堆肥过程中土霉素含量及四环素类抗性基因tet（c）多样性变化规律

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3、duatenumber：XS291002Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationThevariationofOxytetracyclinecontentandtet（C）genediversityduringcompostingprocessPostgraduate：WangChang-hongSupervisor：ProfessorWangWei-dongMajor：MicrobiologyExploitation

4、andUtilizationResearchdirection：ofBiomassResourcesCollege：LifeScienceandTechnologyDaqingChinaDecember,2015摘要随着畜禽养殖业的快速发展，越来越多的抗生素类药物以药剂或饲料添加剂的形式被广泛的应用于畜禽养殖业中。这些抗生素并不能完全被畜禽吸收，绝大多数的抗生素类药物会以母体化合物或者代谢物的形式随着畜禽粪便排出体外，从而造成了抗生素在畜禽粪便中的积累，进而诱导产生了大量的耐药菌。这些耐药菌含有的抗生素类抗性基因（AntibioticR

5、esistanceGenes,ARGs）不仅可以在不同环境介质中传播扩散，而且还能持久性残留，比抗生素本身对环境的危害要大。堆肥是降解和消除ARGs的有效方法，但ARGs在堆肥过程中的变化分布却不清楚。本研究通过牛粪和树叶堆肥的方式，分析堆肥过程中土霉素（OTC）的含量及四环素类抗性基因tet（C）多样性的变化规律，为阐明ARGs在堆肥过程中的消减机制提供数据支撑，也为减少抗生素的残留及控制ARGs的传播提供理论依据。本研究以牛粪和树叶为主要堆肥原料，经检测牛粪中不含土霉素。试验设置两个处理，-1即处理组（TG）和空白对照（CK）。其中

6、TG的土霉素添加量为60mg·kg，CK不添加土霉素。在堆肥的的0d、7d、14d、28d、63d取样并测其理化参数和土霉素的含量。结-1果显示，TG的土霉素含量在第7d下降到初始含量的一半为32mg·kg，到堆肥结束，土-1霉素含量为2mg·kg。TG和CK温度50℃以上分别持续16d和18d，最高温度分别为62.0℃和61.5℃。TG和CK的pH在整个堆肥过程中均保持在7.5以上。堆肥结束时，两处理含水率变化差异性显著（p<0.05），TG和CK的含水率由初始的70.0%分别下降到28.4%和34.8%。在整个堆肥过程中，TG和CK

7、全碳含量逐渐降低，到堆肥结束，TG和CK全碳含量由初始的36.86%分别下降到26.34%和26.48%，差异性不显著（p>0.05）。TG和CK全氮含量均先升高后降低，然后逐渐升高，到堆肥结束，TG和CK全氮含量由初始的1.59%分别升高到1.86%和2.0%。通过分子克隆技术研究四环素类抗性菌的多样性变化，结果表明，TG和CK两种堆肥过程中，四环素类抗性菌的多样性和种类均有差异。CK的微生物类群主要包括Unculturedbacterium、Salmonellaenterica和Enterococcusfaecalis，随着堆肥的进

8、行CK处理四环素类抗性菌多样性逐渐减少。从堆肥第14d开始，CK的堆体中只能检测到一种四环素类抗性菌。TG的微生物类群主要包括Unculturedbacterium、Salmonellaenterica、E