运输起重要作用。本研究分析了大豆GmPLCs家族基因在不同胁迫条件下叶片和根中的表达情况，以及亚细胞定位研究和原核表达实验，构建植物超表达载体pBASTA-GmPLC2，通过农杆菌介导的转化方法将目的基因转化至野生型拟南芥中，为进一步探究GmPLC2基因调节植物抗逆性的机理奠定基础。主要研究结果如下：1.采用实时荧光定量PCR技术分析了在不同组织和不

5、同胁迫条件处理下大豆片和根中GmPLCs基因的表达情况，结果显示：在盐碱，盐，碱，PEG，ABA胁迫下，大豆叶中大多数GmPLCs的表达量变化总体上都呈现先上升、后下降的趋势。在大豆根中大多数GmPLCs基因的表达量总体上也呈现先上升、后下降的趋势。2.将GmPLC2基因通过DNA重组技术构建到pCAMBIA1302载体中，利用农杆菌注射法将GmPLC2转入到野生型烟草叶肉细胞中，通过激光共聚焦显微镜观察，证实GmPLC2定位在细胞膜上。3.将GmPLC2通过基因工程技术构建到pBasta植物超表达载体中，通过花絮浸染法将GmPLC2转入到野生型拟南芥中，共计获得

6、了14株T1代转基因植株。4.通过对T2代拟南芥转基因植株进行分离比鉴定，有3个株系结果显示分离比为3:1，符合孟德尔遗传定律，确定这3个株系为单拷贝转基因株系，为进一步基因功能鉴定的研究提供植物材料。5.将GmPLC2构建到pET-28a(+)原核表达载体上，转化后，成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达，诱导最佳条件为28℃，IPTG500mM，诱导时间4h，并进行GmPLC2蛋白表达产物的Westernblotting杂交分析，为后续GmPLC2蛋白功能鉴定奠定了基础。关键词：大豆，GmPLC，非生物逆境胁迫，亚细胞定位，原核表达IAbstractTh

7、egrowthandmetabolismofplantsaredependentonanumberoffactors,amongwhichthemostsignificanttwoarethegeneticandenvironmentalfactors.Thesalinizationofsoildoesalargeinfluenceonagriculturaldevelopment.Thusthestudyonmechanismoftoleranceforsalinizationofplantsisofgreatimportance.PhospholipaseCc

8、ataly