分月扇舟蛾几丁质酶dsrna转化杨树及其抗虫性的研究

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1、替：喔：響学校代码１０２２５：‘６■学号：Ｓ１５７５－三．］．＾．如嫌诚學学化备文驾薇難章分月扇舟蛾几下质酶ｄｓＲＮＡ转化杨树及其於共抗虫性的研究０？＿．．．＇？？九Ｓ谭嘉琳－Ｖ．：．．’指导教师姓名：景天忠副教授东北林业大学王志英教授东北林业大学申请学位级别：森林保护学；硕±学科专业论文提交日期：２０１５年４月论文答辩日期：２０１５年６月授予学位单位；东北林化火学授予学位日期：２０１５年６月答辩委员会主席：论文评拥人；＇：毒嘿ｍｙ鑛麵被大聲Ｖ１誦

2、題讓議矿打；＞：／；中巧麟，，Ｉ１．＾、＇Ｖ，一．屬皆巧ｒ導．巧，與歡■—．＇－…一ｒ，－、＇，Ｖ，ＶＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｄｅ；１０２２５ＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒＩｎｓｅｃｔＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ乂ｓｓａｏｆＰｏｌａｒＴｒａｎｓｆｂｒｍａｔｅｄｙｐｗｉｔｈＣｈｉｔｉｎａｓｅｄｓＲＮＡｆｒｏｍＣｌｏｓｔｅｒａａｎａｓｔｏｍｏｓｉｓＣａｎｄｉｄａ化：ＴａｎＪｉａｌｉｎＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：

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4、ＲＮＡｉＲＮＡｉｎｔｅｒｅｎｃｅ）作为种重要的基因沉默方式，它在研究生物（基因功能和防治方面得到了广泛的应用和研究。本文对分月扇舟蛾的几下质酶基因进行了克隆，，并根据其基因序列进行了它的生物信息学分析。Ｗ山新杨的叶片作为外植体－－／干涉表达载体班－ｎ构建了几了质酶基因ＣＡ１１２１ＣｈｉｆｉｎｔｒｏＣｈｉｒ，利用根癌农杆菌介导法对山新杨进行遗传转化，并对转化株系进行了筛选、ＰＣＲ检测，饥ｉ基因的表达量的检测，并对其进行了抗虫性的研究，获得了如下主要结果：１、采用ＳＴＥ法提取分月扇舟蛾的ＲＮＡ，并通过反转录获得ｃＤＮＡ，利用ＰＣ

5、Ｒ技术对分月扇舟蛾的几Ｔ质酶基因进行了克隆，并根据其测序的序列对其进行基因的序列分析，了解它的氨基酸组成及含量，对其氨基酸序列进行了保守区和神经肢的预测，并与其氨基酸序列相似的２７种几Ｔ质酶基因进行了多序列对比并作出进化树，构建出几下质酶基因的蛋白质Ｈ级结构模型。２、提化分月扇舟蛾的基因组ＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术克隆得到分月扇舟蛾神经化ＰＢＡＮ基因的第兰个内含子部分序列。Ｗ分月扇舟蛾的ＲＮＡ为模版，利用ＰＣＲ技术克隆得到ＣＷ基因的保守区部分序列，然后将其正向和反向与ｆ公基因内含子基因片段通过酶切一ＵＣ连接转化等系列的操

6、作构建到中间载体Ｐ１９上，并Ｗ卡纳霉素作为筛选基因抗生素－－－的干涉表达载体ｐＢＩ１２１ＣｈｉｆｉｎｔｒｏｎＣｈｉｒ。最后将重组载体成功的导入到农杆茜ＥＨＡ１０５中。３、Ｗ山新杨作为外植体，对其进斤抗生素的敏感性测定，并建立了最佳的遗传转化，通过选择培养狭得了具有目的片段的转基因山新杨植株Ｒ体系，并通过ＰＣ技术最终确定获得了７株具有肖的片段的转基因山新杨植株，通过萊光定量ＰＣ民确定了７种转基因山新杨株系中表达量Ｔ４＞Ｔ７＞Ｔ２＞Ｔ６＞Ｔ５＞Ｔ３＾１．４、对含有ＣＷ基因的ＲＮＡｉ转基因山新杨进行组织培养，扩大繁婚，饲喂

7、分月扇舟蛾通过突光定量ＰＣＲ发现口７／基因含量均降低，转化株系Ｔ３变化最为明显，Ｔ６转基因、株系的变化最小，体重和死。饲喂舞毒蛾发现转基因山新杨株系对舞毒蛾的发育历期亡率均无明显影响。ＲＮＡ关键词分月扇舟蛾，几下质酶，ｉ，转基因，抗虫性ＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｂａｄＴｈｅＣｈｉｔｉｎａｓｅｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔｍｉｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｃｒｕｓｔａ巧ｏｎ，ｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｒｏｃｅｓｓｉｎｉｎｓｅｃｔｓＲＮＡｉＲＮＡｉｎｔｅｒｅｎｃｅａｎｉｍｏｒｔ

8、ａｎｔｗａｏｆｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｗｉｄｅｌｕｓｅｄｐ，ｓａｙ（）ｐｇｇｙａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈ