内毒素导致的肺肾损伤和西洛他唑减轻肺肾损伤的实验研究

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1、内毒素导致的肺肾损伤和西洛他唑减轻肺肾损伤的实验研究Endotoxin-inducedlungandkidneyinjuryandCilostazolattenuateslungandkidneystressresponse作者姓名：胡娱新专业名称：内科学指导教师：马忠森教授学位类别：医学博士论文答辩日期：2015年06月03日授予学位日期：年月日论文评阅人：答辩委员会组成：姓名职称工作单位姓名职称工作单位李振华教授中国医科大学附属第一医院主席李玉林教授吉林大学基础医学院赵立教授中国医科大学附属盛京医院委员孙连坤教授吉林大学基础医学院许力军教授吉林大学第一医院马

2、忠森教授吉林大学第二医院陈珊教授东北师范大学生命科学学院张捷教授吉林大学第二医院张薇教授哈尔滨医科大学附属第一医院李玉新教授东北师范大学董亮主任医师山东大学齐鲁医院安东善教授吉林省人民医院前言前言脓毒症是临床上常见的累及多器官损伤的危重病之一。重度的脓毒症可以导致急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征、急性肾损伤，急性心肌损伤等，最终导致呼吸循环衰竭、多器官功能衰竭，甚至导致死亡。大肠埃希菌感染是临床上常见的导致脓毒症发生的主要因素。本实验通过腹腔内注射LPS的方法，建立小鼠脓毒症模型，通过对脓毒症进展过程中肺脏及肾脏损伤病理、促炎症因子、信号传导通路改变的研究，研究脓

3、毒症炎症损伤的改变情况；通过对西洛他唑减轻脓毒症导致的肺及肾脏损伤的机制的研究，希望为临床治疗脓毒症提供一条新思路、新办法。I中文摘要中文摘要论文题目：内毒素导致的肺肾损伤和西洛他唑减轻肺肾损伤的实验研究专业：内科学作者姓名：胡娱新指导教师：马忠森教授脓毒症，是临床上死亡率较高的疾病之一，在临床各科室尤其是呼吸科、ICU科中发病率很高。临床上导致败血症的细菌有很多种，以大肠埃希菌更为常见，且死亡率很高。脓毒症导致患者死亡的最主要原因是导致急性多器官功能损伤，最终导致多器官功能衰竭死亡。对于脓毒症的发病机制及治疗的探讨目前仍然是国内外研究的热门问题，希望通过对机制

4、的研究，为临床治疗脓毒症提供有效的辅助治疗药物。参与急性炎症的主要细胞成分有中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等。常见的炎症因子有白介素（IL）、肿瘤坏死因子（TNF）、血小板活化因子（PAF）、前列腺素等。血管反应被认为是炎症过程的中心环节。在脓毒症中，中性粒细胞等炎症细胞激活，可导致多种促炎症因子及粘附分子增多，血管通透性增高，白细胞渗出并导致组织水肿和炎症。内毒素导致的炎症反应的主要信号通路有NF-kBpathway，MAPK/ERKpathway等等。NF-kB可与多种基因启动子或增强子部位的kB位点特异性结合，促进基因转录，是炎症反应的主要介质和转录因子。

5、MAPK的持续激活可以导致炎症因子不断产生，诱导“瀑布”效应，引起炎症持续及损伤不断加重。其中较为重要的是p38MAPK信号，它与NF-kBpathway关系密切，是激活NF-kBpathway的主要因素。活化的NF-kBpathwayIII吉林大学博士生学位论文和p38MAPKpathway可以导致炎症因子瀑布式级联反应、氧自由基增多，导致细胞损伤甚至死亡。西洛他唑是常见的一种抗血小板凝集的药物，在近期国内外的很多实验中均证明西洛他唑对于减轻炎症损伤具有重要作用。为了进一步研究LPS诱导的脓毒症进展过程中的炎症改变情况，进一步研究西洛他唑减轻LPS诱导的肺肾损

6、伤的机制，我们以C57小鼠为研究对象，通过腹腔内注射LPS的方法制作脓毒症模型，并通过西洛他唑腹腔内注射的方法进行研究，应用病理及免疫荧光染色、ELISA、WesternBlot等方法进行检测。实验第一部分：对于LPS腹腔内注射导致肺损伤和肾损伤的研究。我们通过腹腔内注射内毒素（LPS）的方法，成功制作了脓毒症的模型。基于不同的研究目的，我们制作了两种模型：为观察组织病理改变，我们制作了第一模型组（低剂量组）：腹腔内注射LPS5mg/kg造模，24小时后处死小鼠并留取组织标本，通过肾组织和肺组织病理染色和冰冻切片的免疫荧光染色，观察内毒素损伤时对于肺组织和肾组织

7、的结构改变的影响；为了研究促炎症因子的变化情况，我们制作了第二模型组（高剂量组），腹腔内注射LPS7.5mg/kg造模，分别于注射LPS6小时和24小时后处死小鼠，收集血液及肺组织及肾组织样本，测定肺组织MPO和血清BUN水平，评价脏器损伤程度变化，通过ELISA方法，测定促炎症因子IL-6和TNF-α的水平变化，通过WesternBlot测定炎症相关因子ICAM-1和VCAM-1、炎症通路ERK激活情况以及Mst-1的变化。通过实验我们发现，在LPS诱导的脓毒症模型早期，病理上主要以炎症细胞浸润为主，炎症细胞透过血管壁向组织内浸润，局部血管上皮及组织细胞损伤，

8、但对于组织整体结构的破坏