人参内生菌分离鉴定及合成纳米银活性分析

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1、分类号：单位代码：10193密级：学号：2010708博士学位论文人参内生菌分离鉴定及合成纳米银活性分析IndentificationofEndophyteandActivityAnalysisofSilverNanoparticlesfromPanaxginseng作者姓名：包京姗学位类别：农学博士专业名称：药用植物研究方向：药用植物高产栽培与育种指导教师：杨世海教授所在学院：中药材学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所

2、列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留

3、送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要人参是我国传统名贵中药材，因其在医学上的良好的治疗作用而为人们所熟知。由于其培养周期长，

4、使用量大，导致人参资源的匮乏。而人参中的内生菌在长期与宿主协同进化的过程中，形成了稳定的共生关系，能产生和宿主植物相同或相似的化学成分，人参内生菌完全可能代替人参而获取到人参中的活性成分。对于人参中内生菌的研究将缓解人参资源匮乏和价格昂贵等诸多弊端。本研究从6年生人参根中分离出14株内生细菌，20株内生真菌，利用形态学和分子生物学方法对获得人参内生菌进行鉴定，内生细菌主要为芽孢杆菌和假单胞菌，分别占43%，29%。内生真菌中镰刀菌为优势种属，占50%。我们的研究结果提示，人参含有种类丰富的内生菌，从人参中可以分离到的内生菌

5、形态各异，与前人研究成果比较，本研究在分离出的内生菌株与其不尽相同，这说明分离人参内生菌还与培养基的选择，培育时间，培养条件，人参所在地微生物情况有着必然联系，值得我们进一步探索。本研究尝试从人参根中分离内生真菌并从中筛选具有合成纳米银能力的内生真菌，进而结合形态学及分子生物学技术对其进行鉴定。鉴定结果显示，本研究中筛选到的具有合成纳米银能力的人参内生真菌为尖孢镰刀菌（FusariumoxysporumSchlecht）。通过电镜观察和XRD曲线：合成的纳米银为球形或近球形的小颗粒，共有192个粒子数，分散性好，粒径小于3

6、00nm，为典型的六面体结构。为了优化反应条件，分别从硝酸银浓度、pH、反应时间、温度等多方面进行研究，最终确定该株尖孢镰刀菌在硝酸银浓度为1mM、pH为7、25℃条件下反应6h纳米银产率最高。本研究采用MTT法检测生物法合成纳米银对肿瘤细胞生存率的影响。Hoechst33342染色和Westernblot方法检测纳米银抗肿瘤活性。结果:纳米银对肿瘤细胞有明显抑制生长作用，并随纳米银浓度的增大促进细胞凋亡作用。通过研究首次发现，人参根中分离的内生真菌具有合成纳米银的能力，进而发现纳米银具有很好的抗肿瘤作用，这为丰富我国人参

7、内生菌的生物功能及作用，以及抗肿瘤药物研究开辟新的思路。关键词：人参，内生菌，纳米银，抗肿瘤IAbstractGinsengisakindofChinesetraditionalmedicine,itsexcellentmedicaltreatmenteffectswaswidlyknownforpeople.Thelongculturetimeandlargeconsumptionleadtotheshortageofginsengresources.Astablesymbiosisofginsenganditsendo

8、phyticbacteriaswasformedinthelongtermprocessofcoevolution,similarchemicalcompositionsweresynthesizedbyginsengendophyticbacterias,sotheactivecomponentsin