传染性法氏囊病病毒中等毒力病毒株（ibdvhzv）的生物学特性的研究

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1、摘要传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的急性接触性传染病，是危害世界养禽业的主要传染病之一。用活毒苗和灭活苗免疫鸡群是目前防治IBD的主要方法，但随着IBDV变异株与超强毒株的出现，免疫失败时有发生。本文对一株由分离的野毒株在鸡胚中驯化而成的中等毒力毒株IBDV-HZV株进行研究，期望为IBD的防治提供新的免疫效果好的候选疫苗株。本实验对IBDV-HZV株进行了理化特性的研究，实验结果表明：该毒株病毒液在pH2，作用60rain后ELDso没有显著改变，而在pill2，作用60min后ELDso发生显

2、著的改变，毒株表现出较强的耐酸性和不耐碱的特性；而且该毒株具备较强的耐热性，经60"C水浴30min后ELD50没有显著改变；经氯仿作用后ELD50不发生改变，且该毒株不凝集鸡红细胞，说明该毒株无囊膜。本实验将IBDV-HZV株接种雏鸡，分别从毒株安全性、接种鸡体内抗体的消长和对于强毒攻击的保护率等方面对毒株进行研究。实验结果证明：IBDV-HZV株接种雏鸡是安全、有效的。在实验中，选用市售的IBDV-B87中等毒力活疫苗作为对照，结果显示，IBDV-HZV株在安全性、免疫效力、抗体消长和病变恢复等方面均优于IBDV-B87株。

3、同时，测得IBDV-HZV株的水平传播效果好，而且对雏鸡不造成免疫抑制。所有这些数据均说明，IBDV-HZV株是一株免疫效果较好的候选疫苗株。本实验采集接种IBDV-HZV株病毒液的SPF雏鸡法氏囊，用Trizol试剂提取病毒基因组，根据1BDV基因组序列设计并合成1对特异性引物，以IBDV-HZV株基因组为模板，利用RT-PCR技术扩增出了1．5kb的VP2基因cDNA产物，将PCR产物回收后经EcoRl和Xbal双酶切，再与pUCl9质粒连接，转化到大肠杆菌中进行克隆、测序，将VP2基因序列与其他己发表的毒株序列进行比较，结

4、果显示，IBDV-HZV株与已发表的超强毒株的核苷酸的同源性为99．4％，氨基酸同源性达99．6％，在VP2基因高变区具备所有的体现超强毒株特征的特征性氨基酸，并且两个亲水区和七肽区的氨基酸与超强毒株的完全相同，但IBDV-HZV株具有279N和284T特征性氨基酸，这些参数表明该毒株由超强毒株诱变而来，而且这两个特征性的氨基酸从分子水平上解释了该毒株不适应CEF增殖和致病力下降的特性，也『F是这些特征性氨基酸的突变，使得该毒株在致病力下降的同时仍具有很高的免疫原性，对这些特征性氨基酸的分析结果在证实该毒株的优良性能的同时也为选

5、育优良候选疫苗株提供参考。关键词：传染性法氏囊病病毒；IBDV-HZV株：生物学特性研究；VP2基因克隆；序列分析Studyofthebiologicalcharacteristicsofinfectiousbursaldiseasevirusmedianvirulentstrain(IBDV-HZV)Author：SunXianghuaAdvisor：Professor．YangRnndeMajor：PreventiveVeterinaryMedicineAbstractInfecliousbursaldisease(1BD)

6、，thecausedbyinfectiousbursaldiseasevirus(1BDv)，isoneofmaininfectionsdiseaseintheworld．Inrecentyea6，antigenicvariant1BDVstrainsandveryvirulentIBDVstrains(wlBDV)havebeenemeIgingandcausedconsiderableeconomiclossestothePOultryinduslryaroundtheworld．Thetraditionalinactiva

7、tedorattenuatedvaccinescouldnotprovideefloughpmteclionagainstthesevariantsandwIBDV．Therefore，anewgenerationofmoreeffectiveandsafervaccinesisanticipated．ThepurposeofthisstudywastodevelopanewmedianvirulentstrainⅡIDV—HZVwhatWasisolatedfromFabricinspouchofthesickchickenf

8、locksthroelghdomesticatedofchickenembryostoeffectivelycontrolofIBD．Inthisstudy,PhysicochemicalaffectionofIBDV-HZVstrainWaSmensurale