南疆枣园alternaria属三种病原间的遗传关系研究

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1、南疆枣园Alternaria属三种病原间的遗传关系研究摘要新疆光热资源丰富，干旱少雨，适合于枣树的生长，目前在新疆枣树种植面积已经超过40万2hm，但从2010年以来，枣果实和叶片上的病害发生越来越严重，造成了很大的经济损失，而对造成枣果实和叶片病害病原种类的认识是混乱和不确定性，给该类病害的防治带来了很大的困难。本文从南疆主要枣树种植区采集具有典型症状的枣果和枣叶病害样品，采用常规组织分离法对枣果和枣叶病害的病原菌进行分离和纯化，经致病性测定后，利用形态学鉴定结合ITS、EF-1α、β-tubulin、ATPase基因序列分析方法对分离

2、和纯化的病原菌进行鉴定。通过试验检验RAPD和ISSR两种分析方法是否能作为链格孢属种级鉴定的辅助手段。主要研究结果如下：1、从1号和2号样品中分别获得3种真菌分离物，从3号样品获得2种真菌分离物，从4号样品到12号样品分离纯化共获得9种真菌分离物（每个样品获得一种真菌分离物）。对1-3号样品获得的真菌分离物进行柯赫氏法则验证，结果证明菌株HT224-2、HTKS-3、HTYT-2分别是1-3号样品黑斑病、缩果病和叶斑病的致病菌。2、参照张天宇的研究，根据分生孢子的形状、大小、纵横隔膜数、产孢表型以及喙的有无及其形态特征，再结合ITS、E

3、F-1α、β-tubulin和ATPase基因序列分析，将菌株HTKS-3和HTYT-2鉴定为链格孢属链格孢Alternariaalternata（Fr.：Fr.）Keissler。2+3、建立了链格孢属小孢子种RAPD和ISSR最佳反应体系。25μlRAPD最佳反应体系为Mg浓度为2.00mmol/L，dNTPs浓度为0.15mmol/L，引物浓度为0.60μmol/L，TaqDNA聚合酶用量为2+1.25U；25μlISSR最佳反应体系为Mg浓度为2.50mmol/L，dNTPs浓度为0.10mmol/L，引物浓度为0.30μmol/

4、L，TaqDNA聚合酶用量为1.25U。4、对13个链格孢属小孢子种RAPD多态性标记进行聚类分析，结果表明，在相似系数0.61时，12个Alternariaalternata聚为一类，Alternariatenuissima单独聚为一类，说明RAPD分析可以作为链格孢属种级鉴定的辅助手段；对13个链格孢属小孢子种ISSR多态性标记进行聚类分析，结果表明，在相似系数0.71时，12个Alternariaalternata聚为一类，Alternariatenuissima单独聚为一类，说明ISSR分析可以作为链格孢属种级鉴定的辅助手段。关键

5、词：枣树；枣黑斑病；枣缩果病；枣叶斑病；链格孢属；鉴定；RAPD和ISSR分析StudyonthemolecularphylogeneticrelationshipsofAlternariaisolatedfromJujubeinsouthofXinjiangAbstractThephoto-thermalresourcesisrichinXinjiang,theprominentcharacterofXinjiangisthedroughtandtheprecipitationisalwaysverylittle,it’ssuitabl

6、eforthejujubegrowth,jujubeareahavebeenmorethan20.4millionhm,butsince2010,thejujubefruitsandjujubeleafdiseaseismoreandmoreserious,itcausegreateconomiclosses.Confusionanduncertaintyofjujubefruitandjujubeleafdiseasepathogenspeciesbringthedifficulttocontrol.Thispapercollectet

7、ypicalsampleswiththejujubefruitsandjujubeleafdiseasefromthemainlyproducedjujubedistrictinSouthernXinjiang.Weisolated,purifiedandpreservedthejujubefruitsandjujubeleafdiseasepathogen,afterpathogenictest,morphologicalidentificationandITS,EF-1α,β-tubulinandATPasegenesequencea

8、nalyzemethodswerecombinedtoidentifythemainpathogenforthejujubefruitsandjujubeleafdisease.Thatthr