亲环蛋白a与传染性法氏囊病病毒vp4互作及其抑制病毒复制的研究

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1、密级；论文编号:中囯农他科学院学位论文亲环蛋白A与传染性法氏囊病病毒VP4互作及其抑制病毒复制的研究CyclophilinAInteractswithViralVP4andInhibitstheEeplicutionofInfectiousBunsalDiseaseVirus硕士研宄生：王念指导教师；祁小乐副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称I兽医培养单位：哈尔滨啓医研究所研究生院2WS年6月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationCyclophilinAInterac

2、tswithViralVP4andInhibitstheReplicationofInfectiousBursalDiseaseVirusM.S.Candidate：WangNianSupervisor：QiXiaoleDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinaryMedicineJune2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育

3、机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目论文作者专业领域研究方向指导教师培

4、养单位（研究所、中心）姓名职称单位专业签名评阅人答辩主席答辩委员会议记录（秘书）论文答辩时间地点摘要鸡传染性法氏囊病（Infectiousbursaldisease,IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV）引起的危害雏鸡的一种急性、高度接触性传染病，也是一种重要的免疫抑制病。IBDV属于双RNA病毒科，禽双RNA病毒属，基因组由A、B两个双股RNA节段组成。A节段包括两个开放阅读框（Openreadingframe,ORF）：小ORF编码非结构蛋白VP5；大ORF编码VP2、VP3和VP4蛋白

5、。B节段编码具有RNA依赖的RNA聚合酶活性的VP1蛋白。VP4是具有蛋白酶活性的非结构蛋白，能够将病毒前体多聚蛋白pVP2-VP4-VP3剪切为pVP2、VP4和VP3，在病毒蛋白成熟过程中起着重要作用，与IBDV感染细胞后形成的微管状结构密切相关，并且参与宿主天然免疫反应。传染病的发生发展是病原和宿主相互作用的结果。对于IBDV侵染宿主的分子机制研究，从病毒角度研究是不全面的，另一个重要的方面就是宿主应答。本研究构建了IBDVVP4诱饵载体，应用酵母双杂交技术，从鸡胚成纤维细胞（Chickenembryofibroblast,CEF）文库中筛选获得

6、了与VP4蛋白相互作用的22个宿主蛋白。其中，亲环蛋白A（CyclophilinA,CypA）是亲环蛋白家族（Cyclophilins,Cyps）重要成员之一，具有肽基脯氨酰基顺反异构酶（Peptidyl-prolycis-transisomerases,PPIase）活性，可作为分子伴侣辅助蛋白折叠，参与炎症、肿瘤、细胞凋亡、免疫应答等多种生理过程，与病毒的关系也极为密切，可参与调节甲型流感、HIV-1、HCV、HBV、SARS、RV等病毒的复制过程。推测CypA在IBDV的侵染过程中也起着重要作用。本研究进一步通过免疫共沉淀（Co-immunopr

7、ecipitation,Co-IP）、GSTpulldown和激光共聚焦试验证实了鸡源CypA与VP4蛋白相互作用。通过构建真核表达载体上调表达CypA、siRNA干扰下调表达CypA，运用westernblot、荧光定量RT-PCR、TCID50测定等方法，从病毒蛋白表达量、基因组拷贝数、病毒滴度三个水平研究了CypA对IBDV复制的影响。结果表明，CypA上调表达对IBDV复制具有抑制作用，CypA下调表达对IBDV复制具有促进作用。这证明，CypA对IBDV的复制具有抑制作用。环孢素A（CyclosporinA,CsA）与CypA的PPIase活

8、性中心特异性结合，常用于CypA的活性研究。在本研究中发现，CsA不能阻断CypA与VP4的相