塑化剂dehp对雄性动物的生殖毒性研究

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1、分类号Q2学校代码10590UDC570密级公开it刎大fSHENZHENUNIVERSITY硕士学位论文塑化剂DEHP对雄性动物的生殖毒性研究申请人姓名秦逍云申请人学号2120180413专业名称生物学导师姓名及职称徐新云教授二O—五年五月四日原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写的作品或成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律后果由本人承担。论文作者签名；^这L冬日期：年左月介曰学位论文版权

2、使用授权书本学位论文作者完全了解深圳大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：研宄生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属深圳大学。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其他机构送交论文的电子版和纸质版，允许论文被查阅和借阅。本人授权深圳大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(涉密学位论文在解密后适用本授权书）论文作者签名：>、11么导师签名：日期：>>丨占年g月今日日期：—矣年t月今日分类号Q2学校代码10590UDC570密级公开深圳大学硕士学位论文塑化剂DEHP对雄性动物的生

3、殖毒性研究学位申请人姓名秦逍云专业名称生物学学院（系、所）生命科学学院指导教师姓名徐新云教授塑化剂DEHP对雄性动物的生殖毒性研究摘要在2011年4月，台湾发生了震惊海内外的起云剂事件：卫生部门在对食品进行抽样检查时，发现“净元益生菌”粉末的检测结果出现异样，经过调查确认，此异样为塑化剂DEHP，其浓度高达600ppm（百万分之一），是来自台湾最大的起云剂供应商-昱伸香料公司所供应的起云剂内。到6月13日，受塑化剂污染的问题企业增加到294家，相关受到影响的产品增加到973种。这起事件在台湾岛内食品界、中国大陆食品界，甚至整个亚洲食品界引起巨大轰动的同时，也

4、将塑化剂这一物质全面地带入人们的视线。塑化剂在工业生产上使用范围较广，其中使用最多应用最广泛的是邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP），到2012年，DEHP在我国的生产量约为400万吨，经检测发现，我国每升地下水中DEHP含量约为100μg,而每千克的沉积物中DEHP含量约为200mg。近年来的文献报道，DEHP有多种毒性作用，其中最主要的就是其生殖毒性。为了探讨DEHP的雄性生殖毒性及其作用机制，我们针对DEHP进行了动物实验，我们设置了对照组（玉米油组）、100mg/kgDEHP低剂量组、500mg/kgDEHP中剂量组和1500mg/kgDEHP

5、高剂量组，采用这4个含不同浓度DEHP的剂量组对40只青春期SD雄性大鼠进行灌胃染毒，根据其体重调节给药量，每天染毒1次，每周5天，共染毒6周。染毒期间观察大鼠的生命活动是否正常，待染毒结束后，用乙醚将大鼠麻醉，称量其体质量，然后迅速摘取其双侧睾丸并记录睾丸湿重，之后取一部分睾丸进行病理与电镜检查，以观察DEHP对大鼠睾丸病理结构及超微结构的影响。另外提取睾丸组织RNA，通过进行实时荧光定量PCR实验，测定2个凋亡基因“Caspase-3、Caspase-8”，6个与激素合成有关的基因“类固醇激素快速调节蛋白（StAR）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD

6、）、17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-HSD）、促性腺激素释放激素（GnRH）及雌激素受体（ERα、ERβ）”共8个基因表达水平的变化，同时提取睾丸组织总蛋白，采用WesternBlot法测定3个相关蛋白“促性腺激素释放激素受体（GnRHR）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）及卵泡刺激素受体（FSHR）”的蛋白表达水平变化。动物实验研究发现：DEHP染毒期间，各组大鼠饮食及生命体征均正常。染毒结束后，各组大鼠间体重及体重增长量均无统计学差异（p>0.05），但是在DEHP高剂量组内，大鼠睾丸湿重及睾丸脏器系数比较对照组均显著降低（p＜0.01），说明D

7、EHP可以通过影I塑化剂DEHP对雄性动物的生殖毒性研究响睾丸正常的生长来影响雄性大鼠的生殖功能。睾丸经HE染色后，普通光学显微镜下观察睾丸病理学的变化，结果显示，DEHP低剂量组支持细胞有轻微程度的脱落。DEHP中剂量组内各级生精细胞减少且排列异常，支持细胞有轻微脱落。DEHP高剂量组可见睾丸生精小管严重萎缩，各级生精细胞大量丧失，支持细胞成空泡状，间质细胞发生异常增生现象，这些说明DEHP可以通过影响睾丸内支持细胞、间质细胞与各级生精细胞而产生雄性生殖毒性功能。电镜检查发现，DEHP低剂量组显示生精细胞的细胞核出现核内包含物，胞质内空泡增多，线粒体轻度肿

8、胀，可见线粒体内出现断嵴、脱颗粒现象，精子细胞头部有